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Ação da terapia fotodinâmica com curcumina na interação de macrófagos e amastigotas de L. braziliensis e L. major
(2021-09-21) Ferreira, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Silva, Newton Soares da; Ribeiro, Martha Simões; Lindoso, José Angelo Lauletta; Pereira, André Henrique Correia; São José dos Campos
A leishmaniose tegumentar (LT) é uma doença negligenciada que está entre as 10 doenças infecciosas mais importantes do mundo. O tratamento convencional é feito com antimoniais pentavalentes e anfotericina, medicamentos que apresentam diversos efeitos colaterais e contraindicações. A terapia fotodinâmica (TFD) com curcumina surge como alternativa no tratamento da LT, visto que se baseia em aplicação local, não invasiva e seletiva, enquanto utiliza um composto natural de baixo custo como fotossensibilizador. Esse trabalho teve por objetivo a avaliação, in vitro, da TFD aplicada sobre amastigotas de L. braziliensis e L. major em interação com macrófagos por meio de análise de viabilidade, morfologia, internalização do FS, atividade e potencial de membrana mitocondrial e recuperação de parasitos pósTFD. Foram utilizadas concentrações de curcumina em diluições seriadas, de 500 a 7,8 µg.mL-1, e irradiação com luz azul (450 nm), irradiância de 36 mW/cm² e fluência de 10 J/cm². Os resultados demonstram ampla inativação e baixa citotoxicidade da TFD com curcumina em macrófagos infectados e não infectados nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1. A internalização do FS demonstrou localização do composto em todo o citoplasma da célula, além de concentração no núcleo, e nos amastigotas intracelulares. A morfologia pós-tratamento se mostrou alterada, exibindo destruição celular nos grupos submetidos à TFD, enquanto os grupos não tratados permaneceram com a morfologia dos macrófagos preservada. Foi observada elevação do potencial de membrana mitocondrial e diminuição da atividade mitocondrial nos grupos que receberam a terapia. Além disso, a contagem de parasitos recuperados pós-TFD demonstrou que houve diminuição do número de parasitos viáveis, indicando que a terapia pôde inativar não só os macrófagos, mas também os amastigotas intracelulares para as duas espécies de Leishmania estudadas. Os testes realizados demonstraram potencial da TFD com curcumina nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1, promovendo a inativação de macrófagos infectados com Leishmania, bem como alterações celulares morfológicas e nopotencial de membrana e atividade mitocondrial.
Detector ionizográfico para diagnóstico de câncer de mama
(2021-09-03) Ramirez Ramos, Marco Antonio; Vieira, Lúcia; Mendes, Alessandro Corrêa; Bernal, Julian Andres Salamanca; Araújo, Harilton da Silva; Matos, Helton Gírio; São José dos Campos
A cada dia aumenta a quantidade de vítimas do câncer. Só no ano de 2020 acometeu 626.030 pessoas no Brasil, segundo estimativas do Instituto Nacional do Câncer (INCA). A única forma para a diminuição desses números é o diagnóstico precoce. No presente estudo é caracterizado um invento chamado Detector Ionizográfico, que realiza Tomografia por Emissão de Pósitrons (PET) produzindo informações metabólicas. Possibilita diagnóstico preciso do câncer de mama quanto a sua malignidade. Para comprovar sua efetividade, foi feita uma avaliação comparativa entre o Detector Ionizográfico e o Tomografia por Emissão de Pósitrons/Tomografia Computadorizada (PET/CT) para análise de dados metabólicos. A pesquisa foi realizada com 3 pacientes que apresentaram câncer de mama documentado por histopatológico. A partir dos resultados foi possível comprovar a eficiência do aparelho. Possibilitando assim, uma opção de diagnóstico de malignidade preciso e de baixo custo. Seguindo a tendência, o Detector Ionizográfico pode ser hibridizado com alguma tecnologia de imagens anatômicas, como o Ultrassom (US). Com isso é possível promover maior acesso a diagnósticos precisos, aumentando sensivelmente a possibilidade de diagnósticos precoces, viabilizando a cura ou melhor estadia do paciente.
Produção de filmes finos via ALD, PECVD e Sputtering visando aplicações biomédicas
(2021-08-30) Vieira, Lúcia; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Soares, Cristina Pacheco; Machado, João Paulo Barros; Contini, Rita de Cássia Mendonça Sales; Fukumasu, Newton Kiyoshi; Silva, Michely Glenda Pereira da; São José dos Campos
À medida que a Doença do Vírus Corona 2019 (COVID-19) se dissemina pelos pulmões, os pacientes evoluem para uma síndrome respiratória aguda grave (SRAG), com isso tornando se imprescindível a realização de uma intubação orotraqueal (IOT) associada a Ventilação Mecânica (VM). Para a utilização da VM é necessário um dispositivo introduzido no paciente para acoplar ao ventilador, podendo ser um tubo endotraqueal (artefatos de poli cloreto de vinila (PVC) ou poliuretano (PU)). Estes artefatos ao mesmo tempo que dão suporte a vida no processo de ventilação pulmonar, podem carregar microrganismos para os pulmões. Assim posto, objetivou-se neste trabalho de tese, produzir e analisar comparativamente três tipos de filmes finos objetivando produzir uma superfície mais propicia ao controle de microrganismos. Os substratos utilizados foram os tubos endotraqueais utilizados nos processos de intubação (PU e PVC) e os filmes estudados foram: filme de carbono tipo-diamante (Diamond-like carbon, DLC) com e sem prata (Ag) obtido Deposição Química na Fase Vapor Assistida por Plasma (PECVD); filmes finos de carbono micro cristalino (µC) com e sem Ag obtidos via Magnetron Sputtering e também filmes finos de dióxido de titânio (TiO2) na fase anatase obtidos via Deposição por Camada Atômica (ALD). Os resultados de espectroscopia Raman mostraram que foram obtidos os filmes de DLC sobre PVC com as bandas características em posições próximas ao valor teórico, sendo banda D 1346,3 e banda G 1516.7 cm-1. A análise derelevância estatística da ação bacteriana dos filmes de DLC sobre PVC com prata, apresentou uma discreta redução das Unidades Formadoras de colônias (UFC) para cepa de S. aureus, em relação ao controle e ao grupo PVC DLC. Os espectros FTIR-ATR mostraram a manutenção da estrutura química do substrato de PU e PVC com as ligações químicas características para este material. As análises de espectroscopia Raman, dos filmes de carbono produzidos indicam que os filmes de µC apresentam formação de um filme semelhante ao de a-C:H com anéis micro grafíticos e fases amorfas, indicados pela razão entre as áreas das bandas ID/IG. Já a açãobacteriana dos filmes de µC em PU com Ag apresentou uma redução das UFC em relação ao controle, e apresentou redução estatística significante com *p<0.0001 entre o grupo µC com e sem prata e o PU puro. Ao final foi possível concluir o êxito na produção de filmes de DLC; µC e TiO2, aderentes em PU e PVC pelas técnicas estudadas. As análises microbiológicas foram realizadas em função das UFC nos substratos com e sem filme e pode ser concluído que os filmes produzidos e os resultados estatísticos apresentados com *p<0.0001 podem ser utilizados como alternativas antifúngicas para aplicações biomédicas, assim como para o desenvolvimento de superfícies melhoradas de PU e PVC.
Efeitos de altas concentrações de cortisol em culturas em monocamada e 3D de linhagens HEp-2 e L929
(2021-07-02) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Rodrigues, Paulo Roberto Grangeiro; Nicolau, Renata Amadei; Fonseca, Marcelo de Oliveira; São José dos Campos
Ao longo do século XX, o câncer se tornou uma das doenças mais letais entre as enfrentadas pela humanidade, levando anualmente centenas de milhares de pessoas à morte, mesmo com a franca evolução dos tratamentos e dos métodos diagnósticos. Frente a esse panorama, cada vez mais estudos relacionam a doença à influência de fatores emocionais, seja em sua gênese ou em seu prognóstico. O cortisol é descrito como o principal hormônio do estresse no corpo humano. Os corticoides podem aumentar a proliferação celular e as espécies reativas de oxigênio que contribuem para o dano ao DNA, e a exposição prolongada ao estresse pode contribuir para que os tecidos se tornem insensíveis ao cortisol. Este estudo explora a influência do cortisol no desenvolvimento de células tumorais, particularmente em células humanas de carcinoma da laringe humana (HEp-2). Para tanto, as células HEp-2 foram expostas a concentrações crescentes de cortisol (hidrocortisona) por 24 ou 48 horas, e o ensaio de proliferação de citotoxicidade (ensaio de MTT) (ensaio de cristal violeta) e cultura 3D imunomarcada para fibronectina e FAK foram realizados. O grupo tratado com hidrocortisona apresentou aumento significativo da atividade mitocondrial, enquanto o grupo tratado para avaliação pelo cristal violeta apresentou comportamento semelhante ao grupo de controle. O presente estudo concluiu também que a administração de hidrocortisona em esferóides tumorais de linhagem HEp-2 afetou a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente, sendo esse seu principal achado. Os resultados apresentados demonstram a influência de corticoides em células tumorais. Concluiu-se que a administração de hidrocortisona em esferoides tumorais de linhagem HEp-2 afeta a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente. Embora alguns casos tenham favorecido o uso de corticosteroides em pacientes com câncer, uma análise mais detalhada é necessária antes de prescrevê-los.
Produção e caracterização de revestimentos à base de carbono em cerâmica e aço visando aplicações biomédicas
(2021-08-06) Vieira, Lúcia; Silva, Newton Soares da; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Radi, Polyana Alves; Martins, Gislene Valdete; Vieira, Angela Aparecida; São José dos Campos
A expectativa de vida vem aumentando ao longo dos anos devido ao avanço da medicina, assim o número de idosos vem crescendo, e consequentemente vem aumentando as preocupações com as doenças relacionadas com a idade, como osteoporose, artrose, bradicardia, problemas bucais e entre outros. Dessa forma, a procura por implantes ósseos e dentários vem aumentando bem como o desenvolvimento de novos materiais para serem usados como matéria prima para novos implantes tais como: cerâmica, metais e polímeros. Porém alguns desses materiais tem um custo elevado e outros podem causar problemas a longo prazo como por exemplo, a metalose. A metalose consiste em uma degradação do material quando exposto ao fluído corpóreo e é uma das causas responsáveis por quase todas as cirurgias de substituição de prótese. Esta degradação consiste no desprendimento de íons metálicos da prótese e no acúmulo desses íons sobre os tecidos moles do corpo, levando a uma necrose do tecido ou a um crescimento tumoral. Portanto, são apresentados neste trabalho algumas considerações importantes para obtenção e caracterização de filmes e revestimentos de alótropos de carbono. Estes materiais podem ser utilizados como filme ou revestimento para a proteção de materiais implantáveis, bem como para aumentar a vida útil dos implantes. Para este estudo foram produzidos e caracterizados alótropos de carbono na forma de filmes e revestimentos de carbono. Foram produzidos filmes de DLC depositados à plasma utilizando reator “Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition” (PECVD) e magnetron sputtering em cerâmica MgAl2O4. Foram depositados também, revestimentos de carbono contendo fases de grafite microcristalino via laser cladding em SS316L. Foram realizadas teste biológicos, caracterização mecânica e microestrutural dos filmes obtidos. Os resultados demonstraram a formação de filme de DLC via PECVD em cerâmica com e sem prata sendo melhor probabilidade estatística do filme de DLC+Ag para aplicação biomédica. No revestimento obtido por laser cladding em amostra SS316L foi observada a formação fases de grafite microcristalino e aumento da resistência mecânica do material com o revestimento e melhor probabilidade estatística de osseointegração com a incorporação de TiO2. Com as caracterizações e teste biológico foi possível selecionar o filme e revestimento com melhor probabilidade estatística para aplicação biomédica.
Terapia a laser de baixa intensidade e membrana amniótica humana aplicadas em modelo experimental de queimadura
(2021-06-09) Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Sant'Anna, Luciana Barros; Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; Gouveia, Márcia Teles de; Alves, Paulo Jorge Pereira; Amorim, Fernanda Cláudia Miranda; São José dos Campos
Lesões decorrentes de queimaduras demandam tratamentos complexos, exigem assistência especializada e são responsáveis por altas taxas de morbimortalidade, configurando-se como problema de saúde pública no Brasil e no mundo. As queimaduras de espessura parcial por agentes térmicos são as que ocorrem em maior frequência na população e seu tratamento acarreta custos elevados. Nesse sentido, terapias reconstrutivas, de fácil aplicabilidade, seguras e que considerem custo/efetividade têm sido testadas, tais como a Terapia a Laser de Baixa Intensidade (TBLI) e a aplicação de Membrana Amniótica Humana (MAh), que têm se destacado no contexto da medicina regenerativa. O estudo objetivou avaliar o processo de reparo tecidual em queimaduras experimentais de espessura parcial superficial após aplicação da TLBI e MAh, isoladamente e em associação. A amostra foi composta por quarenta e oito ratos machos Wistar submetidos à queimadura de espessura parcial superficial, randomizados em quatro grupos: Controle (C)- não recebeu tratamento; Membrana Amniótica Humana (MAh)- aplicação de fragmento de MAh; Laser de Baixa Intensidade (TLBI)- irradiados com TLBI; Laser de Baixa Intensidade + Membrana Amniótica Humana (TLBI+MAh) – associação das terapias. Foram avaliadas as características histológicas e morfométricas das amostras de pele aos 7º e 14º dias e os resultados foram analisados pelos testes Kolmogorov-Smirnov, Mann Whitney e Kruskal-Wallis test com pós de Dunn's Multiple Comparison Test (p<0,05). A análise histológica mostrou redução no processo inflamatório (p <0,0001) e aumento na proliferação de fibroblastos (p <0,0001), principalmente aos 7 dias, nos grupos que sofreram intervenção comparados ao grupo C. Aos 14 dias, no grupo TLBI+MAh foram observadas espessas e alinhadas fibras de colágeno, demonstrando aceleração do processo cicatricial (p<0,0001). A fotobiomodulação com TLBI agiu sinergicamente com a aplicação tópica da MAh constituindo o protocolo terapêutico mais eficaz para tratamento de queimaduras de espessura parcial superficial utilizado na presente pesquisa. A combinação entre as terapias potencializou os efeitos anti-inflamatórios e de estímulo à proliferação celular, acelerando o processo de reparo tecidual.
Desenvolvimento de biomaterial à base de Acmella Oleracea (L.) R. K. Jansen com atividades cicatrizante, antibacteriana e antitumoral
(2021-05-25) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Perazzo, Fabio Ferreira; Silva, Carlos Augusto Priante da; Menegon, Renato Farina; São José dos Campos
Acmella oleracea popularmente conhecida como jambu, é utilizada na medicina alternativa e culinária popular do Brasil e diversos outros países, tendo diversos metabólitos secundários associados à sua bioatividade, como compostos fenólicos e flavonoides. Estas atividades incluem sua capacidade anestésica, antibacteriana e cicatrizante. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver uma membrana de quitosana a base do extrato foliar de A. oleracea para aplicação médica em feridas superficiais, avaliando sua capacidade antibacteriana, cicatrizante e antitumoral, para indicação no tratamento de câncer epidermóide. O extrato metanolico utilizado foi obtido por maceração assistida por ultrassom e em seguida fracionado com os solventes Acetato de etila e Butanol. A atividade cicatrizante e tóxica das amostras (Extrato bruto, Fração Butanol e Fração Acetato de etila) assim como o biomaterial (Membrana de quitosana, Membrana de quitosana associada ao extrato bruto e Membrana de quitosana associada a fração butanol) foram avaliadas através da capacidade proliferativa em linhagem L929 (fibroblasto de camundongo) e HEp-2 (Carcinoma de laringe humana) por fechamento de ferida in vitro e ensaios de citotoxicidade (Cristal violeta e MTT), além de genotoxicidade por teste de micronúcleo. A ação antibacteriana dos extratos e membrana em cepas Staphylococos aureus e Escherichia coli, foi avaliada pela densidade celular e formação unidades formadoras de colônias a partir do contato com o biomaterial. Estes testes mostraram a capacidade do material de aumentar a proliferação celular e atividade mitocondrial e não levar à formação de micronúcleos em linhagem L929 pela fração butanol, não observado o mesmo na fração acetato de etila e extrato bruto, havendo queda da viabilidade neste último. A atividade antitumoral avaliada pelos mesmos testes em linhagem HEp-2 (Câncer de laringe humano) determinou a capacidade citotóxica da fração butanol ao reduzir a densidade celular e atividade mitocondrial, o que também foi observado na fração acetato de etila e extrato bruto principalmente na maior concentração testada de 1000 µg/mL, não havendo o fechamento da ferida in vitro. Teste de citotoxicidade com microrganismos determinaram a capacidade dos extratos e frações em evitar infecções oportunistas que forem infligidas por S. aureus, sendo todas as amostras eficientes em reduzir o número de bactérias. A fração butanol apresentou um maior rendimento, melhor atividade proliferativa e cicatrizante, não genotóxica e antibacteriana para a cepa S. aureus quando comparado ao extrato bruto e fração Acetato de etila. Ao avaliar a ação das membranas por citotoxicidade indireta observa-se o aumento da densidade celular em células L929 quando incubadas com a membrana associada ao extrato bruto em 48 h de incubação e ação citotóxica do biomaterial associado a fração butanol frente ao teste de cristal violeta, porém havendo aumento da atividade mitocondrial em todos os grupos. Em contrapartida há redução na densidade celular do biomaterial contendo extrato bruto em células HEp-2 e baixa da atividade mitocondrial para a célula em todos os grupos. Apenas a membrana com extrato bruto apresentou atividade antibacteriana com redução no número de células e sem nenhuma unidade de colônia formada. Sendo a única membrana também a permanecer liberando seus compostos após 48h de degradação enquanto outras degradaram em 24h, além de não apresentarem formação de poros visto por microscopia eletrônica de varredura. O biomaterial contendo o extrato bruto foi apontado como a mais viável a compor uma membrana que servirá como biomaterial liberador para atuar em casos de feridas cutâneas, induzindo a cicatrização, matando células tumorais testadas e evitando a infecção local.
Compósito de nanomateriais para enxerto ósseo
(2021-05-06) Raniero, Leandro José; Castilho, Maiara Lima; Vasconcellos, Luana Marotta Reis de; Liu, Andréa Santos; Santos, Andréa Fernanda Lopes dos; Oliveira, Ivone Regina de; São José dos Campos
Pesquisas tem sido desenvolvida na área de engenharia biomédica com objetivo de sintetizar um biomaterial satisfatório para favorecer o reparo ósseo. O cimento de aluminato de cálcio homogêneo (CACH) é um biomaterial extensamente utilizado devido as suas propriedades mecânicas, físicas e de biocompatibilidade devido às suas características particulares como composição semelhante ao corpo humano, alta biocompatibilidade além de promover osteointegração e osteocondução. Porém, a nanotecnologia aplicada em materiais pode promover avanços científicos, proporcionando aplicações associadas a benefícios que levem ao aumento da qualidade de vida, destacando-se o uso de nanopartículas devido a sua versatilidade na área biomédica. O objetivo desta tese foi produzir e caracterizar nanocompósitos à base de CACH associado a nanopartículas de ouro (CACH+AuNPs) e prata (CACH+AgNPs), visando a aplicação no reparo ósseo. As amostras dos nanocompósitos foram avaliadas quanto as suas propriedades mecânicas, determinando a densidade real, resistência à compressão uniaxial, a resistência mecânica à flexão, microdureza e a distribuição do tamanho de poros, como também morfologia e a bioatividade dos nanocompósitos. Os resultados apontaram um aumento da resistência mecânica à flexão para CACH+AuNPs quando comparado ao CACH, e ambos os nanocompósitos apresentaram bioatividade adequada. As citotoxicidade dos nanocompósitos em relação ao CACH também foram avaliadas, por meio das alterações das atividades mitocondrial testadas em cultura de células da linhagem MG-63. Os resultados promissores dos testes in vitro levou a aplicação in vivo, quando a neoformação óssea foi quantificada por meio de testes em 16 ratos Wistar, os defeitos localizados no fêmur dos animais foram preenchidos com CACH e os nanocompósitos, sendo a referência o defeito com coagulo. O estudo mostrou que não houve benefício na associação do CACH às AgNPs quando comparado ao CACH. Os resultados apontam que o nanocompósito CACH+AuNPs tem potencial de aplicação clínica, melhorando o desempenho do material e aumentando a biocompatibilidade, sendo promissor no tratamento visando o reparo ósseo.
Efeito da fotobiomodulação com laser de baixa intensidade na fadiga muscular de bíceps braquial: análise por termografia infravermelha e dinamometria
(2021-05-03) Lima, Mário Oliveira; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Mendes, Alessandro Corrêa; Marcos, Rodrigo Labat; Cogo, José Carlos; Stamborowski, Sadi Fernando; Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; São José dos Campos
A fadiga muscular(FM)é ocasionada por meio de alterações bioquímicas que modificam a mecânica da contração muscular, as quais resultam em alterações negativas na performance da contração. Diversos recursos são estudados com o intuito de atenuar este quadro, dentre eles pode-se citar a fotobiomodulação. Neste contexto, a termografia infravermelha é aplicada em esportes sob a justificativa de que as mudanças na temperatura da pele podem se correlacionar com processos inflamatórios ou com a FM.Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da fotobiomodulação na fadiga e na temperatura do músculo bíceps braquial.Para tal,foi realizado um estudo cruzado, na qual 14 voluntários do gênero masculino com idade entre 20 e 30 anos passaram pelos seguintes grupos: Controle, Placebo e Laser (PBMT). Para a indução da FMforam realizadas três Contrações Isométricas Voluntárias Máximas(CIVM) com duração de 50 segundos e intervalo de 50 segundos, utilizando um dinamômetro computadorizado. Durante a contração isométrica voluntária máxima foram avaliadosa força muscular e a temperatura por infravermelho aos 0, 5, 10 e 15 minutos após os testes. Foi possível observar, através de uma câmera termográfica as variações de temperaturas cutâneas, sendo queo grupo Laser apresentou queda menos acentuada da força muscular, evidenciando menor índice de fadiga muscular (p>0,05) em relação aos demais grupos. Na análise da temperatura o grupo Controle apresentou a maior média de temperatura, apresentando diferença significativa apenas para o Placebo. Os resultados sugerem que o grupo Controle apresentou o maior degaste físico, uma vez que houve uma elevação estatisticamente relevante em relação à temperatura basal. Já o grupo Laser apresentou efeito positivo na atenuação da FM e na termorregulação corporal, pois ocorreu um platô de valores térmicos nos períodos seguintes à FM.Salienta-se ainda que a variação de força nos instantes iniciais e finais, quando avaliados intergrupos, apresentaram resultados estatisticamente relevantes entre o grupo controle e laser.No presente estudo, podemos concluir o seguinte: A PBMT aplicada no músculo bíceps braquial de indivíduos hígidos, durante a realização de protocolos de fadiga, promoveu a atenuação da FM; A análise da força muscular demonstrou que os voluntários irradiados apesentaram menor variação durante os protocolos testados, sugerindo otimização do desempenho muscular; A PBMT contribuiu para a melhora da termorregulação corporal, avaliado pela termografia infravermelha, durante os protocolos de FM.
Avaliação de parâmetros fisiológicos em crianças com transtorno do espectro autista pré e após musicoterapia
(2021-04-09) Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Lima, Fernanda Pupio Silva; Sant'Anna, Luciana Barros; Gouveia, Márcia Teles de; Fernandes, Márcia Astrês; Magalhães, Juliana Macêdo; São José dos Campos
Transtorno do Espectro Autista(TEA)é uma alteração do desenvolvimento neurológico, caracterizado por dificuldades de comunicação, interação social e pela presença de comportamentos e/ou interesses repetitivos ou restritos. Dada a complexidade deste transtorno, foram desenvolvidas diversas abordagens, visando melhorar a vida das pessoas com TEA, incluindo intervenções de musicoterapia. A produção científica destaca a eficácia da musicoterapia em diferentes práticas clínicas, no entanto a análise dessa modalidade terapêutica é pouco explorada nessas crianças. Nesse sentido, o objetivo principal deste estudo foi avaliar a influência da musicoterapia improvisacional sobre os parâmetros fisiológicos de crianças diagnosticadas com Transtorno do Espectro Autista. Trata-se de estudo experimental clínico randomizado, desenvolvido no nordeste do Brasil. Foram incluídas no estudo crianças autistas que apresentavam escore 30-36 pontos da escala de avaliação do autismo infantil. A partir dos critérios de inclusão, as crianças foram alocadas em dois grupos por meio do programa Random Allocation Software, estando pré-determinado que os quatro primeiros nomes fictícios integrariam o grupo controle e os demais comporiam o grupo de musicoterapia. Sete crianças com transtorno do espectro autista foram avaliadas, distribuídas em três grupos com intervenção de musicoterapia e quatro no grupo controle. Os dados foram coletados nos meses de fevereiro a março de 2020 e analisados utilizando testes de Mann-Whitneye Wilcoxon. As crianças que participaram da musicoterapia apresentaram redução de 3,7% na saturação de O2. É comum a dificuldade de respirar profundamente em portadores de TEA. Além disso, crianças que realizaram musicoterapia apresentaram aumento médio de 5,0 bpm na frequência cardíaca comparado a ausência de variação nas crianças do grupo controle. Em geral, indivíduos com TEA possuem frequência cardíaca reduzida comparadas aos neurotípicos, possivelmente devido a um déficit no sistema límbico. Portanto, os resultados do presente estudo são importantes, considerando que os sinais vitais sofrem variação ao longo do dia e a musicoterapia pode ter influenciado esse índice pelo aspecto emocional. Em relação à pressão arterial, observou-se redução da sistólica e manutenção da diastólica no grupo musicoterapia, enquanto as crianças sem intervenção mantiveram a pressão sistólica e aumentaram a diastólica. Denota-se, aqui, o potencial que a musicoterapia improvisacional apresenta em influenciar e produzir alterações no corpo humano. Conclui-se que os efeitos da musicoterapia nos parâmetros fisiológicos foram indicativos de respostas satisfatórias para as crianças com TEA.
Tratamento de Câncer de Mama em Modelo Animal Via Terapia Fotodinâmica Associada a Nanossondas Bifuncionais
(2022-12-13) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Zezell, Denise Maria; Espírito Santo, Ana Maria do; Jesus, Viviane Paula dos Santos; Castilho, Maiara Lima; São José dos Campos
A superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) está presente em diferentes tipos de câncer, entre eles, bexiga, colo uterino, colorretal, gástrico, em especial, o câncer de mama triplo-negativo (TNBC). Desta forma, a superexpressão do EGFR está correlacionada com um mau prognóstico do paciente, pois está associada à ativação de genes de desenvolvimento, invasão e diferenciação tumoral. Nesse sentido, há a necessidade de novos tratamentos contra o câncer de mama. Visando um tratamento menos invasivo e de efeitos colaterais reduzidos, a presente tese propõe avaliar a ação antitumoral e toxicológica da terapia fotodinâmica (TFD) em associação às nanossondas bifuncionais (NB), em modelo animal. Estas avaliações objetivam responder questões vinculadas à produção de espécies reativas de oxigênio e ao tipo de morte celular. É importante ressaltar que a presença da proteína fator de crescimento epidérmico na NB pode oferecer afinidade tumoral, revelando um potencial mecanismo para acessar outros tipos de câncer. Dessa forma, a captação das NB pelas linhagens celulares utilizadas, MDA-MB-468 (TNBC - adenocarcinoma mamário humano) e MCF 10A (epitelial de mama) foi constante, entretanto, descontinuada nas células epiteliais de mama após 120 minutos de incubação, que tampouco revelaram citotoxicidade. As células de TNBC não mostram saturação no período estudado. A TFD revelou excelentes resultados para o tratamento, em que o aumento da concentração de NB influenciou o tipo de morte celular, sendo possível estabelecer uma correlação com a atividade mitocondrial. A análise histológica permitiu a comparação entre grupos para avaliar a resposta tecidual ao tratamento. Os resultados se complementam ao confirmar a eficiência das NB in vitro e in vivo. Outro resultado importante obtido pela técnica de citometria de fluxo foi aplicação da NB como nanomarcador de EGFR, permitindo diferenciar as linhagens celulares estudadas. Desta forma, a NB pode ser utilizada como marcador específico diagnóstico e como tratamento na TFD.
Protótipo de almofada para aferição da pressão e temperatura em áreas anatômicas de risco para desenvolvimento de lesão por pressão
(2022-06-07) Lima, Mário Oliveira; Madeira, Maria Zelia de Araujo; Martins, Patrícia Sardinha Leonardo Lopes; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Rocha, Francisca Cecília Viana; Mendes, Alessandro Corrêa; São José dos Campos
A lesão por pressão(LP) configura-se como resultado da pressão exercida pelo corpo sobre a superfície anatômica em que o indivíduo se encontra. Apesar das mais diversas estratégias para a sua prevenção, a incidência de lesão por pressão ainda é alta em todo o mundo. Por conseguinte, pesquisadores estão se voltando para uma nova tecnologia de mapeamento de pressão e temperatura para auxiliar as estratégias de prevenção das lesões por pressão. Portanto, o presente estudo tem como objetivo desenvolver e validar protótipo de almofada para aferição da pressão e da temperatura em áreas anatômicas de risco para desenvolvimento de lesão por pressão. Trata-se de um estudo experimental descritivo dividido em três etapas: desenvolvimento do software, criação do protótipo e validação do protótipo. A primeira e a segunda etapas foram desenvolvidas em laboratório, enquanto a terceira etapa foi realizada em um hospital público no Nordeste do Piauí. Etapa I: O software foi sintetizado em linhas de programação, utilizando a linguagem C para escrita do software. O hardware consiste no circuito eletrônico, descrito como uma placa com componentes eletrônicos. Foi desenvolvido um programa para controlar o passo-a-passo do hardware. Etapa II: O protótipo apresenta sensores de temperatura e pressão, microprocessador, driver; compressor de ar; bateria de 12V; e almofada inflável e impermeável. Etapa III: Participaram do estudo um adulto saudável, sem risco para o desenvolvimento de LP, sexo masculino, 33 anos de idade, 74 kg, 1,70 cm e 25,31 IMC. O segundo participante era um adulto com alto risco para o desenvolvimento de LP, 11 na escala de Braden, sexo masculino, 55 anos de idade, 75 kg, 1,74 cm e 25,31 IMC.O teste com o participante saudável revelou pressão de interface máxima, registrada na região occipital, porém, a média de pressão de interface foi maior na região sacral. No tocante a temperatura corporal a média, de maior valor foi identificada na região sacral (34,92ºC). Por sua vez, o teste com o paciente na UTI, a pressão de interface máxima, foi registrada na região do calcâneo esquerdo. A pressão de interface média, também foi encontrada na região sacral. A respeito da temperatura corporal média, o valor máximo, também, foi detectado na região sacral (35,31ºC). Ao comparar os dados de pressão e temperatura em todas as áreas anatômicas, observou-se que estão diretamente proporcionais nos dois participantes, quando uma aumenta, a outra também aumenta. Conclui-se que o protótipo da almofada com sensor para medir a pressão de interface e a temperatura em áreas anatômicas de risco para o desenvolvimento de lesão por pressão teve o potencial de fornecer medidas objetivas que podem atuar como substitutos para orientar as áreas onde a pressão e a temperatura estiverem alteradas para que sejam adotadas medidas de alívio em locais específicos e, assim, prevenir lesão por pressão de forma individualizada a cada paciente.
Efeito dos compostos organocalcogêneos disseleneto de difenila (PhSe) 2 e p-cloro disseleneto de difenila (pCl-PhSe) 2 sobre Candida albicans e Candida krusei : inibição da formação de biofilme, crescimento e adesão em células endocervicais humanas (HeLa)
(2022-04-05) Costa, Maricília Silva; Simioni, Andreza Ribeiro; Ferreira, Juliana; Masuda, Hana Paula; Silva, Bruna Graziele Marques da; Silva, Carlos Alberto; São José dos Campos
O gênero Candida é considerado um fungo oportunista por causar infecções em pacientes imunossuprimidos. Sendo capaz de causar infecções superficiais até invasivas, podendo ser fatais. Dentre as espécies do gênero Candida, Candida albicans possui maior prevalência dos casos de candidoses e Candida krusei tem destaque por ser intrinsecamente resistente aos fármacos de escolha para o tratamento de fungemias. O potencial de virulência e patogenicidade desses fungos podem estar associados à sua capacidade de produzir biofilmes em superfícies abióticas e bióticas. O estudo de novas terapias é necessário uma vez que os fármacos de escolha têm se tornado menos eficazes em tratamentos dessas fungemias e sua patogenicidade. Os dois compostos orgânicos sintéticos, compostos organocalcogêneos, disseleneto de difenila (PhSe)2 e pcloro disseleneto de difenila (pCl-PhSe)2, foram utilizados neste estudo para avaliar o comportamento nas condições de crescimento, cinética de crescimento, viabilidade de biofilmes e em adesão em células endocervicais humanas (HeLa) nas duas espécies de Candida, C. albicans e C. krusei. Os dois compostos inibiram o crescimento e a adesão em células HeLa de C. albicans e C. krusei, principalmente na maior concentração utilizada dos compostos (20 µmol. L-1) e esse efeito foi maior com o (PhSe)2. A diminuição da viabilidade de biofilmes em diferentes estágios e a sua formação ocorreu em ambas as Candidas e com os dois compostos de forma dose-dependente. Em todas as condições analisadas neste estudo o composto (PhSe)2 foi significativamente mais eficaz que o (pClPhSe)2 para inibir o desenvolvimento das duas espécies de Candida. Em suma os compostos (PhSe)2 e (pCl-PhSe)2, especialmente (PhSe)2, demonstraram ser potenciais drogas antifúngicas e eficazes contra C. albicans e C. krusei.
Estudo in vivo da reparação óssea guiada com membrana biológica de poliestireno, colágeno e norbixina fotobiomodulada com LED
(2022-02-16) Soares, Luís Eduardo Silva; Sant'Anna, Luciana Barros; Ferreira, Juliana; Coelho, Nayana Pinheiro Machado de Freitas; Maia Filho, Antonio Luiz Martins; Fortaleza, Lílian Melo de Miranda; São José dos Campos
Biomateriais de diversas composições associados ou não à fotobiomodulação vem sendo utilizados como recurso para favorecer e estimular o reparo ósseo. O objetivo do presente estudo foi analisar, in vivo, o processo de reparação óssea guiada pela membrana de poliestireno com colágeno e norbixina (MPSCN) e fotobiomodulada por diodo emissor de luz (LED). Para esta pesquisa, 40 ratos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: C= controle; M= membrana; LED= LED; MLED= LED + membrana e subdivididos em 2 subgrupos de eutanásia (15 e 30 dias). Um defeito ósseo foi criado na calvária de cada animal. Os grupos LED e MLED foram submetidos à fotobiomodulação com LED, imediatamente ao pós-operatório (? = 945 nm, P= 48 mW, área do feixe de 0.5 cm2 e t=150s), em dias alternados subsequentes ao pós-operatório até a eutanásia. A fluência de energia foi de 30 J/cm 2 . Os fragmentos de ossos foram analisados por microscopia óptica (análise histológica), espectroscopia Raman e Microscopia eletrônica de varredura (MEV). A análise estatística foi descritiva, inicialmente realizado o teste de normalidade Kolmogorov Smirnorv, e os dados paramétricos foram analisados pelo teste ANOVA para comparação entre grupos, seguido do teste de Tukey, com intervalo de confiança de 95% e nível de significância p< 0,05. O uso da MPSCN reduziu o processo inflamatório, serviu de arcabouço e favoreceu a neoformação óssea. Ao associá-la com o LED ocorreu remodelação óssea, porém, de maneira desorganizada e irregular. A fotobiomodulação com LED influenciou positivamente a formação óssea com aumento na deposição de hidroxiapatita, nos diferentes intervalos de tempo, sendo maior no final do experimento, resultando em osso mais compacto e linear. O uso simultâneo da MPSCN e fotobiomodulação não apresentou efetividade.
Comparação de abordagens terapêuticas para gerenciamento de rosácea: estudo clínico
(2023-12-13) Ferreira, Juliana; Simioni, Andreza Ribeiro; Canevari, Renata de Azevedo; Nicolau, Renata Amadei; Tada, Dayane Batista; Santos, Priscilla Fróes Sebbe; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; São José dos Campos
A rosácea é uma disfunção estética que apresenta um quadro inflamatório crônico que afeta predominantemente a face. A Terapia Fotodinâmica Tópica (TFD Tópica) combina uma fonte de luz, um fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular presente nos tecidos, gerando uma reação fotoquímica capaz de promover uma destruição tecidual e vascular, levando ao reparo tecidual, estruturando a barreira cutânea comprometida, diminuindo a vascularização excessiva. O procedimento inclui aplicação tópica cosmética de uma substância precursora do FS endógeno, o Ácido-5-aminolevulínico (ALA) e o Metilaminolevulinato (MAL), que são metabolizados no tecido em protoporfirina IX (PpIX). O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da TFD Tópica utilizando-se ALA e MAL a 2% em diferentes grupos associados ao LED âmbar e laser Infravermelho, simultaneamente, para o tratamento de rosácea subtipo I e II. Com aprovação do Parecer Consubstanciado do CEP nº4.539.318, vinte e quatro participantes foram submetidas a três sessões de tratamento, com intervalo de 15 dias entre elas, e avaliação final, 15 dias após a última aplicação. Os parâmetros usados na irradiação, nos grupos TFD Tópica e Fotobiomodulação foram: LED âmbar (590 nm ±10 nm) na fluência de 81 J/cm2 e laser Infravermelho (808 nm ±10 nm) na fluência de 2 J/cm2. No grupo controle foi utilizado cosmético Melan Clean® com aplicações diárias. Foram realizadas análises fotográficas, por fluorescência e termografia. Pode-se inferir que os tratamentos com a aplicação do Melan Clean®, Fotobiomodulação e TFD Tópica, apresentam benefícios no tratamento da rosácea, melhorando o quadro inflamatório e vascular da pele, sendo apresentados pelas análises termográficas e lâmpada de wood. A melhora clínica utilizando TFD Tópica com ALA 2% e MAL 2% associados ao LED âmbar e laser Infravermelho na rosácea é comprovada. Embora a Fotobiomodulação e o Melan Clean®, também tenham apresentado resultados no tratamento da rosácea, a TFD Tópica demonstrou ser uma alternativa melhor para rosácea, uma vez que é capaz de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio molecular gerando uma reação fotoquímica que leva a destruição tecidual, favorecendo a melhora da vascularização e gerenciamento da rosácea modulando o processo inflamatório.
Desenvolvimento e avaliação de uma estufa microbiológica para geração de conjuntos de dados utilizados em aprendizado de máquina
(2024-03-08) Ferreira , Juliana; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Raniero, Leandro José; Miñán, Alejandro Guillermo; Mendes, Alessandro Corrêa; Godoi, Bruno Henrique; Soares, Cristina Pacheco; São José dos Campos
A identificação microbiológica desempenha um papel fundamental em diversas áreas, desde a segurança alimentar até a pesquisa médica, entendendo a sua importância este estudo visa otimizar a identificação microbiológica, superando limitações dos métodos tradicionais que apresentam demoras e custos operacionais elevados. O trabalho propõe o desenvolvimento e avaliação de uma estufa microbiológica inteligente voltada para a geração de conjuntos de dados utilizados em aprendizado de máquina. A inovação central do projeto reside na integração de um sistema de câmeras avançadas dentro da estufa, capaz de capturar imagens de culturas microbiológicas. Estas imagens são processadas e analisadas por um modelo de Rede Neural Convolucional (CNN), projetado para classificar as imagens com precisão em diferentes intervalos de tempo. O objetivo principal é fornecer um dispositivo avançado, porém acessível, que facilite e aprimore os processos de identificação microbiológica. Resultados experimentais indicam precisão do modelo CNN na classificação de imagens de Staphylococcus aureus com até 80% de acerto no processo no período de 24 horas de cultivo, porém com menor eficácia para Escherichia coli, sugerindo a necessidade de aprimoramento contínuo do modelo. Este trabalho apresenta um método viável e pronto para ser utilizado para criação de bancos de dados aplicados a microbiologia, mesmo com as limitações apresentadas no trabalho, o equipamento foi validado e encontra-se operacional. A tecnologia desenvolvida possui margem para ajustes no modelo de aprendizado de máquina, contudo espera-se que o sistema proposto ofereça uma ferramenta para a identificação rápida e precisa de uma ampla gama de microrganismos, potencializando seu uso em diversas aplicações científicas e industriais.
Efeitos de um programa de reabilitação cardiorrespiratória associada a fotobiomodulação transcraniana em pessoas espásticas
(2024-02-23) Lima, Mário Oliveira; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Oliveira, Virgínia Klausner de; Martins, Alvaro Brandão Lopes Martins; Marcos, Rodrigo Labat; Pinto, Ana Paula; Lima, Fernanda Pupio Silva; São José dos Campos
A espasticidade é consequência de lesões do sistema nervoso central e afeta os sistemas muscular, cardiovascular e pulmonar, resultando em mobilidade reduzida, diminuição da aptidão cardiorrespiratória e dependência nas atividades de vida diária. O exercício aeróbico e a fotobiomodulação transcraniana (FBMt) são terapias conhecidas pela melhora da oxigenação cerebral e neuroplasticidade, auxiliando no aumento da aptidão cardiorrespiratória e funcionalidade. O objetivo deste estudo foi validar um protocolo de reabilitação cardiorrespiratória (RCR) em pessoas espásticas, avaliar os efeitos da RCR isolada e associada à FBMt na função pulmonar, força muscular respiratória, tolerância ao exercício (TE), variabilidade da frequência cardíaca (VFC), atividade elétrica do reto femoral bem como a qualidade de vida. A pesquisa contou com a colaboração de 15 participantes com espasticidade, distribuídos aleatoriamente em dois grupos: Grupo fotobiomodulação transcraniana (GFBMt): constituído de 8 voluntários nos quais foi aplicada a FBMt (modo on) seguida da RCR; Grupo controle (GC): composto por 7 voluntários em que foi simulada a aplicação da FBMt (modo off) seguida da RCR. O protocolo da RCR incluiu exercícios aeróbicos e respiratórios, fortalecimento de membros inferiores, alongamentos, 2 vezes por semana durante 12 semanas. A FBMt (cluster de 6 lasers, 3 lasers: ?= 660 nm, 3 lasers: ?= 808 nm, potrncia 100 mW/laser, 6 J/laser) foi aplicada no início de cada sessão de tratamento, transcutâneamente, perpendicular em 3 regiões frontoparietal. Foram avaliados os seguintes parâmetros antes e após 8 e 12 semanas da aplicação do protocolo de tratamento: espirometria, manovacuometria, TE, VFC, eletromiografia de superfície (EMG) do músculo reto femoral e qualidade de vida (questionário SF-36). Observou-se aumento no índice pico de fluxo expiratório em 12 semanas (p<0,05). O GFBMt apresentou aumento da força muscular respiratória em 20% (8 semanas) e 15% (12 semanas). Ambos os grupos apresentaram aumento da TE, de 40% e 30%, para o GC e GFBMt, respectivamente. O GFBMt demonstrou frequência cardíaca de recuperação e índices do sistema nervoso simpático e parassimpático mais próximos ao fisiológico. A EMG evidenciou que o GFBMt obteve aumento da atividade elétrica do reto femoral durante os agachamentos e redução da diferença entre membros. Os escores do SF-36 foram maiores em quatro domínios pós reabilitação para o GC e dois domínios no GFBMt. Concluiu-se que durante o protocolo não houve intercorrências e, portanto, foi seguro e é válido para os pacientes com doenças neurológicas; que a reabilitação cardiorrespiratória promoveu a melhora da qualidade de vida e tolerância ao exercício e a terapia adicional da fotobiomodulação transcraniana demonstrou induzir a modulação na função da mecânica respiratória, da VFC, atividade elétrica muscular e nos aspectos físicos e dor do SF-36.
Ação de nanopartículas de prata associada ao Imipenem aplicadas em cepas de Klebsiella pneumoniae com diferentes perfis de susceptibilidade
(2023-03-09) Castilho, Maiara Lima; Ferreira-Strixino, Juliana; Silva, Carlos Alberto; Santos, Tiago Gonçalves; Silva, Inglid Fontoura da; Raniero, Leandro José; São José dos Campos
Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae) é uma bactéria oportunista que têm chamado atenção devido à resistência aos antibióticos carbapenêmicos. O tratamento em pacientes com infecções graves tem sido desafiador e novas tecnologias vem sendo investigadas entre elas as nanopartículas de prata (AgNPs) por apresentarem efeitos antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo analisar a associação das AgNPs ao antibiótico carbapenêmico Imipenem (IMP) contra cepas de K. pneumoniae. As AgNPs foram sintetizadas pelo método bottom-up e recobertas com ácido-alfa lipóico. Testes de susceptibilidade antimicrobiana foram realizados em formas planctônicas utilizando quatro cepas de K. pneumoniae com diferentes perfis de susceptibilidade ao IMP. A associação foi testada em biofilme e os ensaios de cristal violeta e resazurina foram realizados para a classificação e análise da concentração inibitória mínima, respectivamente. A redução da concentração do IMP com a associação as nanopartículas (NPs) foi encontrada em todas as cepas estudadas na forma planctônica e o sinergismo entre as AgNPs e o IMP foi demonstrado por meio da análise da concentração inibitória fracionada. Em biofilmes reduções significativas foram observadas e a atividade metabólica foi reduzida em índices =80% caracterizando a concentração inibitória mínima do biofilme (MBIC). Assim, a MBIC para a cepa ATCC foi de 2 µg/mL e para as cepas clínicas com perfil sensível e resistente de 1 µg/mL e para o perfil intermediário 8 µg/mL. A associação proposta no estudo obteve efeito inibitório em diferentes perfis de K. pneumoniae, tanto em formas planctônicas quanto biofilme com um comportamento peculiar no perfil resistente ao IMP.
Caracterização do biofilme dupla-espécie de Candida Albicans/Candida Krusei: efeito do Voriconazol e da terapia fotodinâmica antimicrobiana
(2023-10-17) Costa, Maricília Silva; Simioni, Andreza Ribeiro; Canevari, Renata de Azevedo; Campos, Cláudia Barbosa Ladeira de; S. Junior, José A. da; Nicolau, Juliene Cristina Passos; Silva, Carlos Alberto; São José dos Campos
Infecções hospitalares por Candida spp. são frequentes e têm aumentado significativamente, apresentando altas taxas de mortalidade em pacientes imunossuprimidos. Candida albicans é a espécie mais isolada de infecções na corrente sanguínea, sendo considerada a principal do gênero relacionada às infecções. Candida krusei também tem tido notoriedade uma vez que é intrinsecamente resistente ao fluconazol, antifúngico de escolha para os tratamentos de candidemias. Um dos fatores de virulência de C. albicans e C. krusei, além do dimorfismo, é a capacidade de formar biofilmes. Biofilmes são estruturas complexas com células leveduriformes e filamentosas embebidas em uma matriz extracelular rica em polissacarídeos que dificultam a difusão e ação de drogas, e ação do sistema imunológico do seu hospedeiro. Esses biofilmes são difíceis de erradicar, principalmente quando são polimicrobianos. Os tratamentos com antifúngicos apresentam desafios, uma vez que as espécies fúngicas estão cada vez mais resistentes, devido ao seu uso indiscriminado ou profilático. Além disso, muitas vezes o antifúngico de principal escolha para os tratamentos não funciona para todos os microrganismos das coinfecções. Portanto, a compreensão do comportamento dos biofilmes e das interações entre espécies em biofilmes multiespécies é fundamental para o desenvolvimento de estratégias de prevenção e tratamento eficazes para as infecções por Candida spp. Neste trabalho foi caracterizado o biofilme dupla-espécie de Candida spp. visando compreender as interações entre espécies e a importância de aspectos essenciais para a manutenção do biofilme como: adesão, ordem de adição de espécies, meio de crescimento. Ademais, foi analisado se o meio de cultivo e as interações intra-gênero dos biofilmes mistos alterariam o resultado de uma terapia efetivamente comprovada como a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (TFA). Além disso, verificou-se o comportamento de ambas espécies de Candida, de maneira isolada e em co-culturas, mediante o uso de um antifúngico alternativo, o Voriconazol (VOR). Aspectos como crescimento, formação de biofilmes e biofilmes em diferentes estágios de maturação foram avaliados. A viabilidade das células planctônicas foi feita por meio da análise da absorbância e os biofilmes foram avaliados quanto a atividade metabólica (XTT), biomassa produzida (coloração com Safranina) e morfologia celular por microscopia óptica. Para identificação das espécies de Candida spp. nos biofilmes mistos, foi utilizado o meio de identificação CHROMágar Candida. VOR foi capaz de inibir significativamente o crescimento de Candida spp. e suas co-culturas de modo dose-dependente da concentração celular e do antifúngico, da mesma maneira que também inibiu a viabilidade dos respectivos biofilmes. A caracterização se mostrou de extrema importância, pois esclareceu que ordem de adição de Candida spp. à placa de poliestireno, a pré-adesão e o meio em que o biofilme foi formado (RPMI-1640 ou caldo Sabouraud-dextrose) são fatores relevantes a serem considerados no estudo de um biofilme dupla-espécie de C. albicans e C. krusei. Tais fatores podem interferir na composição final desse biofilme e, também, no resultado de um tratamento, como na TFA que inibiu cerca de 40% dos biofilmes maduros mistos formados em RPMI, mas não teve efeito nos biofilmes mistos formados em meio Sabouraud.
Síntese e Caracterização de Au@SPIONs Funcionalizadas com EGF para Diagnóstico do Câncer de Mama e Tratamento por Terapias Fotodinâmica e Fototérmica
(2023-03-06) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Oliveira, Ivone Regina de; Tada, Dayane Batista; Campos, Andrea Porto Carreiro; Cândido, Marcela Aparecida; São José dos Campos
O câncer de mama é caracterizado pela presença de neoplasias malignas, com alto grau de proliferação e, sendo a principal causa de morte em mulheres nos últimos anos. Os tratamentos disponíveis são geralmente agressivos e com baixa eficácia, dependendo do subtipo molecular. Sendo assim, se faz necessário desenvolver novos métodos de detecção, quando a nanotecnologia pode proporcionar diagnósticos precoces e tratamentos efetivos. As nanopartículas superparamagnéticas de óxido de ferro (Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles, SPIONs) podem ser revestidas com fina camada de ouro e funcionalizadas, o que potencializa sua aplicação biomédica para formação de um biossensor sensível, rápido e preciso como agentes de terapia do câncer. As terapias fotodinâmica (TFD) e fototérmica (TFT) têm sido utilizadas no tratamento do câncer, sendo o seu mecanismo de ação baseado na interação de moléculas fotossensíveis com radiação de comprimento de onda adequado, na presença de oxigênio molecular. No entanto, cada passo deve ser controlado com precisão para obter um tratamento eficiente. Nesse contexto, a presente tese propõe a síntese de SPIONs pelo método de coprecipitação, o revestimento com ouro para obter Au@SPIONs, a funcionalização com a proteína EGF e o fotossensibilizador Clorina e6 para produção de Nanossondas Teranósticas (NTs) e sua aplicação na TFD e TFT. As dimensões das nanoestruturas foram caracterizadas por tamanhos físico e hidrodinâmico, bem como a morfologia, estabilidade coloidal, estrutura cristalina, composição química e propriedades magnéticas. Posteriormente foram realizados estudos in vitro para avaliação da atividade antitumoral e toxicológica da TFT e TFD nas linhas celulares MCF 10A e MDA-MB-468. As NTs apresentaram internalização no citoplasma e no núcleo de algumas células da linhagem celular MDA-MB-468. Após os tratamentos com as NTs obteve-se percentuais significativos de apoptose na linhagem celular MDA-MB-468 e níveis crescentes de ERO?s após TFD. No estudo com a cultura 3D da linhagem celular MDA-MB-468, as NTs apresentaram resultados que corroboraram com o estudo inicial 2D, sendo observado a capacidade de penetração das NTs nos esferoides com a variação do tempo de incubação.

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