Navegando por Assunto "Fotoquimioterapia"
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Item Efeito antimicrobiano da membrana amniótica isolada e associada à terapia fotodinâmica(2023-03-02) Sant'Anna, Luciana Barros; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Tada, Dayane Batista; Santos, Amanda Cerquearo Rodrigues dos; Ferreira-Strixino, Juliana; São José dos CamposDevido ao avanço da resistência bacteriana aos tratamentos convencionais, a busca por terapias alternativas isoladas ou combinadas, como a utilização da membrana amniótica (MA), produtos antimicrobianos e a terapia fotodinâmica (TFD), vem aumentando a fim de alcançar um controle microbiano eficaz e adequado. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da MA isolada e associada à TFD utilizando a solução de PHTALOX® (PHTX) como fotossensibilizador (FS), frente a biofilmes de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Foram realizados dois experimentos independentes em triplicata dos grupos experimentais: Grupo C+, Grupo L, Grupo PHTX, Grupo TFD, Grupo MA, Grupo MA+L, Grupo MA+PHTX, Grupo MA+TFD. A montagem dos biofilmes foi realizada a partir do preparo de inóculos de S. aureus e P. aeruginosa (108 células/mL), e incubação de 48 horas a 37 ºC. Para obtenção da MA, cinco placentas humanas foram obtidas a partir de cesárias eletivas, após consentimento prévio e todos os exames sorológicos negativos (5.200.827/CEP/2021). Após o processamento e a criopreservação, a MA permaneceu em contato com os biofilmes por 24 horas a 37 ºC, nos grupos que envolviam este tratamento. O FS de estudo foi uma ftalocianina comercial (PHTALOX®), com tempo de incubação de 15 minutos a 37 ºC em ausência de luz. Nos grupos onde se realizou TFD, o tempo de incubação foi seguido de irradiação a partir de um dispositivo com 24 LEDs, com emissão de luz em 660 nm, densidade de potência de 30 mW.cm-², densidade de energia de 50 J.cm-2 e tempo de irradiação de 28 minutos e 18 segundos. Os resultados obtidos foram analisados por meio da contagem de UFC/mL, teste de atividade metabólica por MTT, e análise estatística, considerado estatisticamente significante p<0,05. A internalização do FS foi verificada por meio da fluorescência, e foi também realizado o espectro de absorção, quantificação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e rendimento quântico de oxigênio singleto (1O2) da solução de PHTALOX®. A verificação da integridade da MA foi verificada após os tratamentos por microscópio eletrônico de varredura (MEV). A solução de PHTALOX® apresentou pico máximo de absorção em 228, 333 e 690 nm e baixa fluorescência se concentrando superficialmente nas células bacterianas. Em relação à geração de ERO, foi obtida diferença estatística (p<0,05) nos grupos PHTX e TFD quando comparados ao grupo C+, contudo não foi observada geração de 1O2. Os grupos MA, MA+PHTX, PHTX, TFD e MA+TFD demonstraram diferença estatística (p<0,05) quando comparados ao C+ em relação à diminuição de UFC/mL e da atividade metabólica. Entretanto, não foi observada diferença estatística em relação à diminuição de UFC/mL na análise entre os grupos PHTX e TFD, e, MA+PHTX e MA+TFD. A análise por MEV em ambas as faces da MA demonstrou alterações morfológicas relevantes nos grupos MA+PHTX e MA+TFD, contudo tal alteração não impossibilitou seu efeito antimicrobiano. Com isso, conclui-se que o tratamento isolado com a MA e com a solução de PHTALOX® foram eficazes contra biofilme de S. aureus e P. aeruginosa, e que a associação destes potencializou o efeito antimicrobiano desse tratamento. Contudo, as demais análises apontaram que a fotoatividade da PHTALOX® foi menor do que ftalocianinas encontradas na literatura.Item Efeito da terapia fotodinâmica com azul de toluidina sobre biofilme multiespécie de C. albicans E C. krusei(2023-03-08) Costa, Maricília Silva; Soares, Luís Eduardo Silva; Silva, Carlos Alberto; Rodrigues, Ana Beatriz Furtado; São José dos CamposBiofilmes são agrupamentos de microrganismos que garantem vantagens e alto nível de organização, elevado índice de sobrevivência a condições adversas, além de proteção contra a ação de antimicrobianos e evasão do sistema imunológico. Podem ser formados por uma ou mais espécies, sendo que aqueles constituídos por diferentes espécies são mais resistentes a ação das drogas. Até o presente momento estão disponíveis para terapia convencional um pequeno número de antifúngicos, divididos em três classes: polienos, azóis e equinocandinas. São tratamentos que podem apresentar efeitos colaterais como nefrotoxicidade. A terapia fotodinâmica (TFD) é uma técnica que se baseia na interação da luz com o fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular, acarretando numa reação fotoquímica que gera espécies citotóxicas que promovem morte celular. Há algum tempo vem sendo empregada no tratamento de infecções cutâneas, pois apresenta poucos efeitos adversos para o paciente. Tendo em vista o desafio de tratar infecções causadas por microrganismos resistentes e que estejam acompanhadas de biofilmes, torna-se necessária a busca por tratamentos para infecções com múltiplas espécies, sobretudo que tragam menos riscos. Com isso, o presente estudo visa analisar os efeitos da TFD com azul de toluidina (AT) sobre biofilme multiespécie formado de C. albicans e C. krusei. Para realização dos experimentos as culturas foram cultivadas em ágar Sabouraud e incubadas em estufa bacteriológica por 48h, a 37°C. Após este período, uma amostra de cada espécie foi recolhida e suspensa em solução fisiológica estéril. Como fonte de luz visível foi empregado um diodo emissor de luz (LED) com potência de 0,068 W, iluminando uma área de 0,38 cm², comprimento de onda de 630nm e densidade de energia de 30 J.cm-2, e tempo de irradiação de 2 minutos e 45 segundos. A atividade metabólica do biofilme foi determinada por reação de redução do sal XTT, além de observação ao microscópio. Pode-se concluir que, com base nos dados obtidos no presente estudo, a TFD com AT apresentou efeito sobre o biofilme multiespécie formado, promovendo redução de sua atividade metabólica.Item Efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana com photodithazine® sobre Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA): estudos em biofilmes e modelo experimental de Galleria mellonella(2022-02-24) Souza, Beatriz Müller Nunes; Ferreira-Strixino, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Pacheco-Soares, Cristina; Miñán, Alejandro Guillermo; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposInfecções por Staphylococcus aureus são consideradas um grave problema de saúde, gerando altos índices de mortalidade. O tratamento convencional para essas infecções é feito por meio da administração de antibióticos, porém o uso indiscriminado destes fármacos pode selecionar microrganismos resistentes. Por este motivo, é necessário o desenvolvimento de alternativas para a antibioticoterapia, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) que se baseia em um método terapêutico que emprega um fotossensibilizador (FS) e uma fonte de luz com comprimento de onda adequado ao FS, capazes de interagir com o oxigênio molecular formando espécies reativas de oxigênio, responsáveis pela inativação celular. O trabalho teve como objetivo analisar, in vitro e in vivo, a ação da TFDa com Photodithazine® (PDZ) em cepa de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA). Para o método in vitro, o biofilme de S. aureus foi incubado com PDZ nas concentrações de 50 e 75 µg.mL-1 durante 15 minutos e a irradiação foi realizada com as fluências de 25, 50 e 100 J/cm². Foram avaliadas a internalização do FS, a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano, a aderência e a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura, antes e após aplicação da terapia. No método in vivo, inicialmente a cepa foi inoculada em modelos de Galleria mellonella e após a aplicação da TFDa foi analisada curva de sobrevivência, escala de saúde, análise hemócitária e UFC/mL de S. aureus na hemolinfa. Nos resultados in vitro, foi observada a redução bacteriana nas diferentes concentrações de PDZ, destacando os parâmetros de 75 µg.mL-1 de PDZ e 100 J/cm². Já nos resultados in vivo, a TFDa aumentou a sobrevida e estimulou o sistema imune das larvas de G. mellonella infectadas por S. aureus. A TFDa em ambos os métodos foi eficaz, demonstrando o potencial da terapia como uma alternativa no tratamento de infecções bacterianas por MRSA.Item Nanopartículas polieletrolíticas de poli(ácido lático-co-ácido glicólico) contendo um derivado de ftalocianina para aplicação em terapia fotodinâmica(2020-07-08) Toledo, Maria Cristina Modesto Clementino de; Simioni, Andreza Ribeiro; Goncalves, Erika Peterson; Sakane, Kumiko Koibuchi; Liu, Andréa Santos; São José dos CamposA Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade alternativa para tratamento de tecidos neoplásicos, que se baseia na administração de um fármaco fotossensível e irradiação de luz em um comprimento de onda adequado, visando localizar e destruir a célula alvo do tratamento, a partir da formação de espécies reativas de oxigênio. A tecnologia de nanoencapsulação se apresenta como uma ferramenta para incorporação de substâncias bioativas,visando melhorar a sua solubilidade em ambiente fisiológico, obter um maior tempo de circulação no organismo, administração de menores dosagens e a minimização de efeitos colaterais. O presente trabalho visou o desenvolvimento de nanopartículas depoli(ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA)revestidas com camadas de filmes de polieletrólitos para o encapsulamento da zinco ftalocianina tetrassulfonada (ZnPcSO4), como modelo de substância bioativa. As nanopartículas de PLGA foram produzidas pela técnica de dupla emulsão/evaporação do solvente e o recobrimento polieletrolítico foi realizado utilizando o hidrocloreto de poli-alilamina(PAH)como um policátion fraco e o poli-(4-estireno sulfonato de sódio)(PSS)como um poliânion forte pela técnica de automontagem camada por camada (conhecida como layer-by-layer-LbL)As nanopartículas de PLGA revestidas por polieletrólitos apresentaram diâmetro médio de 384,7 ± 138,6 nm, tamanho de distribuição restrito com um índice de polidispersidade de 0,180. A mudança óbvia do potencial zeta indica alternância bem-sucedida na deposição do policátion (PAH) e do poliânion (PSS) diretamente nas nanopartículas de PLGA.A análise por microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostrou que o sistema formado apresenta morfologia esférica, típica destes sistemas de liberação. A eficiência de carregamento foi de 82,1% ± 1,2%. As nanopartículas polieletrolíticas carregadas com a ftalocianina mantiveram seu comportamento fotofísico após o encapsulamento. A viabilidade celular foi determinada, obtendo-se 90% de morte celular. Todas as caracterizaçõesfísico-químicas, fotofísicas e fotobiológicas indicaram que as nanopartículas polieletrolíticas carregadas com a ftalocianina são um sistema promissor de administração de medicamentos para terapia fotodinâmica e fotoprocessos .Item Synthesis and characterization of photosensitive gelatin-based hydrogels for photodynamic therapy in HeLa-CCL2 cell line(Elsevier) Ambrósio, Jéssica Aparecida Ribeiro; Pinto, Bruna Cristina dos Santos; Marmo, Vitor Luca Moura; Santos, Kennedy Wallace dos; Beltrame Junior, Milton; Pinto, Juliana Guerra; Ferreira-Strixino, Juliana; Raniero, Leandro José; Simioni, Andreza RibeiroBackground: Hydrogel systems are increasingly gaining visibility involving biomedicine, tissue engineering, environmental treatments, and drug delivery systems. These systems have a three-dimensional network composition and high-water absorption capacity, are biocompatible, allowing them to become an option as photosensitizer carriers (PS) for applications in Photodynamic Therapy (PDT) protocols. Methods: A nanohydrogel system (NAHI), encapsulated with chloroaluminium phthalocyanine (ClAlPc) was synthesized for drug delivery.. NAHI was synthesized using gelatin as based polymer by the chemical cross-linking technique. The drug was encapsulated by immersing the hydrogel in a 1.0 mg.mL 1 ClAlPc solution. The external morphology of NAHI was examined by scanning electron microscopy (SEM). The degree of swelling of the synthesized system was evaluated to determine the water absorption potential. The produced nanohydrogel system was characterized by photochemical, photophysical and photobiologial studies. Results: The images from the SEM analysis showed the presence of three-dimensional networks in the formulation. The swelling test demonstrated that the nanohydrogel freeze-drying process increases its water holding capacity. All spectroscopic results showed excellent photophysical parameters of the drug studied when served in the NAHI system. The incorporation efficiency was 70%. The results of trypan blue exclusion test have shown significant reduction (p < 0.05) in the cell viability for all groups treated with PDT, in all concentrations tested. In HeLa cells, PDT mediated by 0,5 mg.mL 1 ClAlPc encapsulated in NAHI showed a decrease in survival close to 95%. In the internalization cell study was possible to observe the internalization of phthalocyanine after one hour of incubation, at 37 ◦C, with the the accumulation of PS in the cytoplasm and inside the nucleus at both concentrations tested. Conclusions: Given the peculiar performance of the selected system, the resulting nanohydrogel is a versatile platform and display potential applications as controlled delivery systems of photosensitizer for photodynamic therapy application.