Efeito da terapia fotodinâmica com curcumina em promastigotas e curcumina nanoencapsulada em amastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania major
| dc.contributor.advisor | Ferreira, Juliana | |
| dc.contributor.author | Marcolino, Luciana Maria Cortez | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Soares, Cristina Pacheco | |
| dc.contributor.referee | Sant'Anna, Luciana Barros | |
| dc.contributor.referee | Ribeiro, Martha Simões | |
| dc.contributor.referee | Tada, Dayane Batista | |
| dc.date.accessioned | 2025-01-06T12:50:48Z | |
| dc.date.available | 2025-01-06T12:50:48Z | |
| dc.date.issued | 2021-09-24 | |
| dc.description.abstract | A leishmaniose tegumentar é uma doença zoonótica, transmitida por fêmeas de flebotomíneos e causada por protozoários do gênero Leishmania. É considerada pela OMS um problema de saúde pública que nos últimos anos apresentou aumento significativo, tanto no número de casos quanto na distribuição geográfica. O tratamento convencional é tóxico e contraindicado para pacientes que apresentam algumas comorbidades e pode causar diversos efeitos colaterais graves. Tendo em vista uma alternativa de tratamento não agressivo vem se estudando a Terapia Fotodinâmica, que consiste em um tratamento não invasivo, não apresenta efeitos colaterais, de fácil acesso que utiliza substâncias de baixo custo, como a curcumina. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da curcumina livre em promastigotas e curcumina nanoencapsuladas em amastigotas de espécies de Leishmanias. Para isso os promastigotas foram incubados com curcumina livre divididos em grupo escuro e irradiado, além do grupo controle escuro e apenas irradiado. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste de exclusão com azul de tripan, a atividade mitocondrial por MTT, as alterações morfológicas por MEV. Para analisar o tipo de morte celular utulizou-se os marcadores Anexina V e iodeto de propídio e para avaliar o potencial de membrana mitocondrial o JC-1, para isso foram obtidas as imagens por microscopia confocal e a fluorescência emitida pelos marcadores foram quantificadas utilizando o software ImageJ. Para analisar a produção de espécies reativas de oxigênio utilizou-se o reagente H2DCF-DA e a fragmentação de DNA foi verificada pelo teste do cometa. Verificou-se a diminuição da viabilidade dos parasitas bem como alterações na atividade mitocondrial. A TFD provocou alterações no potencial de membrana mitocondrial das duas espécies, independentemente do tempo de análise (imediatamente ou 18 horas após tratamento). A produção de ERO foi concentraçãodependente e foi observada apenas nos grupos submetidos à TFD e a espécie L. braziliensis apresentou maior produção de ERO que L. major, no entanto L. braziliensis foi mais resistente que L. major quando analisada a viabilidade após TFD. Os danos no DNA também foram observados nas duas espécies, é sugestivo que a apoptose prevaleceu na espécie L. braziliensis. A morfologia das células foi afetada, principalmente na concentração mais elevada de curcumina, deixando as células arredondadas e flagelo encurtado. Os resultados apoiam o uso da curcumina como fotossensibilizador na TFD contra células de Leishmania. Foram testadas também nanopartículas de BSA associada a curcumina em amastigotas de L. braziliensis e L. major. Para isso macrófagos e macrófagos infectados com Leishmanias foram incubados com a curcumina encapsulada em BSA catiônica e aniônica. Foram realizados testes de viabilidade pelo método de exclusão com azul de tripan, onde foi verificado que apenas a concentração 0,7 µmol. L1 da BSA-Cur catiônica demonstrou redução na viabilidade das células e as concentrações de 0,1 e 0,08 µmol. L-1 da BSA-Cur aniônica reduziu a viabilidade das células, já a concentração de 0,7 µmol. L-1 foi citotóxica. A análise através da microscopia confocal foi realizada para verificar se as nanopartículas eram internalizadas pelos macrófagos e pode-se verificar que as nanopartículas catiônicas e aniônicas se encontravam dentro dos macrófagos e protozoários. Por fim foi realizado teste de viabilidade com os fibroblastos e verificou-se que as nanopartículas não afetaram a viabilidade dessa linhagem celular, no entanto a curcumina livre promoveu diminuição da viabilidade dos fibroblastos após tratamento. Os resultados obtidos foram satisfatórios, demonstrando a capacidade das nanopartículas reduzirem a viabilidade das células em menores concentrações do que a curcumina livre. | |
| dc.description.abstract2 | Tegumentary leishmaniasis is a zoonotic disease, transmitted by female sandflies and caused by protozoa of the genus Leishmania. It is considered by the WHO as a public health problem that in recent years has shown a significant increase, both in the number of cases and in geographic distribution. Conventional treatment is toxic and contraindicated for patients who have some comorbidities and can cause several serious side effects. In view of a non-aggressive treatment alternative, Photodynamic Therapy has been studied, which consists of a non-invasive treatment that does not have side effects and is easily accessible and uses low-cost substances such as curcumin. This study aimed to evaluate the effects of free curcumin in promastigotes and nanoencapsulated curcumin in amastigotes of Leishmania species. For this, the promastigotes were incubated with free curcumin, divided into a dark and irradiated group, in addition to a dark and only irradiated control group. Cell viability was evaluated by trypan blue exclusion test, mitochondrial activity by MTT, morphological changes by SEM. To analyze the type of cell death, the markers Annexin V and propidium iodide were used, and to assess the mitochondrial membrane potential of JC-1, images were obtained by confocal microscopy and the fluorescence emitted by the markers was quantified using the ImageJ software. To analyze the production of reactive oxygen species, the reagent H2DCF-DA was used and DNA fragmentation was verified by the comet test. There was a decrease in parasite viability as well as changes in mitochondrial activity. PDT caused alterations in the mitochondrial membrane potential of the two species, regardless of the time of analysis (immediately or 18 hours after treatment). The ROS production was concentration-dependent and was observed only in the groups submitted to PDT and the species L. braziliensis presented higher ROS production than L. major, however L. braziliensis was more resistant than L. major when analyzing the viability after TFD. DNA damage was also observed in both species, suggesting that apoptosis prevailed in L. braziliensis. Cell morphology was affected, mainly at the highest concentration of curcumin, leaving the cells rounded and flagellum shortened. The results support the use of curcumin as a photosensitizer in PDT against Leishmania cells. BSA nanoparticles associated with curcumin were also tested in amastigotes of L. braziliensis and L. major. For this, Leishmania-infected macrophages and macrophages were incubated with curcumin encapsulated in cationic and anionic BSA. Viability tests were performed by the trypan blue exclusion method, where it was verified that only the concentration 0.7 µmol. L-1 of cationic BSA-Cur demonstrated a reduction in cell viability at concentrations of 0.1 and 0.08 µmol. L-1 of the anionic BSA-Cur reduced cell viability, since the concentration of 0.7 µmol. L-1 was cytotoxic. The analysis through confocal microscopy was performed to verify if the nanoparticles were internalized by macrophages and it can be verified that the cationic and anionic nanoparticles were found inside the macrophages and protozoa. Finally, a viability test was performed with the fibroblasts and it was found that the nanoparticles did not affect the viability of this cell line, however free curcumin promoted a decrease in the viability of fibroblasts after treatment. The results obtained were satisfactory, demonstrating the ability of nanoparticles to reduce cell viability at lower concentrations than free curcumin. | |
| dc.description.physical | 107 f. | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | MARCOLINO, Luciana Maria Cortez. Efeito da terapia fotodinâmica com curcumina em promastigotas e curcumina nanoencapsulada em amastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania major. São José dos Campos, 2021. 107 f. Tese (Doutorado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2021. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/478 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | UNIVAP | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | doutorado em Engenharia Biomédica | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Fotoquimioterapia | |
| dc.subject.keyword | Nanopartículas | |
| dc.subject.keyword | Leishmania | |
| dc.title | Efeito da terapia fotodinâmica com curcumina em promastigotas e curcumina nanoencapsulada em amastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania major | |
| dc.title.alternative | Effect of photodynamic therapy with curcumin in promastigots and nanoencapsulated curcumin in amastigots of Leishmania braziliensis e Leishmania major | |
| dc.type | Tese |