Navegando por Autor "Comparato Filho, Olavo de Osti"

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    Diferenciação bioquímica e colorimétrica entre as espécies Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides Lutzii
    (2020-11-23) Raniero, Leandro José; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Krabbe, Angela Cristina; Oliveira, Luciane Dias de; Liu, Andréa Santos; Comparato Filho, Olavo de Osti; São José dos Campos
    As espécies de fungos: Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) e Paracoccidioides lutzii (P. lutzii), são causadoras da paracoccidioidomicose (PCM), infecção com diferentes manifestações clínicas localizadas ou disseminadas, com possibilidade de evoluir para a letalidade. No diagnóstico da PCM, o principal antígeno é a glicoproteína exocelular de 43 KDa (Gp43), reagindo com 100% dos soros de pacientes inoculados P. brasiliensis. Entretanto o Gp43não pode ser utilizado como um marcador para o P. lutzii, pois este antígeno não é reconhecido em pacientes infectados por ele. Neste contexto, o nosso trabalho buscou identificar e registrar diferenças na composição bioquímica entre essas duas espécies (P. brasiliensis:Pb03, Pb18 e P. lutzii: Pb01) por espectroscopia no infravermelho, uma vez que manifestações clínicas e o tratamento dos infectados diferem baseados no agente causador, tornando importante a sua identificação correta. De forma complementar, foi possível identificar molecularmente o P. lutzii, por meio de testes colorimétricos utilizando a metodologia label-free, combinando uma solução coloidal de nanopartículas de ouro(AuNPs), genes específicos e amostras testes. Para esse estudo, AuNPs foram sintetizadas por redução do cloreto de ouro por citrato de sódio, obtendo-se uma solução com um máximo de absorção na banda de 523 nm, obtendo-se como resultado, partículas com formato esférico e diâmetro médio de 22 nm. A diferenciação bioquímica entre as espécies foi realizada por meio da Transformada de Fourier no Infravermelho (FT-IR), uma técnica de obtenção rápida de resultados e de menor tempo necessário de preparação das amostras. Foram produzidos, na média, trinta espectros de cada amostra das culturas dos fungos. Nos resultados desta análise apareceram diferenças nos modos vibracionais de proteínas nas bandas em 1032, 1150, 1204, 1234, 1256, 1310, 1450, 1536, 1628 e 1656 cm-1; de lipídios nas bandas em 1744, 2852, 2922, 2956 cm-1; de material nuclear nas bandas em 1076 e 1116 cm-1, de estiramentos OH nas bandas em 3290 e 3432 cm-1. Com intuito de confirmação dos resultados obtidos com o FT-IR, o estudo estatístico Principal Component Linear Discriminant Analysis (PC-LDA) também foi utilizado para as conclusões. Com relação aos testes colorimétricos, foram realizados 50 testes, em triplicatas. Os resultados, após 3 metodologias estatísticas aplicadas, mostraram mudança de coloração da solução coloidal de nanopartículas de ouro na presença de DNA do fungo, para os testes positivos em 98% dos casos, confirmando que os microrganismos foram identificados molecularmente de forma correta.
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    Nano-Enabled Colorimetric Assay for the Detection of Paracoccidioides lutzii: Advancing Diagnostics with Nanotechnology
    (MDPI) Comparato Filho, Olavo de Osti; Cândido, Marcela Aparecida; Ventura, Aveline; Morais, Flavia Villaça; Raniero, Leandro José
    Deforestation is a common occurrence driven by agricultural expansion, urbanization, and infrastructure development. These activities often lead to increased human interaction with ecosys- tems, potentially exposing individuals to Paracoccidioides spores (P. brasiliensis and P. lutzii) found in the soil, resulting in Paracoccidioidomycosis (PCM). This fungal infection is endemic to specific regions in Latin America, such as Brazil, Colombia, Venezuela, and Argentina. Diagnosis typically involves a combination of clinical assessment, imaging techniques, and laboratory examinations. P. lutzii lacks the glycoprotein Gp43, a key antigenic protein utilized in serological tests for PCM diagnosis. In this study, a colorimetric test employing gold nanoparticles (AuNPs) and label-free methodology was employed for P. lutzii detection. The effectiveness of the label-free colorimetric test was assessed using a total of 100 samples. This detection was achieved through the amplification of the gp43 gene and the use of a specific probe (5′CAGGGGTGCG3′) in conjunction with AuNPs. The receiver operating characteristic curve was employed to assess the test, revealing that the method can accurately detect P. lutzii with a sensitivity of 100% and a specificity of 100%. The findings indicate a substantial impact on remote endemic regions attributable to the implementation of cost-effective diagnostic methodologies.