Navegando por Autor "Silva, Newton Soares da"
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Item Ação da terapia fotodinâmica com curcumina na interação de macrófagos e amastigotas de L. braziliensis e L. major(2021-09-21) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Silva, Newton Soares da; Ribeiro, Martha Simões; Lindoso, José Angelo Lauletta; Pereira, André Henrique Correia; São José dos CamposA leishmaniose tegumentar (LT) é uma doença negligenciada que está entre as 10 doenças infecciosas mais importantes do mundo. O tratamento convencional é feito com antimoniais pentavalentes e anfotericina, medicamentos que apresentam diversos efeitos colaterais e contraindicações. A terapia fotodinâmica (TFD) com curcumina surge como alternativa no tratamento da LT, visto que se baseia em aplicação local, não invasiva e seletiva, enquanto utiliza um composto natural de baixo custo como fotossensibilizador. Esse trabalho teve por objetivo a avaliação, in vitro, da TFD aplicada sobre amastigotas de L. braziliensis e L. major em interação com macrófagos por meio de análise de viabilidade, morfologia, internalização do FS, atividade e potencial de membrana mitocondrial e recuperação de parasitos pósTFD. Foram utilizadas concentrações de curcumina em diluições seriadas, de 500 a 7,8 µg.mL-1, e irradiação com luz azul (450 nm), irradiância de 36 mW/cm² e fluência de 10 J/cm². Os resultados demonstram ampla inativação e baixa citotoxicidade da TFD com curcumina em macrófagos infectados e não infectados nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1. A internalização do FS demonstrou localização do composto em todo o citoplasma da célula, além de concentração no núcleo, e nos amastigotas intracelulares. A morfologia pós-tratamento se mostrou alterada, exibindo destruição celular nos grupos submetidos à TFD, enquanto os grupos não tratados permaneceram com a morfologia dos macrófagos preservada. Foi observada elevação do potencial de membrana mitocondrial e diminuição da atividade mitocondrial nos grupos que receberam a terapia. Além disso, a contagem de parasitos recuperados pós-TFD demonstrou que houve diminuição do número de parasitos viáveis, indicando que a terapia pôde inativar não só os macrófagos, mas também os amastigotas intracelulares para as duas espécies de Leishmania estudadas. Os testes realizados demonstraram potencial da TFD com curcumina nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1, promovendo a inativação de macrófagos infectados com Leishmania, bem como alterações celulares morfológicas e nopotencial de membrana e atividade mitocondrial.Item Anatase film on orotracheal tubes to mitigate Staphylococcus aureus(American Scientific Publishers) Manfroi, Lucas Augusto; Silva, Michely Glenda Pereira da; Vieira, Angela Aparecida; Macário, Paulo Fabrício; Silva, Newton Soares da; Marques, Francisco Chagas; Vieira, LuciaBacterial contamination in hospital environments is a significant concern for patient admissions. Aiming to reduce contamination, titanium dioxide film (TiO2) in the anatase phase has been prepared on the surface of polyvinyl chloride (PVC) tubes. The PVC tube material was used to study the film’s effectiveness in inhibit- ing bacterial growth and cell viability. The morphology and composition of deposited films were investigated using a Scanning Electron Microscope (SEM) and Energy Dispersive Spectroscopy (EDS) map. In addition, Fourier-Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and XRD diffractogram were used to analyze film composition and phase, respectively. The adhesion of TiO2 film on PVC substrate was determined using ScotchTM tape-test according to ASTM: D3359-09, 2010, and the film surface morphology was analyzed by the MEV-FEG tech- nique and EDS map. The bacterial viability was performed with Staphylococcus aureus, and cell viability was performed using L929 strain mouse fibroblasts. The results of TiO2 in the anatase phase deposited by ALD on the PVC surface demonstrate good adherence and the film’s effectiveness in inhibiting bacterial growth and cell viability.Item Desenvolvimento de biomaterial à base de Acmella Oleracea (L.) R. K. Jansen com atividades cicatrizante, antibacteriana e antitumoral(2021-05-25) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Perazzo, Fabio Ferreira; Silva, Carlos Augusto Priante da; Menegon, Renato Farina; São José dos CamposAcmella oleracea popularmente conhecida como jambu, é utilizada na medicina alternativa e culinária popular do Brasil e diversos outros países, tendo diversos metabólitos secundários associados à sua bioatividade, como compostos fenólicos e flavonoides. Estas atividades incluem sua capacidade anestésica, antibacteriana e cicatrizante. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver uma membrana de quitosana a base do extrato foliar de A. oleracea para aplicação médica em feridas superficiais, avaliando sua capacidade antibacteriana, cicatrizante e antitumoral, para indicação no tratamento de câncer epidermóide. O extrato metanolico utilizado foi obtido por maceração assistida por ultrassom e em seguida fracionado com os solventes Acetato de etila e Butanol. A atividade cicatrizante e tóxica das amostras (Extrato bruto, Fração Butanol e Fração Acetato de etila) assim como o biomaterial (Membrana de quitosana, Membrana de quitosana associada ao extrato bruto e Membrana de quitosana associada a fração butanol) foram avaliadas através da capacidade proliferativa em linhagem L929 (fibroblasto de camundongo) e HEp-2 (Carcinoma de laringe humana) por fechamento de ferida in vitro e ensaios de citotoxicidade (Cristal violeta e MTT), além de genotoxicidade por teste de micronúcleo. A ação antibacteriana dos extratos e membrana em cepas Staphylococos aureus e Escherichia coli, foi avaliada pela densidade celular e formação unidades formadoras de colônias a partir do contato com o biomaterial. Estes testes mostraram a capacidade do material de aumentar a proliferação celular e atividade mitocondrial e não levar à formação de micronúcleos em linhagem L929 pela fração butanol, não observado o mesmo na fração acetato de etila e extrato bruto, havendo queda da viabilidade neste último. A atividade antitumoral avaliada pelos mesmos testes em linhagem HEp-2 (Câncer de laringe humano) determinou a capacidade citotóxica da fração butanol ao reduzir a densidade celular e atividade mitocondrial, o que também foi observado na fração acetato de etila e extrato bruto principalmente na maior concentração testada de 1000 µg/mL, não havendo o fechamento da ferida in vitro. Teste de citotoxicidade com microrganismos determinaram a capacidade dos extratos e frações em evitar infecções oportunistas que forem infligidas por S. aureus, sendo todas as amostras eficientes em reduzir o número de bactérias. A fração butanol apresentou um maior rendimento, melhor atividade proliferativa e cicatrizante, não genotóxica e antibacteriana para a cepa S. aureus quando comparado ao extrato bruto e fração Acetato de etila. Ao avaliar a ação das membranas por citotoxicidade indireta observa-se o aumento da densidade celular em células L929 quando incubadas com a membrana associada ao extrato bruto em 48 h de incubação e ação citotóxica do biomaterial associado a fração butanol frente ao teste de cristal violeta, porém havendo aumento da atividade mitocondrial em todos os grupos. Em contrapartida há redução na densidade celular do biomaterial contendo extrato bruto em células HEp-2 e baixa da atividade mitocondrial para a célula em todos os grupos. Apenas a membrana com extrato bruto apresentou atividade antibacteriana com redução no número de células e sem nenhuma unidade de colônia formada. Sendo a única membrana também a permanecer liberando seus compostos após 48h de degradação enquanto outras degradaram em 24h, além de não apresentarem formação de poros visto por microscopia eletrônica de varredura. O biomaterial contendo o extrato bruto foi apontado como a mais viável a compor uma membrana que servirá como biomaterial liberador para atuar em casos de feridas cutâneas, induzindo a cicatrização, matando células tumorais testadas e evitando a infecção local.Item Desenvolvimento de método de detecção múltipla e simultânea de anticorpos da classe IGM contra Toxoplasma Gondii, rubéola e citomegalovírus(2022-12-14) Soares, Cristina Pacheco; Ferreira-Strixino, Juliana; Raniero, Leandro José; Ogawa, Guilherme Maerschner; Almeida, Rainara Moreno Sanches de; Silva, Newton Soares da; São José dos CamposO diagnóstico sorológico durante a triagem pré e neonatal é de extrema importância na prevenção de doenças. Dentre as doenças infecciosas, as mais comuns são a toxoplasmose, rubéola e citomegalovírus. Os métodos tradicionais de diagnóstico utilizados na triagem neonatal detectam por ensaio um único agente infeccioso. A utilização de métodos de detecção múltipla e simultânea aumenta a produtividade e diminui a quantidade de material utilizado, resultando em um ensaio mais eficiente do ponto de vista técnico, ambiental e econômico. O objetivo do nosso estudo é desenvolver um método de detecção simultânea de anticorpos da classe IgM contra Toxoplasma gondii, rubéola e citomegalovírus. Para isso foram realizados acoplamentos de diferentes antígenos em microesferas magnéticas, seguido de ensaios de desempenho para identificar os melhores parâmetros a serem utilizados, como melhor concentração e tampão. Após definido os acoplamentos, foram realizados ensaios para obtenção dos valores de corte, sensibilidade e especificidade de cada antígeno acoplado. Em seguida, foram realizados ensaios de desempenho para validação analítica dos produtos diagnósticos seguindo as normas na Agência Nacional de Vigilancia sanitaria (ANVISA). Os parâmetros avaliados foram repetibilidade, reprodutibilidade, linearidade, robustez, alta dose, limite mínimo de detecção, especificidade analítica e estabilidade acelerada. Todos os dados obtidos atenderam aos critérios de aceitação da RDC 166/17 para utilização do produto diagnóstico em território nacional. Os ensaios de repetibilidade e reprodutibilidade apresentaram Constante de Variação (CV) menor que 15% entre as replicatas do mesmo operador e operadores distintos. O kit apresentou linearidade em toda a faixa de trabalho com R2 acima de 0.990 e não foi observado efeito de alta dose de anticorpos na diluição de trabalho escolhida. Além disso, o kit não apresentou interferência da matriz com os resultados e foi observado que pequenas e deliberadas alterações no tempo de incubação de cada reagente não afetam de forma significativa nos dados obtidos.Item Desenvolvimento de microcápsulas bactericidas contendo óleo essencial de Syzygium aromaticum (cravo-da-índia) e Schinus terebinthifolius Raddi (Pimenta Rrosa) para higienização em colchão hospitalar(2021-12-09) Vieira, Lúcia; Mendes, Alessandro Corrêa; Silva, Newton Soares da; Fonseca, Bruno Guedes; Santos, Ricardo Mendonça Neves dos; Célia, Regina; São José dos CamposO principal objetivo desse trabalho foi desenvolver microcápsulas bactericidas para higienização de colchão hospitalar. Para tanto procurou-se materiais biológicos que tivessem propriedade bactericida. Optou-se pelo Syzygium aromaticum e por Schinus terebinthifolius Raddi, popularmente conhecidos como cravo-da-índia e pimenta rosa, respectivamente, reconhecidos pelas comprovadas ações inseticida, bactericida e antifúngica. Dentre os materiais de paredes das microcápsulas, optou-se pela goma arábica, por sua alta solubilidade em água, e capacidade emulsificante, devido à fração proteica que se liga aos blocos de carboidratos hidrofílicos, sendo essas cadeias de proteínas capazes de adsorver na interface óleo/água. A gelatina, também foi utilizada por seu caráter anfótero, e por poder atuar como molécula catiônica ou aniônica, dependendo do pH do meio. O glutaraldeído é um agente químico usado para formação de ligações cruzadas em proteínas. Sua estrutura, com dois aldeídos terminais, é amplamente utilizada na reticulação de microcápsulas produzidas por coacervação. O óleo essencial cravo-da-índia em concentração 1,78% e o óleo essencial pimenta rosa em concentração de 0,06% comprovaram sua eficácia pelas análises microbiológicas, que demonstraram a formação do halo inibitório. Como perspectivas futuras, sugere-se a realização de estudos direcionados para evidenciar efeitos “in vitro”, sobre diferentes bactérias e fungos de importância clínica e ambiental.Item Efeito da terapia fotodinâmica seriada com curcumina em promastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania amazonenses(2021-08-30) Ferreira-Strixino, Juliana; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Maciel, Lucas Tobias Rodrigues; São José dos CamposA Terapia Fotodinâmica (TFD) consiste na utilização de uma fonte de luz e um fármaco fotossensível em comprimento de onda adequado e oxigênio molecular desencadeando a morte celular por meio da formação de espécies reativas de oxigênio. Por se tratar de uma terapia utilizada de forma localizada, a TFD mostra-se ideal para doenças cutâneas. A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma protozoose de elevada prevalência mundial que apresenta diferentes evoluções clínicas podendo resultar em ulcerações e lesões desfigurativas em pele e cartilagens. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito in vitro da TFD de forma seriada com duas aplicações utilizando curcumina como fotossensibilizador. Para isto, utilizou-se a concentração de 125 µg.mL-1 de curcumina em cepas de Leishmania braziliensis e Leishmania amazonensis, com fluência de luz de 10J.cm -2e irradiância de 110 mW.cm-2. Os testes realizados foram a análise da viabilidade, pelo teste de exclusão com Azul de Tripan, análise da internalização do FS por Microscopia confocal e as alterações morfológicas, por coloração de Giemsa/MayGrunwald. Observou-se que houve internalização do FS antes da primeira e segunda aplicação de TFD, com mortalidade de 92% e 82% das cepas de L.braziliensis e L. amazonensis, respectivamente, após a segunda aplicação, e indução de alterações na conformação estrutural, como tamanho da célula e não evidenciação de núcleo e flagelo, demonstrando-se que a TFD foi efetiva. Conclui-se que a TFD seriada apresentou-se efetiva na indução de mortalidade in vitro de formas promastigotas de L. braziliensis e L. amazonensis destacando-se assim o seu potencial para tratamento da leishmaniose.Item Efeitos da fotobiomodulação no crescimento de bactérias intestinais(2020-10-02) Silva, Newton Soares da; Ferreira-Strixino, Juliana; Junqueira, Juliana Campos; Supino, Carolina; São José dos CamposIntrodução: A enterocolite necrotizante é uma doença inflamatória intestinal que ocorre no récem-nascido, mais comumente no prematuro. É a principal causa de morte por doenças gastrointestinais em neonatos, e caracterizada pelo desenvolvimento de necrose intestinal difusa no prematuro submetido a estresse. A alta incidência e a falta de estratégias de tratamentos efetivas sugerem que novas abordagens para o tratamento da doença são necessárias. É neste contexto que surge a possibilidade do uso da fotobiomodulação como modalidade terapêutica. Porém, os estudos sobre a utilização da fotobiomodulação em bactérias intestinais são escassos. Objetivo: Estudar o efeito da fotobiomodulação utilizado em parâmetros clínicos no crescimento de bactérias comumente presentes na microbiota do recém nascido. Metodologia: Foram escolhidos 4 cepas de bactérias para serem estudadas, sendo duas pertencentes a microbiota intestinal saudável, Lactobacillus acidophilus e Lactobacillus reuteri e duas baterias patogênicas, Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Essas bactérias foram cultivadas em crescimento planctônico e irradiadas com LED em comprimento de onda 660 nm e uma densidade de potência de 0,025 W/cm2, em fluências de 1, 5 e 10 J/cm2. A avaliação do crescimento celular foi realizada através de leituras por absorvância nos períodos de 4h, 24h e 48h após irradiação. Resultados: O crescimento de L. acidophilus, L. reuteri e S. aureus não sofreu biomodulação em nenhuma das fluências. O crescimento de E. coli foi estimulado em 1 J/cm2 quando comparado ao grupo Controle, com significância estatística (p<0,005). Nas demais fluências não houve bioestimulação para a bactéria E.coli. Conclusão: O uso do comprimento de onda de 660 nm nas fluências de 5 J/cm2 e 10 J/cm2 nas bactérias estudadas não levou a uma alteração na velocidade de crescimento significativo.Item Efeitos de altas concentrações de cortisol em culturas em monocamada e 3D de linhagens HEp-2 e L929(2021-07-02) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Rodrigues, Paulo Roberto Grangeiro; Nicolau, Renata Amadei; Fonseca, Marcelo de Oliveira; São José dos CamposAo longo do século XX, o câncer se tornou uma das doenças mais letais entre as enfrentadas pela humanidade, levando anualmente centenas de milhares de pessoas à morte, mesmo com a franca evolução dos tratamentos e dos métodos diagnósticos. Frente a esse panorama, cada vez mais estudos relacionam a doença à influência de fatores emocionais, seja em sua gênese ou em seu prognóstico. O cortisol é descrito como o principal hormônio do estresse no corpo humano. Os corticoides podem aumentar a proliferação celular e as espécies reativas de oxigênio que contribuem para o dano ao DNA, e a exposição prolongada ao estresse pode contribuir para que os tecidos se tornem insensíveis ao cortisol. Este estudo explora a influência do cortisol no desenvolvimento de células tumorais, particularmente em células humanas de carcinoma da laringe humana (HEp-2). Para tanto, as células HEp-2 foram expostas a concentrações crescentes de cortisol (hidrocortisona) por 24 ou 48 horas, e o ensaio de proliferação de citotoxicidade (ensaio de MTT) (ensaio de cristal violeta) e cultura 3D imunomarcada para fibronectina e FAK foram realizados. O grupo tratado com hidrocortisona apresentou aumento significativo da atividade mitocondrial, enquanto o grupo tratado para avaliação pelo cristal violeta apresentou comportamento semelhante ao grupo de controle. O presente estudo concluiu também que a administração de hidrocortisona em esferóides tumorais de linhagem HEp-2 afetou a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente, sendo esse seu principal achado. Os resultados apresentados demonstram a influência de corticoides em células tumorais. Concluiu-se que a administração de hidrocortisona em esferoides tumorais de linhagem HEp-2 afeta a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente. Embora alguns casos tenham favorecido o uso de corticosteroides em pacientes com câncer, uma análise mais detalhada é necessária antes de prescrevê-los.Item Estresse oxidativo em células SH-SY5Y diante da exposição ao peróxido de hidrogênio(CDRR Editors) Zabeu, Antonieta Marques Caldeira; Rossato, Rafaella Carvalho; Pacheco-Soares, Cristina; Silva, Newton Soares daO estresse oxidativo é consequência da formação excessiva de espécies reativas de oxigênio geradas normalmente pelo metabolismo celular. Essa produção excessiva ocasiona a perda de capacidade de defesa e de reparo, levando a danos nas biomoléculas (DNA, lipídios, proteínas) celulares. Quando estes danos não são reparados, acabam comprometendo o funcionamento da célula, levando-a a morte por apoptose ou necrose. O estresse oxidativo está associado à morte de células neurais como sendo uma das principais causas de doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Alzheimer e doença de Parkinson. O objetivo deste estudo é verificar a ação do peróxido de hidrogênio sendo um modelo de estresse oxidativo em células de neuroblastoma humano. Busca-se analisar a partir de qual concentração ocorre um estresse significante nas células e, em conjunto, verificar esse limiar de concentração em diferentes tempos de ação nas células. Os experimentos realizados compreenderam as análises de atividade mitocondrial obtido por meio do teste de corante tetrazólio (MTT), teste de viabilidade celular utilizando o ensaio de azul de tripano, obtendo-se assim dados quantitativos e qualitativos. Foi possível observar que, a partir da concentração de 0,2 mM durante um intervalo de tempo de 2 horas houve uma diminuição significativa no número de células viáveis em relação ao grupo controle. E, acima dessa concentração, em relação ao tempo, ocorreram mais danos celulares.Item Evaluation of the effect of hydrocortisone in 2D and 3D HEp-2 cell culture(CDRR Editors) Fonseca, Marcelo de Oliveira; Godoi, Bruno Henrique; Silva, Newton Soares da; Pacheco-Soares, CristinaIntroduction: Cancer is one of the diseases with the highest incidence globally and that associated with the patient'semotional state, can act positively or negatively in the treatment. Cortisol is a principal primary stress hormone in the human body. The corticoids can increase cell proliferation and reactive oxygen species that contribute to DNA damage. Prolonged exposure to stress can contribute to tissues becoming insensitive to cortisol, the primary human stress hormone. Objective: This study explores cortisol's influence on tumor cell development, particularly in human cells of carcinoma of the human laryngeal (HEp-2). Methodology: HEp-2 cells were exposed toincreasing cortisol (hydrocortisone) concentrations for 24 or 48 hours, and cytotoxicity (MTT assay) proliferation assay (crystal violet assay), and immunolabeled 3D culture for fibronectin and FAK were analyzed. Results: The group treated with hydrocortisone showed a significant increase in mitochondrial activity, as for the evaluation by the violet crystal, the treated group showed similar behavior to the control. The 3D culture showed dispersed cells within 24hours with reduced FAK labeling; however, no changes were observed within 48 hours. Conclusion: Although some cases favored corticosteroid use in cancer patients, a more detailed analysisis necessary before prescribing them.Item Fotobiomodulação em células musculares e na articulação glenoumeral em simulação da puxada em técnicas de judô(2023-06-15) Lima, Elessandro Váguino de; Silva, Newton Soares da; Ferreira-Strixino, Juliana; Lima, Mário Oliveira; Franchini, Emerson; Ribeiro, Martha Simões; São José dos Campos,Pesquisas com fotobiomodulação tem apresentado resultados positivos no desempenho muscular, além de modular atividades a nível celular. Os objetivos da pesquisa foram: verificar o comportamento em células musculares C2C12, a partir da irradiaçao com LED; analisar o efeito da fotobiomodulação no torque e na fadiga muscular. Tanto as células musculares quanto o músculo deltoide, foram irradiados com LED Sportllux Advanced Pro, intercalados no comprimento de onda vermelho (660±20nm) infravermelho (850±20nm), simultaneamente. O tempo de exposição à irradiação foi de 600s. Para o ensaio de viabilidade as células foram incubadas com 100 ?L de soluomo de Cristal Violeta (CV); a atividade mitocondrial foi avaliada pelo ensaio colorimétrico MTT; o ensaio de fluorescência de núcleo (marcador DAPI) e citoesqueleto (marcador rodamina faloidina) foi realizado para estudar o citoesqueleto com base na alteração nos filamentos de actina. Os resultados da irradiação no estudo in vitro demonstraram: sinergismo da irradiação LED com indução na proliferação de células; efeito significativo (p<0,05) na cultura de células; aumento significativo (p<0,05) na atividade mitocondrial e viabilidade celular. A microscopia de fluorescência apresentou alinhamento dos componentes do citoesqueleto das células após a irradiação. Para analisar o desempenho muscular no estudo clínico, participaram 14 judocas masculinos. O protocolo consistiu em abdução e adução oblíquoa da articulação glenoumeral no dinamômetro isocinético. Os participantes realizaram 8 séries do movimento com a seguinte dinâmica: uma série de 5 repetições na velocidade angular de 90º/s; 4 séries de 10 repetições na velocidade angular de 240º/s; 3 séries de 5 repetições na velocidade angular de 90º/s. O intervalo de recuperação entre as 7 primeiras séries foi de 10s, e entre a 7ª e a 8ª série de 600s. Os participantes foram submetidos a três condições com intervalo de uma semana entre elas: sem aplicação de LED (No-LED), Grupo Controle; com aplicação de LED desligado (LED-Off), Grupo Placebo; com aplicação de LED ligado (LED-On), Grupo Irradiado. Os atletas foram avaliados quanto à percepção subjetiva de esforço após cada série do protocolo e antes do início da última série do protocolo, quanto à percepção subjetiva de recuperação. O atleta teve sua concentração de lactato dosada em 3 momentos: imediatamente, após 300s e após 600s do término da 7ª série do protocolo. Os resultados apontaram que houve instalação gradual de fadiga entre as séries em sequência, porém sem diferença significativa (p>0,05) entre os grupos com ou sem irradiação; houve aumento gradual da percepção de esforço com a dinâmica entre as séries, porém sem diferença significativa (p>0,05) nas condições com ou sem irradiação entre os grupos; a concentração de lactato aumentou após as 7 séries com relação aos valores de repouso, mas sem apresentar diferença significativa (p>0,05) entre os grupos controle, placebo ou irradiado. A conclusão foi de que houve influência no comportamento das células musculares C2C12 para o estudo in vitro; para o estudo clínico a fotobiomodulação pelo dispositivo LED não apresentou diferença significativa em nenhum dos parâmetros analisados.Item Influence of Hydrocortisone in Chemotherapy and Photodynamic Therapy in HEp-2 Cells(Clinics in Oncology) Moraes, Carlos Dailton Guedes de Oliveira; Godoi, Bruno Henrique; Silva, Newton Soares da; Soares, Cristina PachecoAim: Cancer cells exhibit resistance to the immune response by regulating and altering the expression of mediators responsible for immune cell recruitment and disease progression. Cortisol is a natural hormone that may be associated with diseases such as cancer by stimulating stress and altering the cellular environment, favoring uncontrolled division and contributing to the inhibition of the immune response. In contrast, current therapeutic strategies do not present significant concerns about stress as a variable in cancer diagnosis and prognosis. The response of HEp-2 cells to stress induced by hydrocortisone and to treatment with Cyclophosphamide (CP) and Photodynamic Therapy (PDT) was analyzed. Methods: One mM of hydrocortisone induced stress in the cells. Cells were treated with 200 μg/ mL of cyclophosphamide or Aluminum Phthalocyanine Tetrasulfonate (AlPcS4) photosensitizer, LED irradiation (660 nm wavelength), intensity of 25 mW/cm2, power of 70 mW, fluence of 5 J/ cm2, characterizing the PDT. All groups were evaluated after 24 h and 48 h. Results: Assessment of stress-inducing mitochondrial activity and cell viability were performed, and the results demonstrated that hydrocortisone significantly altered the rate of cell death, compromising the effects of CP. Conclusion: However, hydrocortisone did not change the cell death rates caused by PDT, indicating the possibility of this hormone as an alternative therapy.Item Mecanismos de respostas na linhagem celular HEP-2 após tratamentos com terapia fotodinâmica e ciclofosfamida(2020-03-31) Silva, Newton Soares da; Ferreira-Strixino, Juliana; Milhan, Noala Vicensoto Moreira; Moraes, Carlos Dailton Guedes de Oliveira; Soares, Cristina Pacheco; São José dos CamposO câncer é a segunda doença mais letal no mundo, dentre eles pode ser destacado o câncer de laringe, visto que apresenta grande perspectiva de aumento para as próximas décadas. Deste modo são necessários estudos para o desenvolvimento de novas terapias, bem como a combinação de tratamentos já estabelecidos para melhor prognóstico dos pacientes. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta da célula tumoral submetidas à Terapia Fotodinâmica (TFD), Ciclofosfamida (CFM) e aos tratamentos associados. A CFM é um quimioterápico já estabelecido na rotina clínica, pelo seu caráter alquilante e ciclo regulador utilizado para remissão do tumor. A TFD é um tratamento promissor, visto que proporciona a formação de espécies reativas de oxigênio capazes de induzir a morte celular, por meio da interação entre um fotossensibilizante, luz visível em um comprimento de onda adequado ao fotossensibilizante e o oxigênio molecular. Neste trabalho foram utilizadas células de carcinoma epidermoide de laringe (HEp-2), que foram divididas em grupos (Controle +, LED, AlPcS4, LED + CFM, CFM, TFD, TFD + CFM, Morte), sendo avaliadas neste estudo pelos ensaios de Cristal Violeta, MTT e, imunomarcação para GRP-78. O fotossensibilizante alumínio ftalocianina tetrassulfonada (AlPcS4 na concentração de 5µM ), foi utilizado para a TFD, e após 1 hora de incubação as células foram irradiadas com LED Biopdi / Irrad-Led5 660 com 660 nm de comprimento de onda, potência por área de 25 mW/cm2, fluência de 5 J/cm2, por 3 minutos e 20 segundos. A CFM foi utilizada na concentração de 200 µg/mL. Após os tratamentos, nos tempos de incubação de 24, 48 e 72 horas, foi possível verificar redução da densidade celular, pelo cristal violeta, dos grupos CFM, TFD e TFD + CFM em comparação ao Grupo Controle +. Ademais, observamos redução na atividade mitocondrial, pelo teste de MTT, nos grupos TFD e TFD + CFM em relação ao Grupo Controle + nos três períodos analisados. O grupo CFM, por outro lado, apresentou aumento na atividade mitocondrial em relação ao Grupo Controle + nos períodos 24 h e 48 h. O grupo CFM, no período de 72 h, não apresentou diferença estatística quando comparado ao Grupo Controle +. Além disso, pode ser verificado por imunomarcação a presença da proteína de choque térmico GRP-78 nos grupos CFM, TFD e TFD + CFM, já o Grupo Controle + foi negativo para esta imunomarcação. Assim, podemos concluir que os tratamentos tanto com a CFM, quanto com a TFD provocaram dano celular. Embora não apresente melhor eficiência na redução da densidade celular, o tratamento TFD + CFM foi mais promissor, visto que inibe a CFM inibe a proliferação celular de possíveis células sobreviventes a TFD.Item Modulation of heat shock protein expression and cytokine levels in MCF‐7 cells through photodynamic therapy(Springer-Verlag London Ltd.) Santos, Mariela Inês Batista dos; Godoi, Bruno Henrique; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Ramos, Lucas de Paula; Cintra, Ricardo Cesar; Pacheco‐Soares, CristinaIn this study, we assess the impact of photodynamic therapy (PDT) using aluminum phthalocyanine tetrasulfonate (AlPcS4) on the viability and cellular stress responses of MCF-7 breast cancer cells. Specifically, we investigate changes in cell viability, cytokine production, and the expression of stress-related genes. Experimental groups included control cells, those treated with AlPcS4 only, light-emitting diode (LED) only, and combined PDT. To evaluate these effects on cell viability, cytokine production, and the expression of stress-related genes, techniques such as 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), and real-time quantitative PCR (RT‒qPCR) were employed. Our findings reveal how PDT with AlPcS4 modulates mitochondrial activity and cytokine responses, shedding light on the cellular pathways essential for cell survival and stress adaptation. This work enhances our understanding of PDT's therapeutic potential and mechanisms in treating breast cancer.Item Performance of Multiplex Detection Method of IgM Class Antibodies against Toxoplasma gondii, Rubella and Human Cytomegalovirus(JSciMed Central) Almeida, Rainara Moreno Sanches de; Ogawa, Guilherme Maerschner; Custódio, Paulo Rogério Siqueira; Sampaio, Maria Alcantara Socorro; Silva, Newton Soares da; Soares, Cristina PachecoSerological diagnosis during neonatal screening is crucial in disease prevention. Among the infectious diseases, the most common are toxoplasmosis, rubella, and cytomegalovirus. Traditional diagnostic methods are used to detect a single infectious agent per test. The use of multiplex detection methods increases productivity and reduces the amount of material used, resulting in a more efficient test from a technical, environmental, and economic point of view. The study’s objective was to evaluate the performance of a new diagnostic method aimed at neonatal screening using the multiplex platform of magnetic microspheres from the company Luminex Corporation. For this, tests were carried out for analytical validation of the diagnostic product developed following the rules of the National Health Surveillance Agency (ANVISA) of Brazil. The parameters evaluated were repeatability, reproducibility, linearity, robustness, high dose, minimum detection limit, and analytical specificity. All data obtained met the acceptance criteria of RDC 166/17 of 2017 for the use of the diagnostic product in the national territory. Repeatability and reproducibility tests showed a CV of less than 15% between replicates of the same operator and different operators. The kit showed linearity throughout the operating range with R2 above 0.990, and no effect of high-efficiency dose was observed in the chosen working dilution. In addition, the kit did not show interference from the matrix with the results, and it was observed that small and deliberate changes in the incubation time of each reagent did not have a significant effect on the data obtained.Item Photobiomodulation assay of muscle cells C2C12 after irradiation with LED device(CDRR Editors) Lima, Elessandro Váguino de; Pacheco-Soares, Cristina; Silva, Newton Soares daIntroduction:One of the ways that have been observed to reduce musculoskeletal fatigue is the use of protocols for the application of light sources (photobiomodulation) such as low-intensity laser and LED (Light Emitting Diode). Work involving photobiomodulation has shown promising results in strength performance or reduction of muscle fatigue. At the cellular level,photobiomodulation can modulate fibroblasts proliferation, the fixation and synthesis of collagen and procollagen, promote angiogenesis and improving energy metabolism in mitochondria. Compared with laser devices, LED has several advantages, such as beingsmaller, lighter, lower cost, and easier for operation. Objective:The present work objective is to verify if irradiation with LED device (650 nm and 860 nm) in muscle cells C2C12 modify the viability, morphology and cytoskeleton components. Methodology:C2C12 cells line (ATCC CRL -1772) were cultured in 25 cm2bottles at 37ºC under 5% CO2in DMEM. The cells wereirradiated with the light-emitting diodes (LED) device, Sportllux Ultra that consists of 84 LEDs, each individual LED has 8 mW of power, emitting in 660±20 nm (42 LEDs) and 850±20 nm (42 LEDs), and covering anarea (A) of 120 cm2. The power density of delivered light was 5,6 mW/cm2, and the exposure time was 10 minutes, totalizing the fluence of 3,4 J/cm2. Viability assay was performed where the cells were incubated with 100 μL of Crystal Violet (CV) solution and mitochondrial activity assay was evaluated by the colorimetric MTT assay. Nucleus (DAPI) and Cytoskeleton (Rhodamine Phalloidin) fluorescence assay was performed to study the cytoskeleton based on the change in the actin filaments. Results:Our results demonstrate that the synergism of LED irradiation (660nm and 850nm) induced the proliferation of C2C12 cells. The light-emitting diode (LED) device, Sportllux Ultra has a significant effect on C2C12 cell culture. Mitochondrial activity and cell viability showed a significative increase in their activities after irradiation. The microscopy fluorescence observations showed an alignment of cytoskeletal components of C2C12 cells after irradiation.Conclusion:The application of irradiation with the Sportlux Ultra LED device stimulated an increase of energy by mitochondrial activity assay, number of cells by cell viability assay and alignment of cytoskeleton components by fluorescence assay in C2C12line cells. Our results suggest that organizated cytoskeletal actin filaments normally contribute to cell survival and that induced major cell changes in the cytoskeleton that result in cell shape change. These results suggest that the Sport Lux Ultra LEDdevice can help in the repair of tissue injuries and to collaborate to increase of performance in athletes in a faster wayItem Produção e caracterização de filmes finos de TiO2, via técnica de deposição por camada atômica, visando a aplicações biomédicas(2021-09-30) Vieira, Lúcia; Silva, Newton Soares da; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Marques, Francisco das Chagas; Sales, Rita de Cássia Mendonça; Manfroi, Lucas Augusto; São José dos CamposCom a existência recorrente de bactérias mais resistentes dentro de ambientes hospitalares, associada à imunidade reduzida dos pacientes que os torna mais propensos as infecções. Este trabalho teve como objetivo desenvolver a deposição de filmes finos de dióxido de titânio (TiO2) por meio da técnica de deposição por camada atômica (ALD) sobre a superfície de materiais amplamente utilizados em ambiente hospitalar, como o alumínio, o policloreto de vinila (PVC) e o poliuretano (PU). Para determinar a estrutura química do filme foram utilizadas as análises de Espectroscopia no Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR), com espectroscopia Raman e Espectroscopia por Energia Dispersiva (EDS), que indicaram a distribuição uniforme do filme de TiO2 na fase anatase. Para analisar a morfologia foram utilizadas a Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), a Microscopia de Força Atômica (AFM) e a perfilometria, que apresentaram uma morfologia granular e em placas. A espessura do filme foi determinada por perfilometria de contato utilizando um degrau entre o filme e o substrato e a fotomicrografia de um corte perpendicular ao filme. A aderência foi determinada pelo teste de fita e analisada pela técnica MEV-FEG e mapa de EDS, demonstrando uma boa aderência do filme. Para determinar a atividade biológica foram utilizados testes de viabilidade bacteriana e viabilidade celular, que demonstrou a eficiência do filme como bactericida sem apresentar toxicidade as células. Com base nos resultados obtidos o filme de TiO2 se mostrou muito promissor em ser utilizado para revestir dispositivos médicos e superfícies hospitalares como forma de reduzir a contaminação.Item Produção e caracterização de revestimentos à base de carbono em cerâmica e aço visando aplicações biomédicas(2021-08-06) Vieira, Lúcia; Silva, Newton Soares da; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Radi, Polyana Alves; Martins, Gislene Valdete; Vieira, Angela Aparecida; São José dos CamposA expectativa de vida vem aumentando ao longo dos anos devido ao avanço da medicina, assim o número de idosos vem crescendo, e consequentemente vem aumentando as preocupações com as doenças relacionadas com a idade, como osteoporose, artrose, bradicardia, problemas bucais e entre outros. Dessa forma, a procura por implantes ósseos e dentários vem aumentando bem como o desenvolvimento de novos materiais para serem usados como matéria prima para novos implantes tais como: cerâmica, metais e polímeros. Porém alguns desses materiais tem um custo elevado e outros podem causar problemas a longo prazo como por exemplo, a metalose. A metalose consiste em uma degradação do material quando exposto ao fluído corpóreo e é uma das causas responsáveis por quase todas as cirurgias de substituição de prótese. Esta degradação consiste no desprendimento de íons metálicos da prótese e no acúmulo desses íons sobre os tecidos moles do corpo, levando a uma necrose do tecido ou a um crescimento tumoral. Portanto, são apresentados neste trabalho algumas considerações importantes para obtenção e caracterização de filmes e revestimentos de alótropos de carbono. Estes materiais podem ser utilizados como filme ou revestimento para a proteção de materiais implantáveis, bem como para aumentar a vida útil dos implantes. Para este estudo foram produzidos e caracterizados alótropos de carbono na forma de filmes e revestimentos de carbono. Foram produzidos filmes de DLC depositados à plasma utilizando reator “Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition” (PECVD) e magnetron sputtering em cerâmica MgAl2O4. Foram depositados também, revestimentos de carbono contendo fases de grafite microcristalino via laser cladding em SS316L. Foram realizadas teste biológicos, caracterização mecânica e microestrutural dos filmes obtidos. Os resultados demonstraram a formação de filme de DLC via PECVD em cerâmica com e sem prata sendo melhor probabilidade estatística do filme de DLC+Ag para aplicação biomédica. No revestimento obtido por laser cladding em amostra SS316L foi observada a formação fases de grafite microcristalino e aumento da resistência mecânica do material com o revestimento e melhor probabilidade estatística de osseointegração com a incorporação de TiO2. Com as caracterizações e teste biológico foi possível selecionar o filme e revestimento com melhor probabilidade estatística para aplicação biomédica.Item Síntese de nanopartículas de prata funcionalizadas com amicacina aplicadas contra cepas resistentes de Acinetobacter baumannii(2021-12-07) Camargo, Larissa de Oliveira; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro José; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; São José dos CamposA humanidade se depara com um dos maiores problemas de saúde após décadas de terapia bem-sucedida de acordo com a Organização Mundial da Saúde: bactérias multidrogas resistentes. Dessa maneira, inúmeras pesquisas têm sido realizadas com a intenção de melhorar o espectro de ação dos agentes antimicrobianos existentes e ainda, desenvolver novos fármacos. Há duas substâncias antibacterianas bastante conhecidas, os sais de prata usados desde a Antiguidade e a amicacina, um aminoglicosídeo desenvolvido nos anos 70 com potente atividade contra microrganismos Gram-negativos. Entretanto, devido aos mecanismos evolutivos bacterianos, ambas as drogas perderam a eficácia contra algumas bactérias como Acinetobacter baumannii, um bacilo Gram-negativo nosocomial que pode ser letal em pacientes imunologicamente comprometidos. Objetivando reverter essa problemática, esta pesquisa prevê o desenvolvimento de um nanofármaco a partir de nanopartículas de prata funcionalizadas ao antibiótico amicacina e a avaliação do seu potencial bactericida/bacteriostático contra cepas resistentes de Acinetobacter baumannii. As nanopartículas de prata (AgNPs) foram sintetizadas por meio da redução química entre nitrato de prata e borohidreto de sódio, sendo caracterizadas por espectroscopia UV-Visível na faixa entre 380-400 nm e pelo espalhamento dinâmico de luz. A reação química da carbodiimida foi utilizada para a modificação da amicacina a fim de introduzir grupos dissulfetos no fármaco favorecendo a ligação com as nanopartículas, formando o nanofármaco. A caracterização do processo de modificação do fármaco foi confirmada pela observação dos grupos funcionais moleculares por espectroscopia no infravermelho. Os testes de suscetibilidade como concentração inibitória mínima determinada pela técnica de microdiluição em caldo e concentração bactericida mínima foram realizados de acordo com a padronização internacional ISO 20776-1 usando quatro cepas clínicas de Acinetobacter baumannii multidroga resistentes e uma cepa ATCC (19606) sensível à amicacina para avaliar o potencial bacteriostático e bactericida do nanofármaco (AgNPs@Amicacina) desenvolvido. As AgNPs sintetizadas apresentaram um diâmetro hidrodinâmico de aproximadamente 37nm com uma distribuição bimodal e boa estabilidade química. A conjugação da amicacina com a nanopartícula de prata foi efetiva apresentando bandas de absorção especificas caracterizando o nanofármaco sintetizado. Os testes de susceptibilidade mostram uma grande eficácia das AgNPs@Amicacina contra cepas resistentes de Acinetobacter baumannii apresentando uma concentração bactericida e bacteriostática de 0,5 µg/mL. Esses estudos demonstram dados promissores para o desenvolvimento de um novo antimicrobiano com dosagens mais baixas de aminoglicosídeos, menores efeitos adversos e maior eficácia aplicados em cepas com perfil multidrogas resistentesItem Viabilidade citotoxicidade pré e pós-tratamento de células SH-SY5Y com laser de baixa intensidade(2022-04-12) Zabeu, Antonieta Marques Caldeira; Silva, Newton Soares da; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Granato, Alessandro Eustáquio Campos; Fraga, Sónia Teixeira; Pacheco-Soares, Cristina; São José dos CamposDe acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), a demência poderá afetar 75 milhões de pessoas em 2030, podendo chegar a 132 milhões em 2050. A demência caracteriza-se pela perda gradual da memória e outras habilidades cognitivas que prejudicam a execução de ações básicas diárias dos indivíduos acometidos, sendo os mais conhecidos a Demência Vascular, Demência com Corpos de Lewy, mal de Parkinson, e a Doença de Alzheimer (DA), a qual sozinha corresponde a 60 – 90 % dos casos de demência. A ciência, atualmente, já tem medicamentos eficientes que retardam o processo degenerativo e outras terapias também são utilizadas para coibir a progressão da neurodegeneração, dentre estas, há a fotobiomodulação. Os efeitos fotofísicos, fotoquímicos e fotobiológicos da Terapia á Laser de Baixa Intensidade (TLBI) ou Diodo emissor de luz (LED) mostram-se eficientes na prevenção e retardo de processos degenerativos. No presente trabalho, busca-se avaliar o comportamento da célula SH-SY5Y, modelo celular para estudos de doenças degenerativas como DA, frente à irradiação com TLBI e observar alterações ocorridas quanto à viabilidade celular, atividade mitocondrial e citotoxicidade. As células foram irradiadas com laser de baixa intensidade (830 nm, 200 mW, spot size 0,1075 cm2, modo contínuo) com energias de 1, 5, 10, 15 e 20 J, em sequência, foram induzidas ao estresse oxidativo por peróxido de hidrogênio e tratadas com TLBI pré e pós-estresse. As avaliações foram feitas pelo ensaio com Cristal Violeta, potencial de membrana mitocondrial, teste MTT, e ensaio de exclusão de células inviáveis pelo azul de tripano para avaliação de citotoxicidade. As análises estatísticas dos resultados foram realizadas por ANOVA Two-way e pós-teste de Tukey. Os resultados obtidos, dentro das condições experimentais e dos parâmetros pré-estabelecidos para o LBI, indicam que foi biomodulador o efeito da fototerapia para a viabilidade celular, não ocorreu morte celular por efeito citotóxico e houve ativação mitocondrial. Conclui-se que dentro das condições experimentais e dos parâmetros pré-estabelecidos para o LBI, as doses de energia entregues ao modelo celular SH-SY5Y que tiveram melhor interação foram 5, 10 e 15 J.