Navegando por Autor "Canevari, Renata de Azevedo"
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Item Aplicação das técnicas de PCR, micronúcleo e espectroscopia FT-IR no diagnóstico do HPV na prevenção do câncer cervical(2020-02-28) Canevari, Renata de Azevedo; Soares, Luís Eduardo Silva; Castilho, Maiara Lima; Batista, Nelson Jorge Carvalho; Koga-ito, Cristiane Yumi; Viana, Magda Rogéria Pereira; Raniero, Leandro José; São José dos CamposO câncer de colo de útero é considerado o terceiro tumor mais frequente e a segunda causa de mortalidade de mulheres no Brasil, sendo considerado um problema de saúde pública. A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é um dos principais fatores de risco que contribui para o desenvolvimento desta neoplasia. O principal método para o diagnóstico é a análise citológica pelo exame de Papanicolaou, mas a alta taxa de casos falso-negativos inviabiliza uma avaliação adequada, sendo importante o uso de técnicas auxiliares de detecção do HPV e, consequentemente, no diagnóstico desta doença. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia, aplicabilidade, sensibilidade e especificidade dos métodos alternativos para a detecção do HPV na prevenção do câncer cervical. As técnicas MN e FT-IR são indiretas, mas podem fornecer resultados úteis na detecção do HPV em pacientes submetidas ao exame citopatológico. As amostras de fluido cervical foram obtidas de 50 pacientes com citológica normal, posteriormente analisada pela PCR, teste de MN e análise de FT-IR. A análise molecular consistiu de extração do DNA das amostras endocervicais pelo protocolo QIAamp® Virus Spin kit (Qiagen), seguida da realização da PCR do gene viral L1 utilizandose os iniciadores MY09 e MY11. As amostras foram divididas com base nos resultados da PCR em dois grupos, HPV positivo (sete amostras) e HPV negativo (43 amostras). As análises dos testes de MN das amostras ectocervicais foram realizadas pelas leituras das frequências absoluta (N) e relativa (%), obtidas as médias, desvios padrões e analisadas pelos testes Shapiro-Wilk, Mann-Whitney e Qui-quadrado (X2). As análises de FT-IR das amostras endocervicais foram realizadas no equipamento Spectrum 400. A partir da matriz de covariância foram obtidos os componentes principais (PCs), e por meio das análises discriminantes linear e quadrática, supervisionada pelos resultados da PCR (grupos HPVpositivo e HPV negativo), foram calculados os valores de sensibilidade e especificidade. Os resultados das análises de PCR das 50 amostras permitiram validar 43 exames citológicos, mas sete amostras de resultado citológico negativo estavam infectadas pelo HPV. Os testes de MN mostraram maiores frequências de MN em amostras com HPV positivo, fatores relacionados a idade, ao abortamento e o uso de bebidas alcoólicas. Os espectros de análise FT-IR mostraram variações nas bandas de DNA e proteínas em amostras com alta frequência de MN, provavelmente devido à presença de histonas nucleossômicas e DNA que formam o MN. A análise dos componentes principais dos espectros de FT-IR não foi capaz de separar eficientemente as amostras HPV positivas das HPV negativas, mostrando-se inespecífico para diagnosticar o vírus. Assim, com a realização do estudo observou-se que a técnica de PCR pode ser considerada padrão ouro para a detecção do HPV por sua alta sensibilidade, que o aumento da frequência de MN observado neste estudo em amostras infectadas pelo HPV, pode ser devido à instabilidade genômica, causada pela presença do vírus, e que, apesar da espectroscopia FT-IR apresentar grande potencial, por ser um teste de alta sensibilidade e especificidade no rastreamento do câncer cervical, neste estudo não demonstrou ser eficiente na discriminação de amostras infectadas pelo HPV. Dessa forma, enfatiza-se que, estudos adicionais devem ser conduzidos para a aplicação da espectroscopia FT-IR e o teste de MN no diagnóstico da infecção pelo HPV e consequente aplicação na prevenção de câncer cervical.Item Avaliação da eficácia do LED azul na permeação de ingredientes cosméticos na fibra capilar(2023-04-04) Ferreira-Strixino, Juliana; Canevari, Renata de Azevedo; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Lima, Cibele Rosana de Castro; Fugimoto, Priscila Vareschi Cardoso; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposA luz emissora de diodo (LED) azul apresenta diferentes aplicações clínicas potenciais e tem sido amplamente utilizada com o objetivo de facilitar a permeação de produtos cosméticos na haste capilar com a proposta de intensificar a ação do tratamento cosmético. Entretanto, não foi observado na literatura artigos científicos que avaliem e discutam a interação da irradiação do LED azul e sua influência na permeação de cosméticos no fio de cabelo. A fibra capilar é composta por células mortas e não pode ser renovada biologicamente, a única forma de melhorar as propriedades estruturais da haste capilar é por meio de cosméticos que promovam a manutenção da saúde e beleza dos cabelos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da irradiação do LED azul na permeação de ingredientes cosméticos em fios de cabelos de diferentes etnias e as alterações das propriedades físico-químicas após tratamento com cosmético e LED azul. Para o estudo foram utilizados cabelos virgens do tipo caucasiano, africano e asiático livres de quaisquer tratamentos químicos. Para as análises foram preparadas 6 mechas de cabelo de cada grupo étnico: 1- ?controle? sem tratamento; 2- tratado com cosmético sem enxágue; 3- tratado com cosmético sem enxágue e irradiado com LED azul no modo varredura; 4- tratado com cosmético sem enxágue e irradiado com LED azul no modo pontual; 5- fibra capilar sem tratamento irradiada com LED azul no modo de varredura; 6- fibra capilar sem tratamento irradiada com LED azul no modo pontual. Notou-se que a interação do LED azul é divergente nas diferentes etnias de cabelo. O grupo de cabelo africano irradiado com LED azul no modo pontual e varredura obteve o menor índice de resistência, menor aumento de diâmetro da fibra capilar e permeação de ingredientes cosméticos quando comparado ao grupo tratado com cosmético. Os grupos caucasiano e asiático irradiados com LED azul pontual apresentaram um elevado índice de aumento na permeação de ingredientes cosméticos no fio de cabelo, melhora da resistência e aumento de diâmetro da fibra capilar quando comparado ao grupo tratado com cosmético. Desta forma podemos concluir que a aplicação do LED azul utilizado em uma dosimetria de 9,6 joules contribui com a permeação de ingredientes cosméticos em cabelos asiáticos e caucasianos.Item Busca de marcadores moleculares preditivos do acometimento de linfonodos em carcinomas papilíferos de tireoide(Universidade do Vale do Paraíba - UNIVAP) Oliveira, Maria Luiza Lopes de; Costa, João Vitor Alcântara da; Silva, Luana Araujo da; Santos, Joyce Nascimento; Canevari, Renata de AzevedoO câncer de tireoide é a neoplasia que mais cresce em incidência todos os anos, sendo o carcinoma papilífero de tireoide (CPT) o subtipo mais comum. Em muitos casos estes tumores podem se tornar agressivos, ocasionando metástases linfonodais. A determinação de marcadores moleculares pela análise de expressão gênica é uma importante ferramenta para a determinação do prognóstico destes tumores. Considerando o papel dos genes NEDD9, B3GNT7, PHB, BAD, PAXIP1, PPM1D e PIK3R5 na etiologia de diversos cânceres, este estudo consistiu em verificar pela técnica de RT-qPCR se os mesmos podem ser marcadores moleculares preditivos do acometimento de linfonodos e se estão relacionados ao desenvolvimento destes tumores. No presente estudo não foi observada expressão diferencial significativa dos genes analisados entre os grupos amostrais de CPT versus MCPT (microcarcinomas) e entre os grupos de CPT linfonodo positivo versus CPT linfonodo negativo, indicando que estes genes não estão relacionados ao desenvolvimento tumoral e não podem ser considerados marcadores preditivos de metástases em linfonodos em CPT.Item Caracterização do biofilme dupla-espécie de Candida Albicans/Candida Krusei: efeito do Voriconazol e da terapia fotodinâmica antimicrobiana(2023-10-17) Costa, Maricília Silva; Simioni, Andreza Ribeiro; Canevari, Renata de Azevedo; Campos, Cláudia Barbosa Ladeira de; S. Junior, José A. da; Nicolau, Juliene Cristina Passos; Silva, Carlos Alberto; São José dos CamposInfecções hospitalares por Candida spp. são frequentes e têm aumentado significativamente, apresentando altas taxas de mortalidade em pacientes imunossuprimidos. Candida albicans é a espécie mais isolada de infecções na corrente sanguínea, sendo considerada a principal do gênero relacionada às infecções. Candida krusei também tem tido notoriedade uma vez que é intrinsecamente resistente ao fluconazol, antifúngico de escolha para os tratamentos de candidemias. Um dos fatores de virulência de C. albicans e C. krusei, além do dimorfismo, é a capacidade de formar biofilmes. Biofilmes são estruturas complexas com células leveduriformes e filamentosas embebidas em uma matriz extracelular rica em polissacarídeos que dificultam a difusão e ação de drogas, e ação do sistema imunológico do seu hospedeiro. Esses biofilmes são difíceis de erradicar, principalmente quando são polimicrobianos. Os tratamentos com antifúngicos apresentam desafios, uma vez que as espécies fúngicas estão cada vez mais resistentes, devido ao seu uso indiscriminado ou profilático. Além disso, muitas vezes o antifúngico de principal escolha para os tratamentos não funciona para todos os microrganismos das coinfecções. Portanto, a compreensão do comportamento dos biofilmes e das interações entre espécies em biofilmes multiespécies é fundamental para o desenvolvimento de estratégias de prevenção e tratamento eficazes para as infecções por Candida spp. Neste trabalho foi caracterizado o biofilme dupla-espécie de Candida spp. visando compreender as interações entre espécies e a importância de aspectos essenciais para a manutenção do biofilme como: adesão, ordem de adição de espécies, meio de crescimento. Ademais, foi analisado se o meio de cultivo e as interações intra-gênero dos biofilmes mistos alterariam o resultado de uma terapia efetivamente comprovada como a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (TFA). Além disso, verificou-se o comportamento de ambas espécies de Candida, de maneira isolada e em co-culturas, mediante o uso de um antifúngico alternativo, o Voriconazol (VOR). Aspectos como crescimento, formação de biofilmes e biofilmes em diferentes estágios de maturação foram avaliados. A viabilidade das células planctônicas foi feita por meio da análise da absorbância e os biofilmes foram avaliados quanto a atividade metabólica (XTT), biomassa produzida (coloração com Safranina) e morfologia celular por microscopia óptica. Para identificação das espécies de Candida spp. nos biofilmes mistos, foi utilizado o meio de identificação CHROMágar Candida. VOR foi capaz de inibir significativamente o crescimento de Candida spp. e suas co-culturas de modo dose-dependente da concentração celular e do antifúngico, da mesma maneira que também inibiu a viabilidade dos respectivos biofilmes. A caracterização se mostrou de extrema importância, pois esclareceu que ordem de adição de Candida spp. à placa de poliestireno, a pré-adesão e o meio em que o biofilme foi formado (RPMI-1640 ou caldo Sabouraud-dextrose) são fatores relevantes a serem considerados no estudo de um biofilme dupla-espécie de C. albicans e C. krusei. Tais fatores podem interferir na composição final desse biofilme e, também, no resultado de um tratamento, como na TFA que inibiu cerca de 40% dos biofilmes maduros mistos formados em RPMI, mas não teve efeito nos biofilmes mistos formados em meio Sabouraud.Item Comparação de abordagens terapêuticas para gerenciamento de rosácea: estudo clínico(2023-12-13) Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Canevari, Renata de Azevedo; Nicolau, Renata Amadei; Tada, Dayane Batista; Sebbe-Santos, Priscilla Fróes; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; São José dos CamposA rosácea é uma disfunção estética que apresenta um quadro inflamatório crônico que afeta predominantemente a face. A Terapia Fotodinâmica Tópica (TFD Tópica) combina uma fonte de luz, um fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular presente nos tecidos, gerando uma reação fotoquímica capaz de promover uma destruição tecidual e vascular, levando ao reparo tecidual, estruturando a barreira cutânea comprometida, diminuindo a vascularização excessiva. O procedimento inclui aplicação tópica cosmética de uma substância precursora do FS endógeno, o Ácido-5-aminolevulínico (ALA) e o Metilaminolevulinato (MAL), que são metabolizados no tecido em protoporfirina IX (PpIX). O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da TFD Tópica utilizando-se ALA e MAL a 2% em diferentes grupos associados ao LED âmbar e laser Infravermelho, simultaneamente, para o tratamento de rosácea subtipo I e II. Com aprovação do Parecer Consubstanciado do CEP nº4.539.318, vinte e quatro participantes foram submetidas a três sessões de tratamento, com intervalo de 15 dias entre elas, e avaliação final, 15 dias após a última aplicação. Os parâmetros usados na irradiação, nos grupos TFD Tópica e Fotobiomodulação foram: LED âmbar (590 nm ±10 nm) na fluência de 81 J/cm2 e laser Infravermelho (808 nm ±10 nm) na fluência de 2 J/cm2. No grupo controle foi utilizado cosmético Melan Clean® com aplicações diárias. Foram realizadas análises fotográficas, por fluorescência e termografia. Pode-se inferir que os tratamentos com a aplicação do Melan Clean®, Fotobiomodulação e TFD Tópica, apresentam benefícios no tratamento da rosácea, melhorando o quadro inflamatório e vascular da pele, sendo apresentados pelas análises termográficas e lâmpada de wood. A melhora clínica utilizando TFD Tópica com ALA 2% e MAL 2% associados ao LED âmbar e laser Infravermelho na rosácea é comprovada. Embora a Fotobiomodulação e o Melan Clean®, também tenham apresentado resultados no tratamento da rosácea, a TFD Tópica demonstrou ser uma alternativa melhor para rosácea, uma vez que é capaz de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio molecular gerando uma reação fotoquímica que leva a destruição tecidual, favorecendo a melhora da vascularização e gerenciamento da rosácea modulando o processo inflamatório.Item Desenvolvimento de pirulito com fotossensibilizador para aplicação oral da terapia fotodinâmica(2024-05-03) Ferreira-Strixino, Juliana; Canevari, Renata de Azevedo; Soares, Cristina Pacheco; Carvalho, Danielle Lima Corrêa de; Saud, Larissa Fogaça; São José dos CamposA saliva desempenha funções cruciais na cavidade bucal, como a formação do bolo alimentar, lubrificação da região de faringe/laringe e prevenção de cáries e doenças oportunistas. A hipossalivação, redução na produção salivar, é um efeito colateral frequente em pacientes submetidos a quimioterapia (QT) e radioterapia (RT), especialmente quando afeta a região de cabeça e pescoço. Esse quadro resulta em toxicidade, interações medicamentosas e dificuldades no manejo dos sintomas, impactando negativamente a qualidade de vida dos pacientes. As alternativas terapêuticas, como a saliva artificial, têm mostrado limitações, como a piora de náuseas e o "gosto metálico" persistente após a QT, dificultando a adesão ao tratamento. Este estudo teve como objetivo o desenvolvimento de um pirulito contendo azul de metileno (AM) para tratar infecções oportunistas e melhorar a xerostomia, com maior adesão, praticidade e melhoria na qualidade de vida do paciente. O AM atua como fotossensibilizador na terapia fotodinâmica, proporcionando uma solução prática e eficaz. Lollipops compostos por corantes, como o AM, tornam a forma de apresentação do produto mais atraente, atendendo de maneira lúdica e eficaz a demanda de pacientes pediátricos, acamados ou em regime homecare. Foram produzidos 67 pirulitos, nos quais foram realizados testes para avaliar sua qualidade. A espectrofotometria foi utilizada para analisar as diferentes concentrações de AM, obtendo-se a curva de calibração necessária. A análise de pH foi realizada com um potenciômetro digital, e os resultados das amostras variaram entre 4,7 e 4,8, indicando consistência na quantidade de ácido cítrico. Para avaliar a umidade residual, que é essencial para a estabilidade do produto, utilizou-se estufa a vácuo. Os valores de umidade residual obtidos foram de 1,1% para a amostra 1, 1,5% para a amostra 2 e 1,2% para a amostra 3, o que é considerado adequado para garantir a durabilidade do pirulito. Além disso, o estudo de estabilidade foi realizado em três temperaturas diferentes (5°C, 30°C e 40°C) ao longo de 12 semanas. Os pirulitos mantiveram-se estáveis a 25°C por até 90 dias. No entanto, quando armazenados a 30°C e 40°C, o produto sofreu deformações nas semanas seguintes, indicando que a temperatura ideal de armazenamento é 25°C. Esses resultados demonstram que o produto desenvolvido é eficiente, com boa estabilidade e praticidade, tornando-se uma solução inovadora para melhorar a adesão ao tratamento de xerostomia e infecções oportunistas em pacientes oncológicos.Item Efeito dos compostos de organoselênio (PhSe)2, (MeOPhSe)2, (p-Cl-PhSe)2 em biofilmes dupla-espécie de Candida albicans e Candida krusei(2024-07-31) Costa, Maricília Silva; Canevari, Renata de Azevedo; Silva, Carlos Alberto; Calvi, Gabriela de Souza; São José dos CamposO gênero Candida é o mais comumente isolado em culturas de pacientes acometidos com infecções causadas por fungos. A espécie Candida albicans é, entre o gênero, a mais comum, e a espécie Candida krusei, é considerada emergente. Ambas as espécies já demonstram resistência aos fármacos convencionais, como o fluconazol e as equinocandinas. Além disso, ambas são plenamente capazes de formar biofilmes. Biofilmes são estruturas complexas capazes de abrigar mais de uma espécie de microrganismo, alcançando características ainda mais resistentes. Os compostos de organoselênio, principalmente o disseleneto de difenila e derivados, são estruturas químicas simples que apresentam atividade antifúngica, tornando-os promissores para a inibição de biofilmes dupla-espécie. O objetivo da pesquisa foi analisar o efeito dos compostos (PhSe)2, (MeOPhSe)2, (p-Cl-PhSe)2 nas fases de adesão de ambas as espécies em conjunto, e no biofilme misto, nas fases de formação e biofilme maduro. Para a formação dos biofilmes, foram utilizados dois meios, o RPMI-1640 e o Sabouraud dextrose. Para avaliar a viabilidade dos biofilmes, foi mensurada a atividade metabólica, e a diferenciação das espécies por CHROMagar Candida® foi realizada. Os resultados demonstram que os compostos possuem capacidade de inibir os biofilmes dupla-espécie, especialmente nas fases de adesão e formação. O composto (MeOPhSe)2 demonstrou capacidade de inibir a formação dos biofilmes dupla-espécie, obtendo resultados de até 95%, sendo mais significativo que (PhSe)2 e (p-Cl-PhSe)2 que inibiram a formação em 56% e 27% respectivamente. Sendo assim, conclui-se que os compostos de organoselênio são terapias promissoras para o combate destes biofilmes.Item Eficácia da terapia fotodinâmica com ácido 5-aminolevulínico e metil 5-aminolevulinato no rejuvenescimento da pele utilizando Led âmbar e infravermelho(2024-05-08) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Canevari, Renata de Azevedo; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; Pedroso, Juliana Teixeira; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposA pele é a principal barreira de defesa do organismo humano, atua na homeostase corporal, proteção contra microrganismos, substâncias e radiações, prevenção de perda excessiva de água, produção de vitamina D e influencia fatores psicossociais. O envelhecimento intrínseco da pele, pode acarretar a perda ou redução de muitas dessas funções, podendo ser ainda mais acentuado na pele fotoenvelhecida. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica não invasiva usada no tratamento de câncer, infecções microbianas, lesões pré-cancerosas e para fins estéticos da pele. Pesquisas sobre a atividade da TFD tópica sugerem efeitos antibacterianos, anti-inflamatórios e imunomoduladores em queranócitos, fibroblastos, glândulas sebáceas e folículos pilosos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi comparar a eficiência da TFD na redução dos sinais de fotoenvelhecimento, com ácido 5-aminolevulínico (ALA) e metil 5-aminolevulinato (MAL) a 2% e luz de LED âmbar (590 +/- 10 nm) e laser infravermelho (808 nm +/- 10 nm) associados em mulheres entre 40 e 55 anos. Além disso, objetiva-se identificar o tempo ótimo de incubação dos fármacos e quantificar a produção de protoporfirina IX (PpIX) e avaliar alterações nos sinais de fotoenvelhecimento após a TFD. As participantes recrutadas foram submetidas ao protocolo clínico por quatro sessões com intervalo de aproximadamente um mês. A análise de produção de PpIX foi realizada pela conversão de imagens do evidenciador Lince em histogramas de cor e a documentação fotográfica foi analisada qualitativamente quanto aos sinais de fotoenvelhecimento. A TFD se mostrou eficiente no rejuvenescimento facial, demonstrando redução de linhas finas, suavização de rugas, maciez e firmeza da pele e melhora da flacidez. Dentre os fármacos, o efeito maior de rejuvenescimento foi atribuído ao ALA, a concentração de 2% e a interação com os comprimentos de onda âmbar e infravermelho associados permitiram que tais resultados fossem atingidos com efeitos colaterais mínimos.Item Expression data of FOS and JUN genes and FTIR spectra provide diagnosis of thyroid carcinoma(Elsevier) Queiroz, João Paulo da Silva; Pupin, Breno; Bhattacharjee, Tanmoy Tapobrata; Uno, Miyuki; Chammas, Roger; Kulcsar, Marco Aurélio Vamondes; Canevari, Renata de AzevedoWe explore the feasibility of using FOS and JUN gene expression and ATR-FTIR for diagnosis of thyroid cancer. For the study, 38 samples (6 non-neoplastic (NN), 10 papillary thyroid carcinoma (PTC), 7 follicular thyroid carcinoma (FTC), and 15 benign tumors (BT) were subjected to RNA extraction followed by quantitative real time PCR (qRT-PCR) and 30 samples (5 NN, 9 PTC, 5 FTC, and 11 BT) were used for Attenuated Total Reflectance – Fourier Transform Infrared (ATR-FTIR) followed by multivariate analysis. Of the above, 20 samples were used for both gene expression and ATR-FTIR studies. We found FOS and JUN expression in malignant tumor samples to be significantly lower than NN and benign. ATR-FIR after multivariate analysis could identify the difficult to diagnose FTC with 93 % efficiency. Overall, results suggest the diagnostic potential of molecular biology techniques combined with ATR-FTIR spectroscopy in differentiated thyroid carcinomas (PTC and FTC) and BT.Item Molecular effects of photodynamic therapy with curcumin on Leishmania major promastigotes(Parasitology Research, Springer-Verlag GmbH Germany) Marcolino, Luciana Maria Cortez; Pinto, Juliana Guerra; Ferreira, Isabelle; Godoi, Bruno Henrique; Canevari, Renata de Azevedo; Ferreira-Strixino, JulianaLeishmaniasis is a neglected disease mainly affecting low-income populations. Conventional treatment involves several side effects, is expensive, and, in addition, protozoa can develop resistance. Photodynamic therapy (PDT) is a promising alternative in treating the disease. PDT involves applying light at a specific wavelength to activate a photosensitive compound (photosensitizer, PS), to produce reactive oxygen species (ROS). Curcumin and its photochemical characteristics make it a good candidate for photodynamic therapy. Studies evaluating gene expression can help to understand the molecular events involved in the cell death caused by PDT. In the present study, RNA was extracted from promastigotes from the control and treated groups after applying PDT. RT-qPCR was performed to verify the expression of the putative ATPase beta subunit (ATPS), ATP synthase subunit A (F0F1), argininosuccinate synthase 1 (ASS), ATP-binding cassette subfamily G member 2 (ABCG2), glycoprotein 63 (GP63), superoxide dismutase (FeSODA), and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) genes (QR). The results suggest that PDT altered the expression of genes that participate in oxidative stress and cell death pathways, such as ATPS, FeSODA, and G6PD. The ATP-F0F1, ASS, and GP63 genes did not have their expression altered. However, it is essential to highlight that other genes may be involved in the molecular mechanisms of oxidative stress and, consequently, in the death of parasites.Item PCR-RFLP and FTIR-based detection of high-risk human papilloma virus for cervical cancer screening and prevention(Elsevier) Melo, Igor Martins Alves; Viana, Magda Rogéria Pereira; Pupin, Breno; Bhattacharjee, Tanmoy Tapobrata; Canevari, Renata de AzevedoBackground: Approximately 70% of cervical carcinoma cases show the presence of high-risk Human Papilloma Virus (HPV), especially HPV-16 and HPV-18, and can be used to stratify high risk patients from low risk and healthy. Currently, molecular biology techniques such as polymerase chain reaction (PCR) are used to identify the presence of virus in patient samples. While the methodology is highly sensitive, it is labor intensive and timeconsuming. Alternative techniques, such as vibrational spectroscopy, has been suggested as a possible rapid alternative. Therefore, in this study, we evaluate the efficiency of cervical fluid Fourier Transform Infrared spectroscopy (FTIR) in patient risk stratification informed by PCR. Methods: Cervical fluid samples (n = 91) were obtained from patients who have undergone routine Papanicolaou (Pap) test. Viral genome was identified and classified as high/low-risk by PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). FTIR spectra were acquired from samples identified by PCR-RFLP as No-HPV (n = 10), high-risk HPV (n = 7), and low-risk HPV (n = 7). Results: Of the 91 samples, was detected the viral genome by PCR in 36 samples. Of these 36 samples, nine samples were identified to contain high-risk HPV (HR-HPV) and nine samples were found to have low-risk HPV (LR-HPV). The FTIR spectra acquired from No-HPV, LR-HPV, and HR-HPV showed differences in 1069, 1437, 1555, 1647, 2840, 2919, and 3287 cm-1 bands. Principal Component Analysis (PCA) showed distinct clusters for No-HPV and HR-HPV and No-HPV and LR-HPV, but there was significant overlap in the clusters of HR-HPV and LR-HPV. PCA-Linear Discriminant Analysis (PC-LDA) after Leave One Out Cross Validation (LOOCV) classified No-HPV from HR-HPV and No-HPV from LR-HPV with 100% efficiency in the 1400-1800 cm-1 spectral range. LOOCV classifications for LR-HPV and HR-HPV from each other were 71 and 75%, respectively, in the 2800-3400 cm-1 spectral range. Conclusions: The results highlight the high sensitivity of PCR-RFLP in HPV identification and show that FTIR can classify samples identified as healthy, low, and high-risk samples by PCR-RFLP. General significance: We show the possibility of using FTIR for initial cervical cancer risk stratification followed by detailed PCR-RFLP investigations for suspect cases.Item Perfil bioquímico e significado clínico de genes da via MAPK/KINASE no diagnóstico de neoplasias da tireoide(2022-03-07) Canevari, Renata de Azevedo; Soares, Luís Eduardo Silva; Binato, Sara Martoreli da Silveira; Santos, Joyce Nascimento; São José dos CamposAs neoplasias de tireoide são os principais tipos de malignidade endócrina que atualmente apresentam incidência crescente nos últimos anos. O diagnóstico pode apresentar resultados inconclusivos, levando a necessidade do emprego de técnicas adicionais mais precisas, tais como a análise molecular, proteica e por espectroscopia FT-IR. Com este tipo de abordagem mais possibilidades diagnósticas, como também e prognósticas poderão ser realizadas. Neste sentido, é essencial a busca de marcadores moleculares para o diagnóstico entre os diferentes tipos histológicos. O objetivo deste estudo consistiu em identificar marcadores moleculares pertencentes à via MAPK/KINASE em carcinomas papilífero de tireoide (CPT) e lesões de bócio, quando comparados aos seus tecidos normais adjacentes, além de avaliar as características espectrais para a determinação do diagnóstico dessas lesões. Para isso foi realizada a análise da expressão de genes e proteína pertencentes a via MAPK/KINASE pela técnica de qRT-PCR e imunohistoquímica, respectivamente, e a avaliação das amostras pela técnica de espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR). Foram utilizadas 70 amostras de tecidos de tireoide, sendo 25 casos classificados pela análise citopatologia como CPT e 25 casos diagnosticados como bócio , com respectivos tecidos normais adjacentes. A análise por espectroscopia FTIR foi capaz de classificar tecidos normais, bócio e CPT com alta sensibilidade, mostrando a efetividade da técnica em classificar com alta sensibilidade as lesões de tireoide das amostras normais, possuindo potencial para aplicações clínicas no diagnóstico de câncer e lesões de tireoide. A análise da proteína Ciclina A1 demonstrou o potencial para o diagnóstico, sugerindo que esta proteína é um potencial marcador proteico em CPT. A análise molecular dos genes FOS e JUN foram eficazes na identificação de lesões tireoidianas e os genes MAP2K6, CCNA1 e SFN são potenciais marcadores moleculares para a identificação de amostras de CPT.