Navegando por Autor "Pinto, Juliana Guerra"

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    Ação da Terapia Fotodinâmica em linhagem celular de gliossarcoma 9L/lacZ utilizando baixas fluências e concentrações de Fotoenticine e Photodithazine
    (2022-03-22) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Tada, Dayane Batista; Vitório, Gabrielle dos Santos; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
    O Gliossarcoma é um câncer agressivo, com alta propensão metastática. Atualmente seu tratamento consiste em ressecção cirúrgica seguida de radio-quimioterapia, oferecendo baixa expectativa e qualidade de vida. Como proposta alternativa, a Terapia Fotodinâmica (TFD) se apresenta como método seletivo de tratamento, combinando o uso de um fotossensibilizador (FS), oxigênio molecular e luz. Esses três elementos geram as espécies reativas de oxigênio, levando à morte celular. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação da TFD utilizando as clorinas Fotoenticine (FTC) e Photodithazine (PDZ) em baixas concentrações e fluências, verificando a diferença entre seus efeitos. Foram utilizadas células 9L/lacZ e concentrações de 1,55 µg.mL -12,50 µg.mL -1 e 50,00 µg.mL-1de ambas clorinas. As células foram irradiadas com um dispositivo a base de LED em 660 nm nas fluências de 1 J/cm², 5 J/cm² e 10 J/cm², em 25 mW/cm². Observou-se que ambas clorinas apresentam indícios da formação de fotoprodutos após irradiação e são internalizadas em toda extensão citoplasmática, com restrição ao núcleo. Os testes de citotoxicidade demonstraram redução >98% da viabilidade celular e queda na atividade mitocondrial >86% nas concentrações de 50,00 µg.mL-1 e 12,50 µg.mL-1 em todas as fluências de luz testadas, entretanto a concentração de 1,55 µg.mL-1não apresentou um resultado tão eficaz na fluência de 1 J/cm². Houve alteração na adesão celular após TFD conforme diminuição da concentração, no qual as células desprendidas se apresentavam mortas, indicando que o desprendimento celular corresponde à uma característica do processo de morte celular, assim como as alterações morfológicas apresentadas, como a perda da extensão citoplasmática, adquirindo formato arredondado. A imunodetecção de HSP70 diminuiu, enquanto a de HSP27 aumentou após TFD com o FTC. Com isso, conclui-se que ambos FS foram eficazes na TFD em células de gliossarcoma, com destaque para a concentração de 50,00 µg.mL-1 na fluência de 5 J/cm². Além disso, levando em consideração a elevada imunodetecção da HSP27 na TFD com o FTC, o PDZ se apresenta como um promissor FS para ser empregado na TFD com células 9L/lacZ, encorajando estudos in vivo.
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    Avaliação da eficácia do LED azul na permeação de ingredientes cosméticos na fibra capilar
    (2023-04-04) Ferreira-Strixino, Juliana; Canevari, Renata de Azevedo; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Lima, Cibele Rosana de Castro; Fugimoto, Priscila Vareschi Cardoso; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
    A luz emissora de diodo (LED) azul apresenta diferentes aplicações clínicas potenciais e tem sido amplamente utilizada com o objetivo de facilitar a permeação de produtos cosméticos na haste capilar com a proposta de intensificar a ação do tratamento cosmético. Entretanto, não foi observado na literatura artigos científicos que avaliem e discutam a interação da irradiação do LED azul e sua influência na permeação de cosméticos no fio de cabelo. A fibra capilar é composta por células mortas e não pode ser renovada biologicamente, a única forma de melhorar as propriedades estruturais da haste capilar é por meio de cosméticos que promovam a manutenção da saúde e beleza dos cabelos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da irradiação do LED azul na permeação de ingredientes cosméticos em fios de cabelos de diferentes etnias e as alterações das propriedades físico-químicas após tratamento com cosmético e LED azul. Para o estudo foram utilizados cabelos virgens do tipo caucasiano, africano e asiático livres de quaisquer tratamentos químicos. Para as análises foram preparadas 6 mechas de cabelo de cada grupo étnico: 1- ?controle? sem tratamento; 2- tratado com cosmético sem enxágue; 3- tratado com cosmético sem enxágue e irradiado com LED azul no modo varredura; 4- tratado com cosmético sem enxágue e irradiado com LED azul no modo pontual; 5- fibra capilar sem tratamento irradiada com LED azul no modo de varredura; 6- fibra capilar sem tratamento irradiada com LED azul no modo pontual. Notou-se que a interação do LED azul é divergente nas diferentes etnias de cabelo. O grupo de cabelo africano irradiado com LED azul no modo pontual e varredura obteve o menor índice de resistência, menor aumento de diâmetro da fibra capilar e permeação de ingredientes cosméticos quando comparado ao grupo tratado com cosmético. Os grupos caucasiano e asiático irradiados com LED azul pontual apresentaram um elevado índice de aumento na permeação de ingredientes cosméticos no fio de cabelo, melhora da resistência e aumento de diâmetro da fibra capilar quando comparado ao grupo tratado com cosmético. Desta forma podemos concluir que a aplicação do LED azul utilizado em uma dosimetria de 9,6 joules contribui com a permeação de ingredientes cosméticos em cabelos asiáticos e caucasianos.
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    Efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana com photodithazine® sobre Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA): estudos em biofilmes e modelo experimental de Galleria mellonella
    (2022-02-24) Souza, Beatriz Müller Nunes; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Pacheco-Soares, Cristina; Miñán, Alejandro Guillermo; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
    Infecções por Staphylococcus aureus são consideradas um grave problema de saúde, gerando altos índices de mortalidade. O tratamento convencional para essas infecções é feito por meio da administração de antibióticos, porém o uso indiscriminado destes fármacos pode selecionar microrganismos resistentes. Por este motivo, é necessário o desenvolvimento de alternativas para a antibioticoterapia, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) que se baseia em um método terapêutico que emprega um fotossensibilizador (FS) e uma fonte de luz com comprimento de onda adequado ao FS, capazes de interagir com o oxigênio molecular formando espécies reativas de oxigênio, responsáveis pela inativação celular. O trabalho teve como objetivo analisar, in vitro e in vivo, a ação da TFDa com Photodithazine® (PDZ) em cepa de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA). Para o método in vitro, o biofilme de S. aureus foi incubado com PDZ nas concentrações de 50 e 75 µg.mL-1 durante 15 minutos e a irradiação foi realizada com as fluências de 25, 50 e 100 J/cm². Foram avaliadas a internalização do FS, a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano, a aderência e a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura, antes e após aplicação da terapia. No método in vivo, inicialmente a cepa foi inoculada em modelos de Galleria mellonella e após a aplicação da TFDa foi analisada curva de sobrevivência, escala de saúde, análise hemócitária e UFC/mL de S. aureus na hemolinfa. Nos resultados in vitro, foi observada a redução bacteriana nas diferentes concentrações de PDZ, destacando os parâmetros de 75 µg.mL-1 de PDZ e 100 J/cm². Já nos resultados in vivo, a TFDa aumentou a sobrevida e estimulou o sistema imune das larvas de G. mellonella infectadas por S. aureus. A TFDa em ambos os métodos foi eficaz, demonstrando o potencial da terapia como uma alternativa no tratamento de infecções bacterianas por MRSA.
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    Synthesis and characterization of photosensitive gelatin-based hydrogels for photodynamic therapy in HeLa-CCL2 cell line
    (Elsevier) Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Pinto, Bruna Cristina dos Santos; Marmo, Vitor Luca Moura; Santos, Kennedy Wallace dos; Beltrame Junior, Milton; Pinto, Juliana Guerra; Ferreira-Strixino, Juliana; Raniero, Leandro José; Simioni, Andreza Ribeiro
    Background: Hydrogel systems are increasingly gaining visibility involving biomedicine, tissue engineering, environmental treatments, and drug delivery systems. These systems have a three-dimensional network composition and high-water absorption capacity, are biocompatible, allowing them to become an option as photosensitizer carriers (PS) for applications in Photodynamic Therapy (PDT) protocols. Methods: A nanohydrogel system (NAHI), encapsulated with chloroaluminium phthalocyanine (ClAlPc) was synthesized for drug delivery.. NAHI was synthesized using gelatin as based polymer by the chemical cross-linking technique. The drug was encapsulated by immersing the hydrogel in a 1.0 mg.mL􀀀 1 ClAlPc solution. The external morphology of NAHI was examined by scanning electron microscopy (SEM). The degree of swelling of the synthesized system was evaluated to determine the water absorption potential. The produced nanohydrogel system was characterized by photochemical, photophysical and photobiologial studies. Results: The images from the SEM analysis showed the presence of three-dimensional networks in the formulation. The swelling test demonstrated that the nanohydrogel freeze-drying process increases its water holding capacity. All spectroscopic results showed excellent photophysical parameters of the drug studied when served in the NAHI system. The incorporation efficiency was 70%. The results of trypan blue exclusion test have shown significant reduction (p < 0.05) in the cell viability for all groups treated with PDT, in all concentrations tested. In HeLa cells, PDT mediated by 0,5 mg.mL􀀀 1 ClAlPc encapsulated in NAHI showed a decrease in survival close to 95%. In the internalization cell study was possible to observe the internalization of phthalocyanine after one hour of incubation, at 37 ◦C, with the the accumulation of PS in the cytoplasm and inside the nucleus at both concentrations tested. Conclusions: Given the peculiar performance of the selected system, the resulting nanohydrogel is a versatile platform and display potential applications as controlled delivery systems of photosensitizer for photodynamic therapy application.
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    Synthesis, characterization, and evaluation of chloroaluminium phthalocyanine incorporated in poly(ε-caprolactone) nanoparticles for photodynamic therapy
    (Elsevier) Pinto, Bruna Cristina dos Santos; Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Marmo, Vitor Luca Moura; Pinto, Juliana Guerra; Raniero, Leandro José; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Beltrame Junior, Milton
    Background: The use of nanotechnology has been widely used in biomedical science, including orthopedic implants, tissue engineering, cancer therapy and drug elution from nanoparticle systems, such as poly-caprolactone (PCL) nanoparticles, which stand out mainly for their biocompatibility, being considered as effective carriers for photosensitizing drugs (PS) in photodynamic therapy (PDT) protocols. Methods: This manuscript describes the synthesis and characterization of PCL nanoparticles for controlled release of the drug chloro-aluminum phthalocyanine (ClAlPc) as a photosensitizer for application in PDT. The PCL-ClAlPc nanoparticles were developed by the nanoprecipitation process. The structure and morphology of the nanoparticles were studied with scanning electron microscopy (SEM) and with Fourier transform infrared (FTIR). The size of nanomaterials was studied using the Dynamic Light Scattering (DLS) method. Photophysical and photochemical characterizations were performed. Subsequently, photobiological studies were also used to characterize the system. Results: The nanoparticles had an average diameter of 384.7 ± 138.6 nm and a polydispersity index of 0.153. SEM analysis revealed that the system formed a spherical shape typical of these delivery systems. Charging efficiency was 82.1% ± 1.2%. The phthalocyanine-loaded PCL nanoparticles maintained their photophysical behavior after encapsulation. Cell viability was determined after the dark toxicity test, and it was possible to observe that there was no evidence of toxicity in the dark, for all concentrations tested. The assay also revealed that adenocarcinoma cells treated with free ClAlPc and in the nanoformulation showed 100% cell death when subjected to PDT protocols. The intracellular location of the photosensitizer indicated a high potential for accumulation in the cytoplasm and nucleus. Conclusions: From the photophysical, photochemical and photobiological analyzes obtained, it was possible to observe that the development of PCL nanoparticles encapsulated with ClAlPc, by the nanoprecipitation method was adequate and that the in vivo release study is efficient to reduce the release rate and attenuate the burst of PS loaded on PCL nanoparticles. The results reinforce that the use of this system as drug delivery systems is useful in PDT protocols.
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    Vaterite submicron particles designed for photodynamic therapy in cells
    (Elsevier) Souza, Eliane de Fátima; Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Pinto, Bruna Cristina dos Santos; Beltrame Junior, Milton; Sakane, Kumiko Koibuchi; Pinto, Juliana Guerra; Ferreira-Strixino, Juliana; Gonçalves, Érica Peterson; Simioni, Andreza Ribeiro
    Background: Calcium carbonate (CaCO3) is one of the most abundant materials in the world. It has several different crystalline phases as present in the minerals: calcite, aragonite and vaterite, which are anhydrous crystalline polymorphs. Regarding the preparation of these microparticles, the most important aspect is the control of the polymorphism, particle size and material morphology. This study aimed to develop porous microparticles of calcium carbonate in the vaterite phase for the encapsulation of chloro-aluminum phthalocyanine (ClAlPc) as a photosensitizer (PS) for application in Photodynamic Therapy (TFD). Methods: In this study, spherical vaterite composed of microparticles are synthesized by precipitation route assisted by polycarboxylate superplasticizer (PSS). The calcium carbonate was prepared by reacting a mixed solution of Na2CO3 with a CaCl2 solution at an ambient temperature, 25 °C, in the presence of polycarboxylate superplasticizer as a stabilizer. The photosensitizer was incorporated by adsorption technique in the CaCO3 microparticles. The CaCO3 microparticles were studied by scanning electron microscopy, steady-state, and their biological activity was evaluated using in vitro cancer cell lines by trypan blue exclusion method. The intracellular localization of ClAlPc was examined by confocal microscopy. Results: The CaCO3 microparticles obtained are uniform and homogeneously sized, non-aggregated, and highly porous microparticles. The calcium carbonate microparticles show an average size of 3 μm average pore size of about 30–40 nm. The phthalocyanine derivative loaded-microparticles maintained their photophysical behavior after encapsulation. The captured carriers have provided dye localization inside cells. The in vitro experiments with ClAlPc-loaded CaCO3 microparticles showed that the system is not cytotoxic in darkness, but exhibits a substantial phototoxicity at 3 μmol.L−1 of photosensitizer concentration and 10 J.cm-2 of light. These conditions are sufficient to kill about 80 % of the cells. Conclusions: All the performed physical–chemical, photophysical, and photobiological measurements indicated that the phthalocyanine-loaded CaCO3 microparticles are a promising drug delivery system for photodynamic therapy and photoprocesses.
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    Zinc pthalocyanine loaded poly (lactic acid) nanoparticles by double emulsion methodology for photodynamic therapy against 9 L/LacZ gliosarcoma cells
    (Taylor & Francis Group) Oliveira Junior, Benedito Marcio de; Teodoro, Jéssica Beatriz Miranda; Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Gonçalves, Érika Peterson; Beltrame Junior, Milton; Marcolino, Luciana Maria Cortez; Pinto, Juliana Guerra; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro
    Development delivery systems, such as nanoparticles, represent a growing area in biomedical research. Nanoparticles (NP) were prepared using a double-emulsion method to load zinc(II) phthalocyanine (ZnPc). NP were obtained using poly (lactic acid) (PLA). ZnPc is a second generation of photosensitizer used in photodynamic therapy (PDT). ZnPc loaded PLA nanoparticles (NPLAZnPc) were prepared by double-emulsion method, characterized and available in cellular culture. The mean nanoparticle size presented particle size was 384.7 ± 84.2 nm with polydispersity index (PDI) of 0.150 ± 0.015, and the encapsulation efficiency was of 83%. The nanoparticle formulations presented negative zeta potential values (27.5 ± 1.0 mV), explaining their colloidal stability. ZnPc loaded nanoparticles maintain its photophysical behavior after encapsulation. Photosensitizer release from nanoparticles was sustained over 168 h with a biphasic ZnPc release profile. An in vitro phototoxic effect in range of 80% was observed in 9 L/ LacZ gliosarcoma cells at laser light doses (10 J cm2) with 3.0 mg mL1 of NPLA-ZnPc. All the physical–chemical, photophysical and photobiological measurements performed allow us to conclude that ZnPc loaded PLGA nanoparticles is a promising drug deliverysystem for PDT.