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Item Efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana com photodithazine® sobre Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA): estudos em biofilmes e modelo experimental de Galleria mellonella(2022-02-24) Souza, Beatriz Müller Nunes; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Pacheco-Soares, Cristina; Miñán, Alejandro Guillermo; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposInfecções por Staphylococcus aureus são consideradas um grave problema de saúde, gerando altos índices de mortalidade. O tratamento convencional para essas infecções é feito por meio da administração de antibióticos, porém o uso indiscriminado destes fármacos pode selecionar microrganismos resistentes. Por este motivo, é necessário o desenvolvimento de alternativas para a antibioticoterapia, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) que se baseia em um método terapêutico que emprega um fotossensibilizador (FS) e uma fonte de luz com comprimento de onda adequado ao FS, capazes de interagir com o oxigênio molecular formando espécies reativas de oxigênio, responsáveis pela inativação celular. O trabalho teve como objetivo analisar, in vitro e in vivo, a ação da TFDa com Photodithazine® (PDZ) em cepa de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA). Para o método in vitro, o biofilme de S. aureus foi incubado com PDZ nas concentrações de 50 e 75 µg.mL-1 durante 15 minutos e a irradiação foi realizada com as fluências de 25, 50 e 100 J/cm². Foram avaliadas a internalização do FS, a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano, a aderência e a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura, antes e após aplicação da terapia. No método in vivo, inicialmente a cepa foi inoculada em modelos de Galleria mellonella e após a aplicação da TFDa foi analisada curva de sobrevivência, escala de saúde, análise hemócitária e UFC/mL de S. aureus na hemolinfa. Nos resultados in vitro, foi observada a redução bacteriana nas diferentes concentrações de PDZ, destacando os parâmetros de 75 µg.mL-1 de PDZ e 100 J/cm². Já nos resultados in vivo, a TFDa aumentou a sobrevida e estimulou o sistema imune das larvas de G. mellonella infectadas por S. aureus. A TFDa em ambos os métodos foi eficaz, demonstrando o potencial da terapia como uma alternativa no tratamento de infecções bacterianas por MRSA.Item Efeito antimicrobiano da membrana amniótica isolada e associada à terapia fotodinâmica(2023-03-02) Sant'Anna, Luciana Barros; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Tada, Dayane Batista; Santos, Amanda Cerquearo Rodrigues dos; Ferreira-Strixino, Juliana; São José dos CamposDevido ao avanço da resistência bacteriana aos tratamentos convencionais, a busca por terapias alternativas isoladas ou combinadas, como a utilização da membrana amniótica (MA), produtos antimicrobianos e a terapia fotodinâmica (TFD), vem aumentando a fim de alcançar um controle microbiano eficaz e adequado. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da MA isolada e associada à TFD utilizando a solução de PHTALOX® (PHTX) como fotossensibilizador (FS), frente a biofilmes de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Foram realizados dois experimentos independentes em triplicata dos grupos experimentais: Grupo C+, Grupo L, Grupo PHTX, Grupo TFD, Grupo MA, Grupo MA+L, Grupo MA+PHTX, Grupo MA+TFD. A montagem dos biofilmes foi realizada a partir do preparo de inóculos de S. aureus e P. aeruginosa (108 células/mL), e incubação de 48 horas a 37 ºC. Para obtenção da MA, cinco placentas humanas foram obtidas a partir de cesárias eletivas, após consentimento prévio e todos os exames sorológicos negativos (5.200.827/CEP/2021). Após o processamento e a criopreservação, a MA permaneceu em contato com os biofilmes por 24 horas a 37 ºC, nos grupos que envolviam este tratamento. O FS de estudo foi uma ftalocianina comercial (PHTALOX®), com tempo de incubação de 15 minutos a 37 ºC em ausência de luz. Nos grupos onde se realizou TFD, o tempo de incubação foi seguido de irradiação a partir de um dispositivo com 24 LEDs, com emissão de luz em 660 nm, densidade de potência de 30 mW.cm-², densidade de energia de 50 J.cm-2 e tempo de irradiação de 28 minutos e 18 segundos. Os resultados obtidos foram analisados por meio da contagem de UFC/mL, teste de atividade metabólica por MTT, e análise estatística, considerado estatisticamente significante p<0,05. A internalização do FS foi verificada por meio da fluorescência, e foi também realizado o espectro de absorção, quantificação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e rendimento quântico de oxigênio singleto (1O2) da solução de PHTALOX®. A verificação da integridade da MA foi verificada após os tratamentos por microscópio eletrônico de varredura (MEV). A solução de PHTALOX® apresentou pico máximo de absorção em 228, 333 e 690 nm e baixa fluorescência se concentrando superficialmente nas células bacterianas. Em relação à geração de ERO, foi obtida diferença estatística (p<0,05) nos grupos PHTX e TFD quando comparados ao grupo C+, contudo não foi observada geração de 1O2. Os grupos MA, MA+PHTX, PHTX, TFD e MA+TFD demonstraram diferença estatística (p<0,05) quando comparados ao C+ em relação à diminuição de UFC/mL e da atividade metabólica. Entretanto, não foi observada diferença estatística em relação à diminuição de UFC/mL na análise entre os grupos PHTX e TFD, e, MA+PHTX e MA+TFD. A análise por MEV em ambas as faces da MA demonstrou alterações morfológicas relevantes nos grupos MA+PHTX e MA+TFD, contudo tal alteração não impossibilitou seu efeito antimicrobiano. Com isso, conclui-se que o tratamento isolado com a MA e com a solução de PHTALOX® foram eficazes contra biofilme de S. aureus e P. aeruginosa, e que a associação destes potencializou o efeito antimicrobiano desse tratamento. Contudo, as demais análises apontaram que a fotoatividade da PHTALOX® foi menor do que ftalocianinas encontradas na literatura.Item Efeito da terapia fotodinâmica com azul de toluidina sobre biofilme multiespécie de C. albicans E C. krusei(2023-03-08) Costa, Maricília Silva; Soares, Luís Eduardo Silva; Silva, Carlos Alberto; Rodrigues, Ana Beatriz Furtado; São José dos CamposBiofilmes são agrupamentos de microrganismos que garantem vantagens e alto nível de organização, elevado índice de sobrevivência a condições adversas, além de proteção contra a ação de antimicrobianos e evasão do sistema imunológico. Podem ser formados por uma ou mais espécies, sendo que aqueles constituídos por diferentes espécies são mais resistentes a ação das drogas. Até o presente momento estão disponíveis para terapia convencional um pequeno número de antifúngicos, divididos em três classes: polienos, azóis e equinocandinas. São tratamentos que podem apresentar efeitos colaterais como nefrotoxicidade. A terapia fotodinâmica (TFD) é uma técnica que se baseia na interação da luz com o fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular, acarretando numa reação fotoquímica que gera espécies citotóxicas que promovem morte celular. Há algum tempo vem sendo empregada no tratamento de infecções cutâneas, pois apresenta poucos efeitos adversos para o paciente. Tendo em vista o desafio de tratar infecções causadas por microrganismos resistentes e que estejam acompanhadas de biofilmes, torna-se necessária a busca por tratamentos para infecções com múltiplas espécies, sobretudo que tragam menos riscos. Com isso, o presente estudo visa analisar os efeitos da TFD com azul de toluidina (AT) sobre biofilme multiespécie formado de C. albicans e C. krusei. Para realização dos experimentos as culturas foram cultivadas em ágar Sabouraud e incubadas em estufa bacteriológica por 48h, a 37°C. Após este período, uma amostra de cada espécie foi recolhida e suspensa em solução fisiológica estéril. Como fonte de luz visível foi empregado um diodo emissor de luz (LED) com potência de 0,068 W, iluminando uma área de 0,38 cm², comprimento de onda de 630nm e densidade de energia de 30 J.cm-2, e tempo de irradiação de 2 minutos e 45 segundos. A atividade metabólica do biofilme foi determinada por reação de redução do sal XTT, além de observação ao microscópio. Pode-se concluir que, com base nos dados obtidos no presente estudo, a TFD com AT apresentou efeito sobre o biofilme multiespécie formado, promovendo redução de sua atividade metabólica.Item Eficácia da terapia fotodinâmica com ácido 5-aminolevulínico e metil 5-aminolevulinato no rejuvenescimento da pele utilizando Led âmbar e infravermelho(2024-05-08) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Canevari, Renata de Azevedo; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; Pedroso, Juliana Teixeira; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposA pele é a principal barreira de defesa do organismo humano, atua na homeostase corporal, proteção contra microrganismos, substâncias e radiações, prevenção de perda excessiva de água, produção de vitamina D e influencia fatores psicossociais. O envelhecimento intrínseco da pele, pode acarretar a perda ou redução de muitas dessas funções, podendo ser ainda mais acentuado na pele fotoenvelhecida. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica não invasiva usada no tratamento de câncer, infecções microbianas, lesões pré-cancerosas e para fins estéticos da pele. Pesquisas sobre a atividade da TFD tópica sugerem efeitos antibacterianos, anti-inflamatórios e imunomoduladores em queranócitos, fibroblastos, glândulas sebáceas e folículos pilosos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi comparar a eficiência da TFD na redução dos sinais de fotoenvelhecimento, com ácido 5-aminolevulínico (ALA) e metil 5-aminolevulinato (MAL) a 2% e luz de LED âmbar (590 +/- 10 nm) e laser infravermelho (808 nm +/- 10 nm) associados em mulheres entre 40 e 55 anos. Além disso, objetiva-se identificar o tempo ótimo de incubação dos fármacos e quantificar a produção de protoporfirina IX (PpIX) e avaliar alterações nos sinais de fotoenvelhecimento após a TFD. As participantes recrutadas foram submetidas ao protocolo clínico por quatro sessões com intervalo de aproximadamente um mês. A análise de produção de PpIX foi realizada pela conversão de imagens do evidenciador Lince em histogramas de cor e a documentação fotográfica foi analisada qualitativamente quanto aos sinais de fotoenvelhecimento. A TFD se mostrou eficiente no rejuvenescimento facial, demonstrando redução de linhas finas, suavização de rugas, maciez e firmeza da pele e melhora da flacidez. Dentre os fármacos, o efeito maior de rejuvenescimento foi atribuído ao ALA, a concentração de 2% e a interação com os comprimentos de onda âmbar e infravermelho associados permitiram que tais resultados fossem atingidos com efeitos colaterais mínimos.Item Comparação de abordagens terapêuticas para gerenciamento de rosácea: estudo clínico(2023-12-13) Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Canevari, Renata de Azevedo; Nicolau, Renata Amadei; Tada, Dayane Batista; Sebbe-Santos, Priscilla Fróes; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; São José dos CamposA rosácea é uma disfunção estética que apresenta um quadro inflamatório crônico que afeta predominantemente a face. A Terapia Fotodinâmica Tópica (TFD Tópica) combina uma fonte de luz, um fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular presente nos tecidos, gerando uma reação fotoquímica capaz de promover uma destruição tecidual e vascular, levando ao reparo tecidual, estruturando a barreira cutânea comprometida, diminuindo a vascularização excessiva. O procedimento inclui aplicação tópica cosmética de uma substância precursora do FS endógeno, o Ácido-5-aminolevulínico (ALA) e o Metilaminolevulinato (MAL), que são metabolizados no tecido em protoporfirina IX (PpIX). O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da TFD Tópica utilizando-se ALA e MAL a 2% em diferentes grupos associados ao LED âmbar e laser Infravermelho, simultaneamente, para o tratamento de rosácea subtipo I e II. Com aprovação do Parecer Consubstanciado do CEP nº4.539.318, vinte e quatro participantes foram submetidas a três sessões de tratamento, com intervalo de 15 dias entre elas, e avaliação final, 15 dias após a última aplicação. Os parâmetros usados na irradiação, nos grupos TFD Tópica e Fotobiomodulação foram: LED âmbar (590 nm ±10 nm) na fluência de 81 J/cm2 e laser Infravermelho (808 nm ±10 nm) na fluência de 2 J/cm2. No grupo controle foi utilizado cosmético Melan Clean® com aplicações diárias. Foram realizadas análises fotográficas, por fluorescência e termografia. Pode-se inferir que os tratamentos com a aplicação do Melan Clean®, Fotobiomodulação e TFD Tópica, apresentam benefícios no tratamento da rosácea, melhorando o quadro inflamatório e vascular da pele, sendo apresentados pelas análises termográficas e lâmpada de wood. A melhora clínica utilizando TFD Tópica com ALA 2% e MAL 2% associados ao LED âmbar e laser Infravermelho na rosácea é comprovada. Embora a Fotobiomodulação e o Melan Clean®, também tenham apresentado resultados no tratamento da rosácea, a TFD Tópica demonstrou ser uma alternativa melhor para rosácea, uma vez que é capaz de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio molecular gerando uma reação fotoquímica que leva a destruição tecidual, favorecendo a melhora da vascularização e gerenciamento da rosácea modulando o processo inflamatório.Item Nanosistemas de entrega de fármacos à base de hidrogel para Terapia Fotodinâmica(2022-02-18) Simioni, Andreza Ribeiro; Gonçalves, Érika Peterson; Oliveira, Ivone Regina de; Moura, Marigilson Pontes de Siqueira; Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Raniero, Leandro José; São José dos CamposOs sistemas hidrogéis recebem cada vez mais visibilidade em inúmeras áreas envolvendo a biomedicina, a engenharia de tecidos, tratamentos ambientais e a liberação modificada de fármacos. Estes sistemas apresentam composição em rede tridimensional e alta capacidade de absorção de água, e são em sua maioria formados de materiais poliméricos, o que agrega características de biocompatibilidade aos mesmos, permitindo que se tornem uma opção como carreadores de fotossensibilizadores (FS) para aplicação em tratamentos envolvendo a Terapia Fotodinâmica (TFD). A TFD é uma técnica de tratamento que tem como base a administração de um FS, que na presença de luz em comprimento de onda adequado é excitado e transfere energia para o oxigênio molecular, gerando espécies reativas (ROS), como o oxigênio singlete, que é capaz de causar a morte celular no alvo do tratamento. O objetivo do trabalho foi sintetizar um sistema xerogel, incorporado com Cloro Alumínio Ftalocianina (ClAlPc), para aplicação como sistema de liberação modificada (DDS) utilizando os protocolos da TFD. O xerogel foi sintetizado usando gelatina como polímero base pela técnica de reticulação química. A incorporação do fármaco foi realizada por imersão do xerogel em solução de ClAlPc 1,0 mg.mL-1 . A morfologia externa do xerogel foi examinada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foi avaliado o grau de intumescimento do sistema sintetizado para determinação do potencial de absorção de água. O sistema xerrogel produzido foi caracterizado por técnicas térmicas, calorimétricas, fotoquímicas, fotofísicas e fotobiológicas. As imagens da análise de MEV apontaram a presença das redes tridimensionais na formulação. O teste de intumescimento demonstrou que o processo de secagem do sistema aumenta a sua capacidade de retenção de água. Todos os resultados espectroscópicos mostraram excelentes parâmetros fotofísicos e fotoquímicos do fármaco estudado quando veiculado no sistema xerogel. A eficiência de carregamento foi de 70 %. As curvas de TGA e DSC apresentaram comportamento semelhante ao da gelatina. Em células HeLa, TFD mediada por 0,5 mg.mL -1 hidrogel – ClAlPc mostrou uma diminuição na sobrevida próxima a 95%, demostrando o efeito fotodinâmico ocasionado pela aplicação dos protocolos de TFD. Com base nos resultados obtidos, é esperado que a utilização de xerogel a base de gelatina veiculado com a ClAlPc possa ser um adjuvante promissor no tratamento de neoplasias baseadas na aplicação de protocolos da TFD, contribuindo para o desenvolvimento científico e tecnológico do país com potencial grau de inovação e impacto na sociedade.Item Desenvolvimento de pirulito com fotossensibilizador para aplicação oral da terapia fotodinâmica(2024-05-03) Ferreira-Strixino, Juliana; Canevari, Renata de Azevedo; Soares, Cristina Pacheco; Carvalho, Danielle Lima Corrêa de; Saud, Larissa Fogaça; São José dos CamposA saliva desempenha funções cruciais na cavidade bucal, como a formação do bolo alimentar, lubrificação da região de faringe/laringe e prevenção de cáries e doenças oportunistas. A hipossalivação, redução na produção salivar, é um efeito colateral frequente em pacientes submetidos a quimioterapia (QT) e radioterapia (RT), especialmente quando afeta a região de cabeça e pescoço. Esse quadro resulta em toxicidade, interações medicamentosas e dificuldades no manejo dos sintomas, impactando negativamente a qualidade de vida dos pacientes. As alternativas terapêuticas, como a saliva artificial, têm mostrado limitações, como a piora de náuseas e o "gosto metálico" persistente após a QT, dificultando a adesão ao tratamento. Este estudo teve como objetivo o desenvolvimento de um pirulito contendo azul de metileno (AM) para tratar infecções oportunistas e melhorar a xerostomia, com maior adesão, praticidade e melhoria na qualidade de vida do paciente. O AM atua como fotossensibilizador na terapia fotodinâmica, proporcionando uma solução prática e eficaz. Lollipops compostos por corantes, como o AM, tornam a forma de apresentação do produto mais atraente, atendendo de maneira lúdica e eficaz a demanda de pacientes pediátricos, acamados ou em regime homecare. Foram produzidos 67 pirulitos, nos quais foram realizados testes para avaliar sua qualidade. A espectrofotometria foi utilizada para analisar as diferentes concentrações de AM, obtendo-se a curva de calibração necessária. A análise de pH foi realizada com um potenciômetro digital, e os resultados das amostras variaram entre 4,7 e 4,8, indicando consistência na quantidade de ácido cítrico. Para avaliar a umidade residual, que é essencial para a estabilidade do produto, utilizou-se estufa a vácuo. Os valores de umidade residual obtidos foram de 1,1% para a amostra 1, 1,5% para a amostra 2 e 1,2% para a amostra 3, o que é considerado adequado para garantir a durabilidade do pirulito. Além disso, o estudo de estabilidade foi realizado em três temperaturas diferentes (5°C, 30°C e 40°C) ao longo de 12 semanas. Os pirulitos mantiveram-se estáveis a 25°C por até 90 dias. No entanto, quando armazenados a 30°C e 40°C, o produto sofreu deformações nas semanas seguintes, indicando que a temperatura ideal de armazenamento é 25°C. Esses resultados demonstram que o produto desenvolvido é eficiente, com boa estabilidade e praticidade, tornando-se uma solução inovadora para melhorar a adesão ao tratamento de xerostomia e infecções oportunistas em pacientes oncológicos.Item Síntese e Caracterização de Nanossondas Bifuncionais com Clorina E6 e Cetuximabe para Aplicação em Terapia Fotodinâmica(2025-02-28) Raniero, Leandro José; Simioni, Andreza Ribeiro; Vieira, Lucia; Liu, Andrea Santos; Marmo, Vitor Luca Moura; São José dos CamposO receptor do fator de crescimento epidérmico superexpresso (EGFR) em cânceres de pulmão, mama, colo do útero e colorretal está associado a um risco aumentado de mortalidade, destacando a importância de abordagens terapêuticas direcionadas. Portanto, a terapia fotodinâmica (TFD) utilizando nanossondas bifuncionais (NB) pode aumentar a seletividade e induzir a morte celular em tumores. Isto se deve à afinidade do anticorpo monoclonal IgG cetuximabe (CX) e à capacidade do fotossensibilizador clorina e6 (ce6) de produzir espécies reativas de oxigênio (ROS) que induzem células tumorais à morte. Este trabalho teve como objetivo sintetizar NB que consistem em um sistema de nanopartículas de ouro (AuNPs) funcionalizadas com CX e ce6. Para sintetizar este sistema foi necessário modificar a estrutura do CX e ce6 utilizando carbodiimida, permitindo a funcionalização com as AuNPs. As caracterizações das NB foram realizadas utilizando as técnicas de espectroscopia UV-visível, espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), espalhamento dinâmico de luz (DLS), espalhamento eletroforético da luz (ELS) e espectroscopia de fluorescência. A absorção UV-visível revelou a permanência da banda de Soret e da banda Q em 390 nm e 667 nm, respectivamente, no NB. Os espectros de FTIR mostraram vibrações referentes à estrutura da ce6 e CX que não foram alteradas durante a reação da carbodiimida e o aparecimento da banda amida formada entre os compostos. Obtendo resultados promissores em testes in vitro na linhagem celular MDA-MB-468. Assim, os resultados indicam que as NB sintetizadas possuem potencial para aplicação na TFD direcionada contra tumores com superexpressão de EGFR.Item Síntese e Caracterização de Nanossondas Bifuncionais com Clorina E6 e Cetuximabe para Aplicação em Terapia Fotodinâmica(2025-02-28) Raniero, Leandro José; Simioni, Andreza Ribeiro,; Vieira, Lúcia; Liu, Andréa Santos; Marmo, Vitor Luca Moura; São José dos CamposO receptor do fator de crescimento epidérmico superexpresso (EGFR) em cânceres de pulmão, mama, colo do útero e colorretal está associado a um risco aumentado de mortalidade, destacando a importância de abordagens terapêuticas direcionadas. Portanto, a terapia fotodinâmica (TFD) utilizando nanossondas bifuncionais (NB) pode aumentar a seletividade e induzir a morte celular em tumores. Isto se deve à afinidade do anticorpo monoclonal IgG cetuximabe (CX) e à capacidade do fotossensibilizador clorina e6 (ce6) de produzir espécies reativas de oxigênio (ROS) que induzem células tumorais à morte. Este trabalho teve como objetivo sintetizar NB que consistem em um sistema de nanopartículas de ouro (AuNPs) funcionalizadas com CX e ce6. Para sintetizar este sistema foi necessário modificar a estrutura do CX e ce6 utilizando carbodiimida, permitindo a funcionalização com as AuNPs. As caracterizações das NB foram realizadas utilizando as técnicas de espectroscopia UV-visível, espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), espalhamento dinâmico de luz (DLS), espalhamento eletroforético da luz (ELS) e espectroscopia de fluorescência. A absorção UV-visível revelou a permanência da banda de Soret e da banda Q em 390 nm e 667 nm, respectivamente, no NB. Os espectros de FTIR mostraram vibrações referentes à estrutura da ce6 e CX que não foram alteradas durante a reação da carbodiimida e o aparecimento da banda amida formada entre os compostos. Obtendo resultados promissores em testes in vitro na linhagem celular MDA-MB-468. Assim, os resultados indicam que as NB sintetizadas possuem potencial para aplicação na TFD direcionada contra tumores com superexpressão de EGFR.