Navegando por Assunto "Fluorescência"

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    Análise de glicoproteínas de superfície e matriz extracelular em esferoides de células tumorais de mama MCF-7 após terapia fotodinâmica
    (2025-02-04) Pacheco-Soares, Cristina; Ferreira-Strixino, Juliana; Junqueira, Juliana Campos; Santos, Mariela Inês Batista dos; São José dos Campos
    O câncer de mama é a forma mais comum de câncer entre as mulheres em todo o mundo. Estima-se que haja milhões de casos diagnosticados a cada ano, com um número significativo de mortes relacionadas à doença. No Brasil, o câncer de mama é o segundo mais diagnosticado, ficando atrás apenas do câncer de pele. A incidência é maior em mulheres entre 40 e 60 anos, mas também pode ocorrer em homens, embora em uma proporção muito menor. O diagnóstico precoce é essencial para melhorar as taxas de sobrevivência e oferecer tratamentos menos invasivos. A terapia fotodinâmica (TFD) é uma abordagem terapêutica promissora no tratamento do câncer de mama, esta técnica se baseia na utilização de uma substância fotossensibilizante e uma fonte de luz que gera espécies reativas de oxigênio causando danos permanentes aos compartimentos celulares. Os objetivos do trabalho se baseiam em analisar os efeitos da terapia fotodinâmica em marcadores de células epiteliais e na fisiologia de esferoides de células tumorais de mama MCF-7 e na linhagem não tumoral MCF-10A, além de estabelecer uma metodologia para o cultivo tridimensional de células. Utilizou-se linhagens celulares de câncer de mama (MCF-7), células de tecido mamário saudável (MCF-10A) e linhagem de macrófagos (RAW-264.7). Para a TFD foi utilizado a Alumínio Ftalocianina Tetrasulfonada (AlPcS4) na concentração de 5 µM. mL-1 , com tempo de incubação de 1 h em estufa ao abrigo da luz, o tempo de irradiação foi de 1 minuto e 45 segundos no comprimento de onda de 660 nm. Para os testes foram feitos ensaios de taxa de atividade metabólica (MTT), ensaios de glicosilação para determinar a presença de glicoproteínas como manosamina, galactosamina e glucosamina, além de glicoproteínas de matriz extracelular como laminina e fibronectina. Testes de interação celular entre células e macrófagos, fotografias por microscópio eletrônico de varredura (MEV) e marcação de atividade nuclear e mitocondrial por microscopia confocal. Os resultados demonstram a efetividade da TFD nas células de câncer de mama, no qual a morte celular foi detectada em todos os testes feitos, os resultados foram obtidos por meios quantitativos pelo MTT e qualitativos pelas fotografias feitas em microscopia de fluorescência, confocal e de varredura. Conclui-se que as análises pós TFD dos marcadores celulares demonstraram a significativa redução da atividade de células de câncer. Sendo assim, a TFD é eficaz para a redução da população celular cancerígena.
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    Aplicação de bionanossensor para diagnóstico da superexpressão do EGFR in vitro
    (2023-03-07) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Campos, Andrea Porto Carreiro; Vieira, Paula Fonseca Antunes; São José dos Campos
    O Receptor do Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR) é codificado pelo gene EGFR. A superexpressão do receptor EGFR pode estar ligada a malignidades com pior prognóstico e suas vias de sinalização EGFR são ativadas pela proteína EGF, regulando as ações celulares. Como resultado, o receptor EGFR está sendo estudado para uma variedade de diagnósticos de tumores, estimulando o desenvolvimento de abordagens inovadoras para aumentar a qualidade e a eficiência dos exames diagnósticos. Os nanomateriais podem reconhecer células cancerígenas por direcionamento específico de vias moleculares, ressaltando a importância da nanomedicina. Neste estudo, bionanossensores foram sintetizados para detecção da EGFR, pelo processo de funcionalização da proteína EGF e Clorina e6 (Ce6) em nanopartículas de ouro. Essas nanopartículas utilizam o direcionamento ativo para entrega da proteína EGF ao receptor EGFR, e a Ce6 serve como uma molécula marcadora fluorescente. Bionanossensores foram examinados in vitro em linhagens celulares MDA-MB-468 e M059J. A distribuição, absorção, internalização e intensidade de fluorescência dos bionanossensores in vitro foi determinada por Microscopia Confocal e Citometria de Fluxo. Os resultados mostram que ambas as linhagens celulares analisadas acumulam bionanossensores, no entanto, a MDA-MB- 468 possui maior intensidade devido às suas propriedades de superexpressão do receptor EGFR. Os achados apontam para propriedades ideais para a concepção de um diagnóstico inovador, cuja acurácia se dará pela detecção de células superexpressas do receptor de EGFR em estágios precoces do câncer.