Navegando por Autor "Pacheco-Soares, Cristina"
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Item Análise de glicoproteínas de superfície e matriz extracelular em esferoides de células tumorais de mama MCF-7 após terapia fotodinâmica(2025-02-04) Pacheco-Soares, Cristina; Ferreira-Strixino, Juliana; Junqueira, Juliana Campos; Santos, Mariela Inês Batista dos; São José dos CamposO câncer de mama é a forma mais comum de câncer entre as mulheres em todo o mundo. Estima-se que haja milhões de casos diagnosticados a cada ano, com um número significativo de mortes relacionadas à doença. No Brasil, o câncer de mama é o segundo mais diagnosticado, ficando atrás apenas do câncer de pele. A incidência é maior em mulheres entre 40 e 60 anos, mas também pode ocorrer em homens, embora em uma proporção muito menor. O diagnóstico precoce é essencial para melhorar as taxas de sobrevivência e oferecer tratamentos menos invasivos. A terapia fotodinâmica (TFD) é uma abordagem terapêutica promissora no tratamento do câncer de mama, esta técnica se baseia na utilização de uma substância fotossensibilizante e uma fonte de luz que gera espécies reativas de oxigênio causando danos permanentes aos compartimentos celulares. Os objetivos do trabalho se baseiam em analisar os efeitos da terapia fotodinâmica em marcadores de células epiteliais e na fisiologia de esferoides de células tumorais de mama MCF-7 e na linhagem não tumoral MCF-10A, além de estabelecer uma metodologia para o cultivo tridimensional de células. Utilizou-se linhagens celulares de câncer de mama (MCF-7), células de tecido mamário saudável (MCF-10A) e linhagem de macrófagos (RAW-264.7). Para a TFD foi utilizado a Alumínio Ftalocianina Tetrasulfonada (AlPcS4) na concentração de 5 µM. mL-1 , com tempo de incubação de 1 h em estufa ao abrigo da luz, o tempo de irradiação foi de 1 minuto e 45 segundos no comprimento de onda de 660 nm. Para os testes foram feitos ensaios de taxa de atividade metabólica (MTT), ensaios de glicosilação para determinar a presença de glicoproteínas como manosamina, galactosamina e glucosamina, além de glicoproteínas de matriz extracelular como laminina e fibronectina. Testes de interação celular entre células e macrófagos, fotografias por microscópio eletrônico de varredura (MEV) e marcação de atividade nuclear e mitocondrial por microscopia confocal. Os resultados demonstram a efetividade da TFD nas células de câncer de mama, no qual a morte celular foi detectada em todos os testes feitos, os resultados foram obtidos por meios quantitativos pelo MTT e qualitativos pelas fotografias feitas em microscopia de fluorescência, confocal e de varredura. Conclui-se que as análises pós TFD dos marcadores celulares demonstraram a significativa redução da atividade de células de câncer. Sendo assim, a TFD é eficaz para a redução da população celular cancerígena.Item Comparison of the Photodynamic Effect of Two Chlorins, Photodithazine and Fotoenticine, in Gliosarcoma Cells(MDPI) Fontana, Letícia Corrêa; Pinto, Juliana Guerra; Magalhães, Jéssica Aparecida; Tada, Dayane Batista; Almeida, Rainara Moreno Sanches de; Pacheco-Soares, Cristina; Ferreira-Strixino, JulianaThe treatment and prognosis of cancers of the nervous system remain unfavorable to the patient, which makes it necessary to study alternative therapies as primary or adjuvant treatments to existing methods. Photodynamic Therapy (PDT) is a method that consists of combining a photosensitizer (PS), a light source at the appropriate wavelength, and molecular oxygen, forming reactive oxygen species (ROS), leading to death in the target cell. The objective of this work was to compare the effects of PDT with two chlorins, Photodithazine (PDZ) and Fotoenticine (FTC), in 9L/lacZ gliosarcoma cell lines. Both chlorins, together with an LED device at 660 nm with a fluence of 10 J/cm2 , were included in the study. It was observed that the response to therapy depends on the concentration and type of PS used. In addition, PDZ showed a higher quantum yield of singlet oxygen generation than FTC.Item Efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana com photodithazine® sobre Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA): estudos em biofilmes e modelo experimental de Galleria mellonella(2022-02-24) Souza, Beatriz Müller Nunes; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Pacheco-Soares, Cristina; Miñán, Alejandro Guillermo; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposInfecções por Staphylococcus aureus são consideradas um grave problema de saúde, gerando altos índices de mortalidade. O tratamento convencional para essas infecções é feito por meio da administração de antibióticos, porém o uso indiscriminado destes fármacos pode selecionar microrganismos resistentes. Por este motivo, é necessário o desenvolvimento de alternativas para a antibioticoterapia, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) que se baseia em um método terapêutico que emprega um fotossensibilizador (FS) e uma fonte de luz com comprimento de onda adequado ao FS, capazes de interagir com o oxigênio molecular formando espécies reativas de oxigênio, responsáveis pela inativação celular. O trabalho teve como objetivo analisar, in vitro e in vivo, a ação da TFDa com Photodithazine® (PDZ) em cepa de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA). Para o método in vitro, o biofilme de S. aureus foi incubado com PDZ nas concentrações de 50 e 75 µg.mL-1 durante 15 minutos e a irradiação foi realizada com as fluências de 25, 50 e 100 J/cm². Foram avaliadas a internalização do FS, a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano, a aderência e a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura, antes e após aplicação da terapia. No método in vivo, inicialmente a cepa foi inoculada em modelos de Galleria mellonella e após a aplicação da TFDa foi analisada curva de sobrevivência, escala de saúde, análise hemócitária e UFC/mL de S. aureus na hemolinfa. Nos resultados in vitro, foi observada a redução bacteriana nas diferentes concentrações de PDZ, destacando os parâmetros de 75 µg.mL-1 de PDZ e 100 J/cm². Já nos resultados in vivo, a TFDa aumentou a sobrevida e estimulou o sistema imune das larvas de G. mellonella infectadas por S. aureus. A TFDa em ambos os métodos foi eficaz, demonstrando o potencial da terapia como uma alternativa no tratamento de infecções bacterianas por MRSA.Item Estresse oxidativo em células SH-SY5Y diante da exposição ao peróxido de hidrogênio(CDRR Editors) Zabeu, Antonieta Marques Caldeira; Rossato, Rafaella Carvalho; Pacheco-Soares, Cristina; Silva, Newton Soares daO estresse oxidativo é consequência da formação excessiva de espécies reativas de oxigênio geradas normalmente pelo metabolismo celular. Essa produção excessiva ocasiona a perda de capacidade de defesa e de reparo, levando a danos nas biomoléculas (DNA, lipídios, proteínas) celulares. Quando estes danos não são reparados, acabam comprometendo o funcionamento da célula, levando-a a morte por apoptose ou necrose. O estresse oxidativo está associado à morte de células neurais como sendo uma das principais causas de doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Alzheimer e doença de Parkinson. O objetivo deste estudo é verificar a ação do peróxido de hidrogênio sendo um modelo de estresse oxidativo em células de neuroblastoma humano. Busca-se analisar a partir de qual concentração ocorre um estresse significante nas células e, em conjunto, verificar esse limiar de concentração em diferentes tempos de ação nas células. Os experimentos realizados compreenderam as análises de atividade mitocondrial obtido por meio do teste de corante tetrazólio (MTT), teste de viabilidade celular utilizando o ensaio de azul de tripano, obtendo-se assim dados quantitativos e qualitativos. Foi possível observar que, a partir da concentração de 0,2 mM durante um intervalo de tempo de 2 horas houve uma diminuição significativa no número de células viáveis em relação ao grupo controle. E, acima dessa concentração, em relação ao tempo, ocorreram mais danos celulares.Item Evaluation of the effect of hydrocortisone in 2D and 3D HEp-2 cell culture(CDRR Editors) Fonseca, Marcelo de Oliveira; Godoi, Bruno Henrique; Silva, Newton Soares da; Pacheco-Soares, CristinaIntroduction: Cancer is one of the diseases with the highest incidence globally and that associated with the patient'semotional state, can act positively or negatively in the treatment. Cortisol is a principal primary stress hormone in the human body. The corticoids can increase cell proliferation and reactive oxygen species that contribute to DNA damage. Prolonged exposure to stress can contribute to tissues becoming insensitive to cortisol, the primary human stress hormone. Objective: This study explores cortisol's influence on tumor cell development, particularly in human cells of carcinoma of the human laryngeal (HEp-2). Methodology: HEp-2 cells were exposed toincreasing cortisol (hydrocortisone) concentrations for 24 or 48 hours, and cytotoxicity (MTT assay) proliferation assay (crystal violet assay), and immunolabeled 3D culture for fibronectin and FAK were analyzed. Results: The group treated with hydrocortisone showed a significant increase in mitochondrial activity, as for the evaluation by the violet crystal, the treated group showed similar behavior to the control. The 3D culture showed dispersed cells within 24hours with reduced FAK labeling; however, no changes were observed within 48 hours. Conclusion: Although some cases favored corticosteroid use in cancer patients, a more detailed analysisis necessary before prescribing them.Item Photobiomodulation assay of muscle cells C2C12 after irradiation with LED device(CDRR Editors) Lima, Elessandro Váguino de; Pacheco-Soares, Cristina; Silva, Newton Soares daIntroduction:One of the ways that have been observed to reduce musculoskeletal fatigue is the use of protocols for the application of light sources (photobiomodulation) such as low-intensity laser and LED (Light Emitting Diode). Work involving photobiomodulation has shown promising results in strength performance or reduction of muscle fatigue. At the cellular level,photobiomodulation can modulate fibroblasts proliferation, the fixation and synthesis of collagen and procollagen, promote angiogenesis and improving energy metabolism in mitochondria. Compared with laser devices, LED has several advantages, such as beingsmaller, lighter, lower cost, and easier for operation. Objective:The present work objective is to verify if irradiation with LED device (650 nm and 860 nm) in muscle cells C2C12 modify the viability, morphology and cytoskeleton components. Methodology:C2C12 cells line (ATCC CRL -1772) were cultured in 25 cm2bottles at 37ºC under 5% CO2in DMEM. The cells wereirradiated with the light-emitting diodes (LED) device, Sportllux Ultra that consists of 84 LEDs, each individual LED has 8 mW of power, emitting in 660±20 nm (42 LEDs) and 850±20 nm (42 LEDs), and covering anarea (A) of 120 cm2. The power density of delivered light was 5,6 mW/cm2, and the exposure time was 10 minutes, totalizing the fluence of 3,4 J/cm2. Viability assay was performed where the cells were incubated with 100 μL of Crystal Violet (CV) solution and mitochondrial activity assay was evaluated by the colorimetric MTT assay. Nucleus (DAPI) and Cytoskeleton (Rhodamine Phalloidin) fluorescence assay was performed to study the cytoskeleton based on the change in the actin filaments. Results:Our results demonstrate that the synergism of LED irradiation (660nm and 850nm) induced the proliferation of C2C12 cells. The light-emitting diode (LED) device, Sportllux Ultra has a significant effect on C2C12 cell culture. Mitochondrial activity and cell viability showed a significative increase in their activities after irradiation. The microscopy fluorescence observations showed an alignment of cytoskeletal components of C2C12 cells after irradiation.Conclusion:The application of irradiation with the Sportlux Ultra LED device stimulated an increase of energy by mitochondrial activity assay, number of cells by cell viability assay and alignment of cytoskeleton components by fluorescence assay in C2C12line cells. Our results suggest that organizated cytoskeletal actin filaments normally contribute to cell survival and that induced major cell changes in the cytoskeleton that result in cell shape change. These results suggest that the Sport Lux Ultra LEDdevice can help in the repair of tissue injuries and to collaborate to increase of performance in athletes in a faster wayItem Photodynamic effect of protoporphyrin IX in gliosarcoma 9l/lacZ cell line(Elsevier B.V.) Fontana, Letícia Corrêa; Pinto, Juliana Guerra; Vitorio, Gabrielle dos Santos; Ferreira, Isabelle; Pacheco-Soares, Cristina; Mamone, Leandro; Ferreira‐Strixino, JulianaPhotodynamic Therapy (PDT) is an oncologic treatment, producing reactive oxygen species (ROS) to induce the death of cancer cells. This study aimed to evaluate the action of PDT on gliosarcoma cells, using protoporphyrin IX as PS by incubation with the precursor aminolevulinic acid (ALA). An LED device was used with a light dose of 10 J/cm². The success of the therapy proved to be dependent on the concentration of ALA, and an incubation time of 4 h required for an effective response. Cell death was prevalent due to necrosis when assessed 18 h post-PDT. ALA proved to be an option to PDT in cells of the 9 L/lacZ, with the protocol tested.Item Specific nanomarkers fluorescence: in vitro analysis for EGFR overexpressed cells in triple-negative breast cancer and malignant glioblastoma(Elsevier) Vieira, Paula Fonseca Antunes; Jesus, Viviane Paula dos Santos; Cândido, Marcela Aparecida; Pacheco-Soares, Cristina; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro JoséBackground: Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR receptor) is encoded by the EGFR gene. EGFR receptor signaling pathways are activated by EGF protein, regulating cell actions. Overexpression of EGFR receptor may be linked to malignancies with a poor prognosis. As a result, EGFR receptor is being studied for a variety of tumor diagnostics, spurring the development of innovative approaches to increase quality and efficiency. Nanomaterials can recognize cancer cells by specifically targeting of molecular pathways, underscoring the importance of nanomedicine. In this study, we synthesized EGFR-specific nanomarkers by functionalizing EGF protein and Chlorin e6 in gold nanoparticles. These nanoparticles use active targeting to deliver EGF protein to EGFR receptor, and Chlorin e6 serves as a fluorescent marker molecule Methods: Nanomarkers were examined in vitro in MDA-MB-468 and M059J cell lines. Confocal microscopy and flow cytometry were used to examine the distribution, uptake, internalization, and fluorescence intensity of nanomarkers in vitro Results: The results show that both lines examined accumulate nanomarkers. However, MDA-MB-468 had the highest intensity due to its EGFR receptor overexpression properties Conclusion: The findings point to ideal properties for detecting EGFR receptor overexpressed cells.Item Viabilidade citotoxicidade pré e pós-tratamento de células SH-SY5Y com laser de baixa intensidade(2022-04-12) Zabeu, Antonieta Marques Caldeira; Silva, Newton Soares da; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Granato, Alessandro Eustáquio Campos; Fraga, Sónia Teixeira; Pacheco-Soares, Cristina; São José dos CamposDe acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), a demência poderá afetar 75 milhões de pessoas em 2030, podendo chegar a 132 milhões em 2050. A demência caracteriza-se pela perda gradual da memória e outras habilidades cognitivas que prejudicam a execução de ações básicas diárias dos indivíduos acometidos, sendo os mais conhecidos a Demência Vascular, Demência com Corpos de Lewy, mal de Parkinson, e a Doença de Alzheimer (DA), a qual sozinha corresponde a 60 – 90 % dos casos de demência. A ciência, atualmente, já tem medicamentos eficientes que retardam o processo degenerativo e outras terapias também são utilizadas para coibir a progressão da neurodegeneração, dentre estas, há a fotobiomodulação. Os efeitos fotofísicos, fotoquímicos e fotobiológicos da Terapia á Laser de Baixa Intensidade (TLBI) ou Diodo emissor de luz (LED) mostram-se eficientes na prevenção e retardo de processos degenerativos. No presente trabalho, busca-se avaliar o comportamento da célula SH-SY5Y, modelo celular para estudos de doenças degenerativas como DA, frente à irradiação com TLBI e observar alterações ocorridas quanto à viabilidade celular, atividade mitocondrial e citotoxicidade. As células foram irradiadas com laser de baixa intensidade (830 nm, 200 mW, spot size 0,1075 cm2, modo contínuo) com energias de 1, 5, 10, 15 e 20 J, em sequência, foram induzidas ao estresse oxidativo por peróxido de hidrogênio e tratadas com TLBI pré e pós-estresse. As avaliações foram feitas pelo ensaio com Cristal Violeta, potencial de membrana mitocondrial, teste MTT, e ensaio de exclusão de células inviáveis pelo azul de tripano para avaliação de citotoxicidade. As análises estatísticas dos resultados foram realizadas por ANOVA Two-way e pós-teste de Tukey. Os resultados obtidos, dentro das condições experimentais e dos parâmetros pré-estabelecidos para o LBI, indicam que foi biomodulador o efeito da fototerapia para a viabilidade celular, não ocorreu morte celular por efeito citotóxico e houve ativação mitocondrial. Conclui-se que dentro das condições experimentais e dos parâmetros pré-estabelecidos para o LBI, as doses de energia entregues ao modelo celular SH-SY5Y que tiveram melhor interação foram 5, 10 e 15 J.