Navegando por Assunto "Fotoquimioterapia"
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Item Avaliação da Curcumina na terapia fotodinâmica sobre biofilme de Staphylococcus Aureus resistente à Meticilina: estudo in vitro(2021-10-05) Ferreira, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Ribeiro, Isabelle de Paula; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposO aumento do número de bactérias multirresistentes aos antibióticos em ambientes de prestação de serviços à saúde vem se tornando um problema global de saúde pública. Os biofilmes são estruturas que conferem às bactérias uma maior resistência antimicrobiana. Por isso, os estudos com biofilmes bacterianos tornaram-se objeto de extrema relevância, uma vez que essas estruturas reduzem a penetração dos antibióticos, comprometendo a resposta imunológica do hospedeiro. A terapia fotodinâmica (TFD) é um tratamento que que combina a luz, uma substância fotossensível (FS) e o oxigênio molecular, gerando espécies reativas de oxigênio, levando à morte celular, surge como uma alternativa na inativação desses microrganismos. O objetivo deste trabalho foi avaliar, em estudo in vitro, a ação antimicrobiana da TFD, mediada pela curcumina (Curcuma Longa), em biofilme de cepa Staphylococcus aureus, resistentes à Meticilina (MRSA). Os grupos experimentais foram divididos em Controle, Controle Escuro, Fotossensibilizador (FS), Irradiado (claro), TFD. Os grupos FS e TFD foram incubados com curcumina durante 20 minutos. Em seguida, o grupo TFD foi irradiado utilizando dispositivo de LED em 450 nm, com irradiância de 110 mW/cm2 e fluência de 50 J/cm2. Foram avaliadas a internalização do FS por microscopia confocal, as unidades formadoras de colônia (UFC), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano por meio do Resazurin, a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura (MEV), antes e após a PDT. Os resultados demonstraram que a TFD mediada pela curcumina foi capaz de reduzir o crescimento de biofilme de cepa MRSA, alterar a atividade metabólica e aumentar a produção de ERO. Pela microscopia confocal foi observada a presença da curcumina no biofilme e o MEV demonstrou que a estrutura do biofilme foi alterada após TFD. O estudo mostrou que a TFD é capaz de reduzir o crescimento do biofilme de cepa MRSA, evidenciando a eficácia da curcumina como FS a ser utilizado na TFDItem Comparação de abordagens terapêuticas para gerenciamento de rosácea: estudo clínico(2023-12-13) Ferreira, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Canevari, Renata de Azevedo; Nicolau, Renata Amadei; Tada, Dayane Batista; Santos, Priscilla Fróes Sebbe; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; São José dos CamposA rosácea é uma disfunção estética que apresenta um quadro inflamatório crônico que afeta predominantemente a face. A Terapia Fotodinâmica Tópica (TFD Tópica) combina uma fonte de luz, um fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular presente nos tecidos, gerando uma reação fotoquímica capaz de promover uma destruição tecidual e vascular, levando ao reparo tecidual, estruturando a barreira cutânea comprometida, diminuindo a vascularização excessiva. O procedimento inclui aplicação tópica cosmética de uma substância precursora do FS endógeno, o Ácido-5-aminolevulínico (ALA) e o Metilaminolevulinato (MAL), que são metabolizados no tecido em protoporfirina IX (PpIX). O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da TFD Tópica utilizando-se ALA e MAL a 2% em diferentes grupos associados ao LED âmbar e laser Infravermelho, simultaneamente, para o tratamento de rosácea subtipo I e II. Com aprovação do Parecer Consubstanciado do CEP nº4.539.318, vinte e quatro participantes foram submetidas a três sessões de tratamento, com intervalo de 15 dias entre elas, e avaliação final, 15 dias após a última aplicação. Os parâmetros usados na irradiação, nos grupos TFD Tópica e Fotobiomodulação foram: LED âmbar (590 nm ±10 nm) na fluência de 81 J/cm2 e laser Infravermelho (808 nm ±10 nm) na fluência de 2 J/cm2. No grupo controle foi utilizado cosmético Melan Clean® com aplicações diárias. Foram realizadas análises fotográficas, por fluorescência e termografia. Pode-se inferir que os tratamentos com a aplicação do Melan Clean®, Fotobiomodulação e TFD Tópica, apresentam benefícios no tratamento da rosácea, melhorando o quadro inflamatório e vascular da pele, sendo apresentados pelas análises termográficas e lâmpada de wood. A melhora clínica utilizando TFD Tópica com ALA 2% e MAL 2% associados ao LED âmbar e laser Infravermelho na rosácea é comprovada. Embora a Fotobiomodulação e o Melan Clean®, também tenham apresentado resultados no tratamento da rosácea, a TFD Tópica demonstrou ser uma alternativa melhor para rosácea, uma vez que é capaz de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio molecular gerando uma reação fotoquímica que leva a destruição tecidual, favorecendo a melhora da vascularização e gerenciamento da rosácea modulando o processo inflamatório.Item Efeito antimicrobiano da membrana amniótica isolada e associada à terapia fotodinâmica(2023-03-02) Sant'Anna, Luciana Barros; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Tada, Dayane Batista; Santos, Amanda Cerquearo Rodrigues dos; Ferreira-Strixino, Juliana; São José dos CamposDevido ao avanço da resistência bacteriana aos tratamentos convencionais, a busca por terapias alternativas isoladas ou combinadas, como a utilização da membrana amniótica (MA), produtos antimicrobianos e a terapia fotodinâmica (TFD), vem aumentando a fim de alcançar um controle microbiano eficaz e adequado. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da MA isolada e associada à TFD utilizando a solução de PHTALOX® (PHTX) como fotossensibilizador (FS), frente a biofilmes de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Foram realizados dois experimentos independentes em triplicata dos grupos experimentais: Grupo C+, Grupo L, Grupo PHTX, Grupo TFD, Grupo MA, Grupo MA+L, Grupo MA+PHTX, Grupo MA+TFD. A montagem dos biofilmes foi realizada a partir do preparo de inóculos de S. aureus e P. aeruginosa (108 células/mL), e incubação de 48 horas a 37 ºC. Para obtenção da MA, cinco placentas humanas foram obtidas a partir de cesárias eletivas, após consentimento prévio e todos os exames sorológicos negativos (5.200.827/CEP/2021). Após o processamento e a criopreservação, a MA permaneceu em contato com os biofilmes por 24 horas a 37 ºC, nos grupos que envolviam este tratamento. O FS de estudo foi uma ftalocianina comercial (PHTALOX®), com tempo de incubação de 15 minutos a 37 ºC em ausência de luz. Nos grupos onde se realizou TFD, o tempo de incubação foi seguido de irradiação a partir de um dispositivo com 24 LEDs, com emissão de luz em 660 nm, densidade de potência de 30 mW.cm-², densidade de energia de 50 J.cm-2 e tempo de irradiação de 28 minutos e 18 segundos. Os resultados obtidos foram analisados por meio da contagem de UFC/mL, teste de atividade metabólica por MTT, e análise estatística, considerado estatisticamente significante p<0,05. A internalização do FS foi verificada por meio da fluorescência, e foi também realizado o espectro de absorção, quantificação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e rendimento quântico de oxigênio singleto (1O2) da solução de PHTALOX®. A verificação da integridade da MA foi verificada após os tratamentos por microscópio eletrônico de varredura (MEV). A solução de PHTALOX® apresentou pico máximo de absorção em 228, 333 e 690 nm e baixa fluorescência se concentrando superficialmente nas células bacterianas. Em relação à geração de ERO, foi obtida diferença estatística (p<0,05) nos grupos PHTX e TFD quando comparados ao grupo C+, contudo não foi observada geração de 1O2. Os grupos MA, MA+PHTX, PHTX, TFD e MA+TFD demonstraram diferença estatística (p<0,05) quando comparados ao C+ em relação à diminuição de UFC/mL e da atividade metabólica. Entretanto, não foi observada diferença estatística em relação à diminuição de UFC/mL na análise entre os grupos PHTX e TFD, e, MA+PHTX e MA+TFD. A análise por MEV em ambas as faces da MA demonstrou alterações morfológicas relevantes nos grupos MA+PHTX e MA+TFD, contudo tal alteração não impossibilitou seu efeito antimicrobiano. Com isso, conclui-se que o tratamento isolado com a MA e com a solução de PHTALOX® foram eficazes contra biofilme de S. aureus e P. aeruginosa, e que a associação destes potencializou o efeito antimicrobiano desse tratamento. Contudo, as demais análises apontaram que a fotoatividade da PHTALOX® foi menor do que ftalocianinas encontradas na literatura.Item Efeito da terapia fotodinâmica com azul de toluidina sobre biofilme multiespécie de C. albicans E C. krusei(2023-03-08) Costa, Maricília Silva; Soares, Luís Eduardo Silva; Silva, Carlos Alberto; Rodrigues, Ana Beatriz Furtado; São José dos CamposBiofilmes são agrupamentos de microrganismos que garantem vantagens e alto nível de organização, elevado índice de sobrevivência a condições adversas, além de proteção contra a ação de antimicrobianos e evasão do sistema imunológico. Podem ser formados por uma ou mais espécies, sendo que aqueles constituídos por diferentes espécies são mais resistentes a ação das drogas. Até o presente momento estão disponíveis para terapia convencional um pequeno número de antifúngicos, divididos em três classes: polienos, azóis e equinocandinas. São tratamentos que podem apresentar efeitos colaterais como nefrotoxicidade. A terapia fotodinâmica (TFD) é uma técnica que se baseia na interação da luz com o fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular, acarretando numa reação fotoquímica que gera espécies citotóxicas que promovem morte celular. Há algum tempo vem sendo empregada no tratamento de infecções cutâneas, pois apresenta poucos efeitos adversos para o paciente. Tendo em vista o desafio de tratar infecções causadas por microrganismos resistentes e que estejam acompanhadas de biofilmes, torna-se necessária a busca por tratamentos para infecções com múltiplas espécies, sobretudo que tragam menos riscos. Com isso, o presente estudo visa analisar os efeitos da TFD com azul de toluidina (AT) sobre biofilme multiespécie formado de C. albicans e C. krusei. Para realização dos experimentos as culturas foram cultivadas em ágar Sabouraud e incubadas em estufa bacteriológica por 48h, a 37°C. Após este período, uma amostra de cada espécie foi recolhida e suspensa em solução fisiológica estéril. Como fonte de luz visível foi empregado um diodo emissor de luz (LED) com potência de 0,068 W, iluminando uma área de 0,38 cm², comprimento de onda de 630nm e densidade de energia de 30 J.cm-2, e tempo de irradiação de 2 minutos e 45 segundos. A atividade metabólica do biofilme foi determinada por reação de redução do sal XTT, além de observação ao microscópio. Pode-se concluir que, com base nos dados obtidos no presente estudo, a TFD com AT apresentou efeito sobre o biofilme multiespécie formado, promovendo redução de sua atividade metabólica.Item Efeito da terapia fotodinâmica com curcumina em promastigotas e curcumina nanoencapsulada em amastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania major(2021-09-24) Ferreira, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Sant'Anna, Luciana Barros; Ribeiro, Martha Simões; Tada, Dayane Batista; Marcolino, Luciana Maria Cortez; São José dos CamposA leishmaniose tegumentar é uma doença zoonótica, transmitida por fêmeas de flebotomíneos e causada por protozoários do gênero Leishmania. É considerada pela OMS um problema de saúde pública que nos últimos anos apresentou aumento significativo, tanto no número de casos quanto na distribuição geográfica. O tratamento convencional é tóxico e contraindicado para pacientes que apresentam algumas comorbidades e pode causar diversos efeitos colaterais graves. Tendo em vista uma alternativa de tratamento não agressivo vem se estudando a Terapia Fotodinâmica, que consiste em um tratamento não invasivo, não apresenta efeitos colaterais, de fácil acesso que utiliza substâncias de baixo custo, como a curcumina. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da curcumina livre em promastigotas e curcumina nanoencapsuladas em amastigotas de espécies de Leishmanias. Para isso os promastigotas foram incubados com curcumina livre divididos em grupo escuro e irradiado, além do grupo controle escuro e apenas irradiado. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste de exclusão com azul de tripan, a atividade mitocondrial por MTT, as alterações morfológicas por MEV. Para analisar o tipo de morte celular utulizou-se os marcadores Anexina V e iodeto de propídio e para avaliar o potencial de membrana mitocondrial o JC-1, para isso foram obtidas as imagens por microscopia confocal e a fluorescência emitida pelos marcadores foram quantificadas utilizando o software ImageJ. Para analisar a produção de espécies reativas de oxigênio utilizou-se o reagente H2DCF-DA e a fragmentação de DNA foi verificada pelo teste do cometa. Verificou-se a diminuição da viabilidade dos parasitas bem como alterações na atividade mitocondrial. A TFD provocou alterações no potencial de membrana mitocondrial das duas espécies, independentemente do tempo de análise (imediatamente ou 18 horas após tratamento). A produção de ERO foi concentraçãodependente e foi observada apenas nos grupos submetidos à TFD e a espécie L. braziliensis apresentou maior produção de ERO que L. major, no entanto L. braziliensis foi mais resistente que L. major quando analisada a viabilidade após TFD. Os danos no DNA também foram observados nas duas espécies, é sugestivo que a apoptose prevaleceu na espécie L. braziliensis. A morfologia das células foi afetada, principalmente na concentração mais elevada de curcumina, deixando as células arredondadas e flagelo encurtado. Os resultados apoiam o uso da curcumina como fotossensibilizador na TFD contra células de Leishmania. Foram testadas também nanopartículas de BSA associada a curcumina em amastigotas de L. braziliensis e L. major. Para isso macrófagos e macrófagos infectados com Leishmanias foram incubados com a curcumina encapsulada em BSA catiônica e aniônica. Foram realizados testes de viabilidade pelo método de exclusão com azul de tripan, onde foi verificado que apenas a concentração 0,7 µmol. L1 da BSA-Cur catiônica demonstrou redução na viabilidade das células e as concentrações de 0,1 e 0,08 µmol. L-1 da BSA-Cur aniônica reduziu a viabilidade das células, já a concentração de 0,7 µmol. L-1 foi citotóxica. A análise através da microscopia confocal foi realizada para verificar se as nanopartículas eram internalizadas pelos macrófagos e pode-se verificar que as nanopartículas catiônicas e aniônicas se encontravam dentro dos macrófagos e protozoários. Por fim foi realizado teste de viabilidade com os fibroblastos e verificou-se que as nanopartículas não afetaram a viabilidade dessa linhagem celular, no entanto a curcumina livre promoveu diminuição da viabilidade dos fibroblastos após tratamento. Os resultados obtidos foram satisfatórios, demonstrando a capacidade das nanopartículas reduzirem a viabilidade das células em menores concentrações do que a curcumina livre.Item Efeito da terapia fotodinâmica seriada com curcumina em promastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania amazonenses(2021-08-30) Ferreira, Juliana; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Maciel, Lucas Tobias Rodrigues; São José dos CamposA Terapia Fotodinâmica (TFD) consiste na utilização de uma fonte de luz e um fármaco fotossensível em comprimento de onda adequado e oxigênio molecular desencadeando a morte celular por meio da formação de espécies reativas de oxigênio. Por se tratar de uma terapia utilizada de forma localizada, a TFD mostra-se ideal para doenças cutâneas. A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma protozoose de elevada prevalência mundial que apresenta diferentes evoluções clínicas podendo resultar em ulcerações e lesões desfigurativas em pele e cartilagens. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito in vitro da TFD de forma seriada com duas aplicações utilizando curcumina como fotossensibilizador. Para isto, utilizou-se a concentração de 125 µg.mL-1 de curcumina em cepas de Leishmania braziliensis e Leishmania amazonensis, com fluência de luz de 10J.cm -2e irradiância de 110 mW.cm-2. Os testes realizados foram a análise da viabilidade, pelo teste de exclusão com Azul de Tripan, análise da internalização do FS por Microscopia confocal e as alterações morfológicas, por coloração de Giemsa/MayGrunwald. Observou-se que houve internalização do FS antes da primeira e segunda aplicação de TFD, com mortalidade de 92% e 82% das cepas de L.braziliensis e L. amazonensis, respectivamente, após a segunda aplicação, e indução de alterações na conformação estrutural, como tamanho da célula e não evidenciação de núcleo e flagelo, demonstrando-se que a TFD foi efetiva. Conclui-se que a TFD seriada apresentou-se efetiva na indução de mortalidade in vitro de formas promastigotas de L. braziliensis e L. amazonensis destacando-se assim o seu potencial para tratamento da leishmaniose.Item Efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana com photodithazine® sobre Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA): estudos em biofilmes e modelo experimental de Galleria mellonella(2022-02-24) Souza, Beatriz Müller Nunes; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Pacheco-Soares, Cristina; Miñán, Alejandro Guillermo; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposInfecções por Staphylococcus aureus são consideradas um grave problema de saúde, gerando altos índices de mortalidade. O tratamento convencional para essas infecções é feito por meio da administração de antibióticos, porém o uso indiscriminado destes fármacos pode selecionar microrganismos resistentes. Por este motivo, é necessário o desenvolvimento de alternativas para a antibioticoterapia, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) que se baseia em um método terapêutico que emprega um fotossensibilizador (FS) e uma fonte de luz com comprimento de onda adequado ao FS, capazes de interagir com o oxigênio molecular formando espécies reativas de oxigênio, responsáveis pela inativação celular. O trabalho teve como objetivo analisar, in vitro e in vivo, a ação da TFDa com Photodithazine® (PDZ) em cepa de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA). Para o método in vitro, o biofilme de S. aureus foi incubado com PDZ nas concentrações de 50 e 75 µg.mL-1 durante 15 minutos e a irradiação foi realizada com as fluências de 25, 50 e 100 J/cm². Foram avaliadas a internalização do FS, a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano, a aderência e a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura, antes e após aplicação da terapia. No método in vivo, inicialmente a cepa foi inoculada em modelos de Galleria mellonella e após a aplicação da TFDa foi analisada curva de sobrevivência, escala de saúde, análise hemócitária e UFC/mL de S. aureus na hemolinfa. Nos resultados in vitro, foi observada a redução bacteriana nas diferentes concentrações de PDZ, destacando os parâmetros de 75 µg.mL-1 de PDZ e 100 J/cm². Já nos resultados in vivo, a TFDa aumentou a sobrevida e estimulou o sistema imune das larvas de G. mellonella infectadas por S. aureus. A TFDa em ambos os métodos foi eficaz, demonstrando o potencial da terapia como uma alternativa no tratamento de infecções bacterianas por MRSA.Item Eficácia da terapia fotodinâmica com ácido 5-aminolevulínico e metil 5-aminolevulinato no rejuvenescimento da pele utilizando Led âmbar e infravermelho(2024-05-08) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Canevari, Renata de Azevedo; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; Pedroso, Juliana Teixeira; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposA pele é a principal barreira de defesa do organismo humano, atua na homeostase corporal, proteção contra microrganismos, substâncias e radiações, prevenção de perda excessiva de água, produção de vitamina D e influencia fatores psicossociais. O envelhecimento intrínseco da pele, pode acarretar a perda ou redução de muitas dessas funções, podendo ser ainda mais acentuado na pele fotoenvelhecida. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica não invasiva usada no tratamento de câncer, infecções microbianas, lesões pré-cancerosas e para fins estéticos da pele. Pesquisas sobre a atividade da TFD tópica sugerem efeitos antibacterianos, anti-inflamatórios e imunomoduladores em queranócitos, fibroblastos, glândulas sebáceas e folículos pilosos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi comparar a eficiência da TFD na redução dos sinais de fotoenvelhecimento, com ácido 5-aminolevulínico (ALA) e metil 5-aminolevulinato (MAL) a 2% e luz de LED âmbar (590 +/- 10 nm) e laser infravermelho (808 nm +/- 10 nm) associados em mulheres entre 40 e 55 anos. Além disso, objetiva-se identificar o tempo ótimo de incubação dos fármacos e quantificar a produção de protoporfirina IX (PpIX) e avaliar alterações nos sinais de fotoenvelhecimento após a TFD. As participantes recrutadas foram submetidas ao protocolo clínico por quatro sessões com intervalo de aproximadamente um mês. A análise de produção de PpIX foi realizada pela conversão de imagens do evidenciador Lince em histogramas de cor e a documentação fotográfica foi analisada qualitativamente quanto aos sinais de fotoenvelhecimento. A TFD se mostrou eficiente no rejuvenescimento facial, demonstrando redução de linhas finas, suavização de rugas, maciez e firmeza da pele e melhora da flacidez. Dentre os fármacos, o efeito maior de rejuvenescimento foi atribuído ao ALA, a concentração de 2% e a interação com os comprimentos de onda âmbar e infravermelho associados permitiram que tais resultados fossem atingidos com efeitos colaterais mínimos.Item Nanopartículas polieletrolíticas de poli(ácido lático-co-ácido glicólico) contendo um derivado de ftalocianina para aplicação em terapia fotodinâmica(2020-07-08) Toledo, Maria Cristina Modesto Clementino de; Simioni, Andreza Ribeiro; Goncalves, Erika Peterson; Sakane, Kumiko Koibuchi; Liu, Andréa Santos; São José dos CamposA Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade alternativa para tratamento de tecidos neoplásicos, que se baseia na administração de um fármaco fotossensível e irradiação de luz em um comprimento de onda adequado, visando localizar e destruir a célula alvo do tratamento, a partir da formação de espécies reativas de oxigênio. A tecnologia de nanoencapsulação se apresenta como uma ferramenta para incorporação de substâncias bioativas,visando melhorar a sua solubilidade em ambiente fisiológico, obter um maior tempo de circulação no organismo, administração de menores dosagens e a minimização de efeitos colaterais. O presente trabalho visou o desenvolvimento de nanopartículas depoli(ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA)revestidas com camadas de filmes de polieletrólitos para o encapsulamento da zinco ftalocianina tetrassulfonada (ZnPcSO4), como modelo de substância bioativa. As nanopartículas de PLGA foram produzidas pela técnica de dupla emulsão/evaporação do solvente e o recobrimento polieletrolítico foi realizado utilizando o hidrocloreto de poli-alilamina(PAH)como um policátion fraco e o poli-(4-estireno sulfonato de sódio)(PSS)como um poliânion forte pela técnica de automontagem camada por camada (conhecida como layer-by-layer-LbL)As nanopartículas de PLGA revestidas por polieletrólitos apresentaram diâmetro médio de 384,7 ± 138,6 nm, tamanho de distribuição restrito com um índice de polidispersidade de 0,180. A mudança óbvia do potencial zeta indica alternância bem-sucedida na deposição do policátion (PAH) e do poliânion (PSS) diretamente nas nanopartículas de PLGA.A análise por microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostrou que o sistema formado apresenta morfologia esférica, típica destes sistemas de liberação. A eficiência de carregamento foi de 82,1% ± 1,2%. As nanopartículas polieletrolíticas carregadas com a ftalocianina mantiveram seu comportamento fotofísico após o encapsulamento. A viabilidade celular foi determinada, obtendo-se 90% de morte celular. Todas as caracterizaçõesfísico-químicas, fotofísicas e fotobiológicas indicaram que as nanopartículas polieletrolíticas carregadas com a ftalocianina são um sistema promissor de administração de medicamentos para terapia fotodinâmica e fotoprocessos .Item Nanosistemas de entrega de fármacos à base de hidrogel para Terapia Fotodinâmica(2022-02-18) Simioni, Andreza Ribeiro; Gonçalves, Érika Peterson; Oliveira, Ivone Regina de; Moura, Marigilson Pontes de Siqueira; Ambrosio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Raniero, Leandro José; São José dos CamposOs sistemas hidrogéis recebem cada vez mais visibilidade em inúmeras áreas envolvendo a biomedicina, a engenharia de tecidos, tratamentos ambientais e a liberação modificada de fármacos. Estes sistemas apresentam composição em rede tridimensional e alta capacidade de absorção de água, e são em sua maioria formados de materiais poliméricos, o que agrega características de biocompatibilidade aos mesmos, permitindo que se tornem uma opção como carreadores de fotossensibilizadores (FS) para aplicação em tratamentos envolvendo a Terapia Fotodinâmica (TFD). A TFD é uma técnica de tratamento que tem como base a administração de um FS, que na presença de luz em comprimento de onda adequado é excitado e transfere energia para o oxigênio molecular, gerando espécies reativas (ROS), como o oxigênio singlete, que é capaz de causar a morte celular no alvo do tratamento. O objetivo do trabalho foi sintetizar um sistema xerogel, incorporado com Cloro Alumínio Ftalocianina (ClAlPc), para aplicação como sistema de liberação modificada (DDS) utilizando os protocolos da TFD. O xerogel foi sintetizado usando gelatina como polímero base pela técnica de reticulação química. A incorporação do fármaco foi realizada por imersão do xerogel em solução de ClAlPc 1,0 mg.mL-1 . A morfologia externa do xerogel foi examinada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foi avaliado o grau de intumescimento do sistema sintetizado para determinação do potencial de absorção de água. O sistema xerrogel produzido foi caracterizado por técnicas térmicas, calorimétricas, fotoquímicas, fotofísicas e fotobiológicas. As imagens da análise de MEV apontaram a presença das redes tridimensionais na formulação. O teste de intumescimento demonstrou que o processo de secagem do sistema aumenta a sua capacidade de retenção de água. Todos os resultados espectroscópicos mostraram excelentes parâmetros fotofísicos e fotoquímicos do fármaco estudado quando veiculado no sistema xerogel. A eficiência de carregamento foi de 70 %. As curvas de TGA e DSC apresentaram comportamento semelhante ao da gelatina. Em células HeLa, TFD mediada por 0,5 mg.mL -1 hidrogel – ClAlPc mostrou uma diminuição na sobrevida próxima a 95%, demostrando o efeito fotodinâmico ocasionado pela aplicação dos protocolos de TFD. Com base nos resultados obtidos, é esperado que a utilização de xerogel a base de gelatina veiculado com a ClAlPc possa ser um adjuvante promissor no tratamento de neoplasias baseadas na aplicação de protocolos da TFD, contribuindo para o desenvolvimento científico e tecnológico do país com potencial grau de inovação e impacto na sociedade.Item Preparação e caracterização de nanopartícula polieletrolítica de BSA como sistema de liberação para compostos ativos em terapia fotodinâmica(2020-04-30) Simioni, Andreza Ribeiro; Gonçalves, Érika Peterson; Sibelino, Sônia Khouri; Liu, Andréa Santos; Mazzilli, Mariana Ribeiro Farah; São José dos CamposEste trabalho descreve a síntese e caracterização de nanopartículas polieletrolíticasde albumina sérica bovina(BSA) para liberação controlada utilizando a ftalocianina de silício di-hidróxido [SiPc(OH)2] como modelo de fotossensibilizador para aplicação em Terapia Fotodinâmica (TFD). As nanopartículas de BSA foram preparadas pelo processo de dessolvatação em um passo e o sistema nanoparticulado foi recoberto com polieletrólitos utilizando o poli-(4-estireno sulfonato de sódio) como um poliânion forte e o hidrocloreto de poli-alilamina como um policátion fraco pela técnica de automontagemcamada por camada(conhecida como layer-by-layer-LbL). O sistema nanoparticulado funcionalizado com a camada de biofilme polieletrolítico apresentou um diâmetro hidrodinâmico médio de volume de 226,9 ± 88,74 nmcom índice de polidispersividade de 0,153. Amudança do potencial zeta indica alternância bem-sucedida na deposição do policátion PAH e do poliânion diretamente nas nanopartículas de BSA. A investigação de liberação de drogas in vitroconstatou que a bicamada de polieletrólito depositada via LbL é muito eficiente na redução da taxa de liberação inicial (burstinicial) para os medicamentos carregados nas nanopartículas de BSA. A atividade fotobiológica para o sistema nanoparticuladofoi avaliada em linhagem celular de melanoma murinho de camundongo (B-16). Os estudo in vitromostraram que o sistema não é citotóxico no escuro, mas exibe uma fototoxicidade substancial quando combinadosna proporção de1,2mol.L-1de fotossensibilizadorencapsulado e 10,0 J.cm-2de luz. Estas condiçõessão suficientes para matar cerca de 90% das células. Os resultados demonstram que a adsorção do fotossensibilizador nas nanopartículas de BSA juntamente com a montagem camada a camada de polieletrólitosfornece uma forma de fabricação de materiais nanoestruturados biocompatíveis,que visam a sua utilização como biomaterial para aplicação em Terapia Fotodinâmicae visandocontribuir para o aprimoramento tecnológico e científico do país em área inovadora e com potencial elevado de impacto social.Item Síntese de nanopartícula de ácido poliláctico (PLA) por dupla emulsificação para aplicação em fotoprocessos(2021-04-05) Simioni, Andreza Ribeiro; Costa, Maricília Silva; Vieira, Lúcia; Liu, Andréa Santos; Oliveira Junior, Benedito Marcio de; Ferreira, Juliana; São José dos CamposA Terapia Fotodinâmica (TFD) é proposta como um procedimento terapêutico promissor minimamente invasivo que emprega três elementos essenciais para induzir a morte celular: um fotossensibilizador, luz de um comprimento de onda específico e oxigênio molecular. Os fotossensibilizadores clássicos usados no protocolo de TFD apresentam algumas desvantagens que limitam sua aplicação clínica, como a baixa solubilidade em meio aquoso. O uso da nanotecnologia tem sido considerado, uma vez que fornece muitas ferramentas que podem ser aplicadas à TFD para contornar essas limitações e trazer novas perspectivas para a aplicação desta terapia para diferentes tipos de doenças. Neste trabalho, nanopartículas de poli (ácido lático) (PLA) foram desenvolvidas para encapsular a zinco ftalocianina (ZnPc), um fotossensibilizador hidrofóbico, utilizado em TFD. O método de emulsificação dupla foi aplicado para produzir nanopartículas de NPLA-ZnPc que foram caracterizadas por medidas de estado estacionário, tamanho de partícula, potencial zeta, espalhamento dinâmico de luz, morfologia, eficiência de carregamento e liberação de fármaco. Na sequência, estudos in vitro foram realizados com e sem luz, conforme descrito pelos protocolos de TFD, utilizando células de gliossarcoma (9 L/LacZ) como modelo biológico, para avaliar o fotodano do fotossensibilizador quando incorporado na formulação polimérica. O tamanho médio das nanopartículas apresentadas foi de 384,7 ± 84,2 nm, com índice de polidispersidade (PDI) de 0,150 ± 0,015 nm, e a eficiência de encapsulação foi de 83%. As formulações de nanopartículas apresentaram valores de potencial zeta negativos (- 27,5 ± 1,0 mV), explicando sua estabilidade coloidal. Os parâmetros fotofísicos característicos foram analisados: o perfil do espectro de absorção mostra que o fotossensibilizador carregado nas nanopartículas não sofre alteração em suas propriedades fotofísicas após o processo de encapsulamento. Um perfil de liberação sustentada ao longo de 168 h foi obtido, com um perfil de liberação de ZnPc bifásico. Um efeito fototóxico in vitro na faixa de 80% foi observado em células de gliossarcoma 9 L/LacZ em doses de luz laser (10 J.cm-2) com 3,0 µg.mL-1 de ZnPc. A ZnPc carregada nas nanopartículas poliméricas apresentou estabilidade física adequada, boas propriedades fotofísicas, perfil de liberação sustentada e atividade in vitro adequada para ser considerada uma formulação promissora para TFD. Com base nos resultados obtidos, é esperado que a utilização de nanopartículas de PLA encapsuladas com ZnPc possa ser um adjuvante promissor no tratamento de neoplasias baseadas na aplicação de protocolos utilizando TFD, sendo que este modelo de sistema de liberação para aplicações em TFD visa contribuir para o aprimoramento tecnológico e científico do país em área inovadora e com potencial elevado de impacto social.Item Synthesis and characterization of photosensitive gelatin-based hydrogels for photodynamic therapy in HeLa-CCL2 cell line(Elsevier) Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Pinto, Bruna Cristina dos Santos; Marmo, Vitor Luca Moura; Santos, Kennedy Wallace dos; Beltrame Junior, Milton; Pinto, Juliana Guerra; Ferreira-Strixino, Juliana; Raniero, Leandro José; Simioni, Andreza RibeiroBackground: Hydrogel systems are increasingly gaining visibility involving biomedicine, tissue engineering, environmental treatments, and drug delivery systems. These systems have a three-dimensional network composition and high-water absorption capacity, are biocompatible, allowing them to become an option as photosensitizer carriers (PS) for applications in Photodynamic Therapy (PDT) protocols. Methods: A nanohydrogel system (NAHI), encapsulated with chloroaluminium phthalocyanine (ClAlPc) was synthesized for drug delivery.. NAHI was synthesized using gelatin as based polymer by the chemical cross-linking technique. The drug was encapsulated by immersing the hydrogel in a 1.0 mg.mL 1 ClAlPc solution. The external morphology of NAHI was examined by scanning electron microscopy (SEM). The degree of swelling of the synthesized system was evaluated to determine the water absorption potential. The produced nanohydrogel system was characterized by photochemical, photophysical and photobiologial studies. Results: The images from the SEM analysis showed the presence of three-dimensional networks in the formulation. The swelling test demonstrated that the nanohydrogel freeze-drying process increases its water holding capacity. All spectroscopic results showed excellent photophysical parameters of the drug studied when served in the NAHI system. The incorporation efficiency was 70%. The results of trypan blue exclusion test have shown significant reduction (p < 0.05) in the cell viability for all groups treated with PDT, in all concentrations tested. In HeLa cells, PDT mediated by 0,5 mg.mL 1 ClAlPc encapsulated in NAHI showed a decrease in survival close to 95%. In the internalization cell study was possible to observe the internalization of phthalocyanine after one hour of incubation, at 37 ◦C, with the the accumulation of PS in the cytoplasm and inside the nucleus at both concentrations tested. Conclusions: Given the peculiar performance of the selected system, the resulting nanohydrogel is a versatile platform and display potential applications as controlled delivery systems of photosensitizer for photodynamic therapy application.