Efeitos dos métodos de preservação na morfologia das sub-regiões da membrana amniótica humana : estudo por microscopia eletrônica de varredura
| dc.contributor.advisor | Sant'Anna, Luciana Barros | |
| dc.contributor.author | Moura, Ana Clara Rezeck | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Arisawa, Emília Angela Loschiavo | |
| dc.contributor.referee | Vasconcellos, Luana Marotta Reis de | |
| dc.date.accessioned | 2024-04-01T18:38:23Z | |
| dc.date.available | 2024-04-01T18:38:23Z | |
| dc.date.issued | 2023-03-06 | |
| dc.description.abstract | A membrana amniótica (MA) ou âmnio tem atraído atenção como biomaterial para a medicina regenerativa, se consolidando como adjuvante em diversos tratamentos. Sua utilização baseia- se na capacidade de beneficiar o processo de epitelização, reduzir processos inflamatórios e antifibróticos promover a angiogênese, assim acelerando o processo cicatricial. Essas propriedades são atribuídas à morfologia e a fatores solúveis e insolúveis presentes na estrutura da MA, o que torna imprescindível sua correta preservação. Ademais, têm sido demonstrados algumas diferenças entre regiões anatômicas da MA, sugerindo que essas regiões apresentam diferentes potenciais na regeneração tecidual. Porém ainda não se conhecem os efeitos dos diferentes métodos de preservação sobre a integridade dessas regiões. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a morfologia da membrana amniótica nas suas diferentes regiões anatômicas, âmnio placentário (PA) e âmnio refletido (RA), e em seus lados epitelial e mesenquimal, após diferentes métodos de preservação, por meio da microscopia eletrônica de varredura. Sete placentas humanas, a termo, foram processadas, separando a MA do córion. Após lavagem com solução antibiótica e antifúngica foi dividida em 4 sub-regiões: central (R1), intermediária (R2), periférica (R3) e âmnio refletido (R4), de acordo com sua posição relacionada ao cordão umbilical. Em seguida, as membranas de cada sub-região foram fragmentadas e preservadas, seguindo o protocolo para cada grupo experimental. No grupo controle, os fragmentos de membrana, foram imersos imediatamente em fixador para MEV; no grupo fresca, os fragmentos foram imersos em meio Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), (temperatura ambiente, 24ºC, por 18h); e no grupo criopreservada, os fragmentos foram imersos em meio DMEM/glicerol 1:1 a -80ºC por 30 dias. Após o tempo de preservação proposto para cada grupo experimental, os fragmentos de MA de cada uma das regiões foram processados para a Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A análise das micrografias eletrônicas, do lado epitelial do grupo controle, demonstrou que as células apresentaram formato hexagonal, pouco globosas em R1 e achatadas em R4, com padrão em mosaico, junção intercelular bem definidas, microvilos roliços, densos e aglomerados na região apical e bordas das células. As regiões R2 e R3 apresentaram células com formato mais circular e globoso, junções intercelulares aumentadas e microvilos achatados e colabados às células. Já no grupo fresca houve perda de definição dos microvilos, das junções intercelulares e as células apresentaram tamanhos variados. Entretanto, o grupo criopreservada apresentou aspectos morfológicos similares ao grupo controle. No grupo criopreservada, a morfologia de todas as sub-regiões apresentou superfície uniforme/homogênea, com células em forma poligonal e junções intercelulares definidas, dentro do padrão de normalidade. No lado mesenquimal da MA, as variações nos aspectos microscópicos foram menores, demonstrando pouca diferenciação entre as 4 sub-regiões. Tanto o método fresca, quanto o criopreservada mantiveram a trama colágena homogênea, densa e compacta, com variação apenas na conformação da superfície mesenquimal. Finalmente, a criopreservação foi considerada ótima para preservar a integridade epitelial e estromal/mesenquimal, nas quatro sub-regiões da MA. | |
| dc.description.abstract2 | The amniotic membrane (AM) or amnion has attracted attention as a biomaterial for regenerative medicine, consolidating itself as an adjuvant in the treatment of ocular surface diseases, burns, prevention of tissue adhesion in surgeries of the head, abdomen, pelvis, vagina and larynx, among others. Its use is based on its capacity to benefit the epithelialization process, reduce inflammatory and antifibrotic processes, and promote angiogenesis, thus accelerating the healing process. These properties are attributed to the morphology and to soluble and insoluble factors present in the structure of AM, which makes its correct preservation essential. Moreover, some differences between anatomical regions of the AM have been demonstrated, suggesting that these regions have different potentials in tissue regeneration. However, the effects of different preservation methods on the integrity of these regions are still unknown. In this context, the aim of this study was to evaluate the morphology of the amniotic membrane in its different anatomical regions, placental amnion (PA) and reflected amnion (RA), and on its epithelial and mesenchymal sides, after different preservation methods, by scanning electron microscopy. Seven human placentas, at term, were obtained at Santa Casa Hospital in São José dos Campos and transported to the laboratory where, under sterile conditions, the MA was separated from the chorion, processed with antibiotic and antifungal solution and divided into 4 subregions: central (R1), intermediate (R2), peripheral (R3) and reflected amnion (R4), according to their position related to the umbilical cord. Then, the membranes from each subregion were fragmented and preserved, following the protocol for each experimental group. In the control group, the membrane fragments, after being processed, were immersed immediately in fixative for SEM; in the fresh group, the fragments were immersed in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) at room temperature (24ºC) for 18h; and in the cryopreserved group, the fragments were immersed in DMEM/glycerol 1:1 medium at -80ºC for 30 days. After the preservation time in each experimental group, the MA fragments from each of the regions were processed for Scanning Electron Microscopy (SEM). The electron micrograph analysis, on the epithelial side, control group, the cells showed a hexagonal shape, slightly globose for R1 and flattened for R4, mosaic pattern, well-defined intercellular junction, plump, dense and clumped microvilli in the apical region and edges of the cells. The R2 and R3 regions showed cells with a more circular and globular shape, increased intercellular junction, and flattened and collapsed microvilli to the cells. In the fresh group there was a loss of definition of the microvilli, intercellular junctions, and the cells presented varied sizes. However, the cryopreserved group presented morphological aspects similar to the control group. In the cryopreserved group the morphology of all sub-regions showed a uniform/homogeneous surface, with polygonal cell shape and defined intercellular junctions and spaces, within the normal pattern. On the mesenchymal side of the AM, variations in microscopic aspects were smaller, demonstrating little differentiation between the four sub-regions. Both the fresh and cryopreserved methods maintained a dense and compact collagen network, with variation obly in the conformation of the mesenchymal surface. Finally, cryopreservation was considered optimal to preserve epithelial and stromal/mesenchymal integrity, in all four sub-regions of the AM. | |
| dc.description.physical | 69 f. | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.affiliation | Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | MOURA, Ana Clara Rezeck. Efeitos dos métodos de preservação na morfologia das sub-regiões da membrana amniótica humana: estudo por microscopia eletrônica de varredura. São José dos Campos, SP, 2023. 68 f.; PDF Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2023. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/356 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | Univap | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | Mestrado em Engenharia Mecânica | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Âmnio | |
| dc.subject.keyword | Microscopia Eletrônica de Varredura | |
| dc.subject.keyword | Preservação de Tecido | |
| dc.title | Efeitos dos métodos de preservação na morfologia das sub-regiões da membrana amniótica humana : estudo por microscopia eletrônica de varredura | |
| dc.title.alternative | Effects of preservation methods on the morphology of human amniotic membrane sub-regions: a study by scanning electron microscopy | |
| dc.type | Dissertação | |
| dc.type.masterDegree | Mestrado Acadêmico |