Efeito antimicrobiano da membrana amniótica isolada e associada à terapia fotodinâmica

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dc.contributor.advisorSant'Anna, Luciana Barros
dc.contributor.authorSantos, Amanda Cerquearo Rodrigues dos
dc.contributor.coadvisorFerreira-Strixino, Juliana
dc.contributor.event2São José dos Campos
dc.contributor.refereeArisawa, Emília Angela Loschiavo
dc.contributor.refereeTada, Dayane Batista
dc.date.accessioned2024-03-20T15:32:34Z
dc.date.available2024-03-20T15:32:34Z
dc.date.issued2023-03-02
dc.description.abstractDevido ao avanço da resistência bacteriana aos tratamentos convencionais, a busca por terapias alternativas isoladas ou combinadas, como a utilização da membrana amniótica (MA), produtos antimicrobianos e a terapia fotodinâmica (TFD), vem aumentando a fim de alcançar um controle microbiano eficaz e adequado. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da MA isolada e associada à TFD utilizando a solução de PHTALOX® (PHTX) como fotossensibilizador (FS), frente a biofilmes de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Foram realizados dois experimentos independentes em triplicata dos grupos experimentais: Grupo C+, Grupo L, Grupo PHTX, Grupo TFD, Grupo MA, Grupo MA+L, Grupo MA+PHTX, Grupo MA+TFD. A montagem dos biofilmes foi realizada a partir do preparo de inóculos de S. aureus e P. aeruginosa (108 células/mL), e incubação de 48 horas a 37 ºC. Para obtenção da MA, cinco placentas humanas foram obtidas a partir de cesárias eletivas, após consentimento prévio e todos os exames sorológicos negativos (5.200.827/CEP/2021). Após o processamento e a criopreservação, a MA permaneceu em contato com os biofilmes por 24 horas a 37 ºC, nos grupos que envolviam este tratamento. O FS de estudo foi uma ftalocianina comercial (PHTALOX®), com tempo de incubação de 15 minutos a 37 ºC em ausência de luz. Nos grupos onde se realizou TFD, o tempo de incubação foi seguido de irradiação a partir de um dispositivo com 24 LEDs, com emissão de luz em 660 nm, densidade de potência de 30 mW.cm-², densidade de energia de 50 J.cm-2 e tempo de irradiação de 28 minutos e 18 segundos. Os resultados obtidos foram analisados por meio da contagem de UFC/mL, teste de atividade metabólica por MTT, e análise estatística, considerado estatisticamente significante p<0,05. A internalização do FS foi verificada por meio da fluorescência, e foi também realizado o espectro de absorção, quantificação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e rendimento quântico de oxigênio singleto (1O2) da solução de PHTALOX®. A verificação da integridade da MA foi verificada após os tratamentos por microscópio eletrônico de varredura (MEV). A solução de PHTALOX® apresentou pico máximo de absorção em 228, 333 e 690 nm e baixa fluorescência se concentrando superficialmente nas células bacterianas. Em relação à geração de ERO, foi obtida diferença estatística (p<0,05) nos grupos PHTX e TFD quando comparados ao grupo C+, contudo não foi observada geração de 1O2. Os grupos MA, MA+PHTX, PHTX, TFD e MA+TFD demonstraram diferença estatística (p<0,05) quando comparados ao C+ em relação à diminuição de UFC/mL e da atividade metabólica. Entretanto, não foi observada diferença estatística em relação à diminuição de UFC/mL na análise entre os grupos PHTX e TFD, e, MA+PHTX e MA+TFD. A análise por MEV em ambas as faces da MA demonstrou alterações morfológicas relevantes nos grupos MA+PHTX e MA+TFD, contudo tal alteração não impossibilitou seu efeito antimicrobiano. Com isso, conclui-se que o tratamento isolado com a MA e com a solução de PHTALOX® foram eficazes contra biofilme de S. aureus e P. aeruginosa, e que a associação destes potencializou o efeito antimicrobiano desse tratamento. Contudo, as demais análises apontaram que a fotoatividade da PHTALOX® foi menor do que ftalocianinas encontradas na literatura.
dc.description.abstract2Due to the advance of bacterial resistance to conventional treatments, the search for alternative therapies, isolated or combined, such as the use of the amniotic membrane (AM), antimicrobial products and photodynamic therapy (PDT), has been increasing in order to achieve an effective microbial control and adequate. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the antimicrobial effect of AM alone and associated with PDT using the PHTALOX® solution (PHTX) as a photosensitizer (PS) against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms. Two independent experiments were carried out in triplicate of the experimental groups: Group C+, Group L, Group PHTX, Group PDT, Group AM, Group AM+L, Group AM+PHTX, Group AM+PDT. Biofilm assembly was performed by preparing inoculum of S. aureus and P. aeruginosa (108 cells/mL) and incubating for 48 hours at 37 ºC. To obtain AM, five human placentas were obtained from elective cesarean sections, after prior consent and all negative serological tests (5.200.827/CEP/2021). After processing and cryopreservation, the AM remained in contact with the biofilms for 24 hours at 37 ºC, in the groups that involved this treatment. The PS for the study was a commercial phthalocyanine (PHTALOX®) with an incubation time of 15 minutes at 37 ºC in the dark. In the groups where PDT was performed, the incubation time was followed by irradiation from a device with 24 LEDs, with light emission at 660 nm, power density of 30 mW.cm-2, energy density of 50 J.cm-2 and irradiation time of 28 minutes and 18 seconds. The results obtained were analyzed by counting CFU/mL, metabolic activity test by MTT, and statistical analysis, considering statistically significant p<0.05. The internalization of PS was verified by means of fluorescence, and the absorption spectrum, quantification of reactive oxygen species (ROS) and quantum yield of singlet oxygen (1O2) of the PHTALOX® solution were also performed. The verification of the integrity of the AM was verified after the treatments by scanning electron microscope (SEM). The PHTALOX® solution showed a maximum absorption peak at 228, 333 and 690 nm and low fluorescence concentrated superficially in bacterial cells. Regarding the generation of ROS, a statistical difference (p<0.05) was obtained in the PHTX and PDT groups when compared to the C+ group, however, 1O2 generation was not observed. The AM, AM+PHTX, PHTX, PDT and AM+PDT groups showed statistical difference (p<0.05) when compared to C+ in relation to the decrease in CFU/mL and metabolic activity. However, no statistical difference was observed in relation to the decrease in CFU/mL in the analysis between the PHTX and PDT, and AM+PHTX and AM+PDT groups. SEM analysis on both sides of the AM showed relevant morphological alterations in the AM+PHTX and AM+PDT groups, however such alteration did not preclude its antimicrobial effect. With this, it is concluded that the isolated treatment with AM and with the PHTALOX® solution were effective against biofilm of S. aureus and P. aeruginosa, and that their association potentiated the antimicrobial effect of this treatment. However, the other analyzes indicated that the photoactivity of PHTALOX® was lower than that of phthalocyanines found in the literature.
dc.description.physical88 f.
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.format.mimetypepdf
dc.identifier.affiliationUniversidade do Vale do Paraíba
dc.identifier.affiliationUniversidade do Vale do Paraíba
dc.identifier.affiliationUniversidade do Vale do Paraíba
dc.identifier.affiliationUniversidade Federal de São Paulo
dc.identifier.bibliographicCitation2SANTOS, Amanda Cerquearo Rodrigues dos. Efeito antimicrobiano da membrana amniótica isolada e associada à terapia fotodinâmica. São José dos Campos, SP, 2023. 87 f.; PDF Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2023.
dc.identifier.urihttps://repositorio.univap.br/handle/123456789/355
dc.language.isopt_BR
dc.publisher.countryBrasil
dc.publisher.initialsUnivap
dc.publisher.institutionUniversidade do Vale do Paraíba
dc.publisher.programMestrado em Engenharia Biomédica
dc.publisher.spatialSão José dos Campos
dc.subject.keywordFtalocianinas
dc.subject.keywordFotoquimioterapia
dc.subject.keywordMembrana Amniótica
dc.titleEfeito antimicrobiano da membrana amniótica isolada e associada à terapia fotodinâmica
dc.title.alternativeAntimicrobial effect of isolated amniotic membrane and associated with photodynamic therapy
dc.typeDissertação
dc.type.masterDegreeMestrado Acadêmico

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