Efeitos dos métodos de preservação na morfologia das sub-regiões da membrana amniótica humana: estudo por imunohistoquímica
| dc.contributor.advisor | Sant'Anna, Luciana Barros | |
| dc.contributor.author | Costa, João Vitor Alcântara da | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Arisawa, Emília Angela Loschiavo | |
| dc.contributor.referee | Almeida, Janete Dias | |
| dc.date.accessioned | 2025-06-09T23:34:12Z | |
| dc.date.available | 2025-06-09T23:29:48Z | |
| dc.date.available | 2025-06-09T23:34:12Z | |
| dc.date.issued | 2025-02-26 | |
| dc.description.abstract | A membrana amniótica (MA) tem atraído atenção como biomaterial para a medicina regenerativa, devido às suas propriedades biológicas e mecânicas, que incluem ações anti-inflamatória, imunomoduladora, antifibrótica, epitelização, estabilidade, resistência e flexibilidade. Essas propriedades são atribuídas às suas características morfológicas e aos fatores bioativos solúveis e insolúveis produzidos por suas células e presentes no estroma da membrana. Recentemente, foram detectadas diferenças nas regiões anatômicas da MA, porém ainda não está estabelecido se essas regiões apresentam diferentes potenciais na regeneração tecidual, e os efeitos dos diferentes métodos de preservação sobre a integridade e morfologia das mesmas. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a integridade estrutural e química da MA nas suas diferentes regiões anatômicas, âmnio placentário (PA) e âmnio refletido (RA), após diferentes métodos de preservação, por meio da técnica de imuno-histoquímica (IHC). Para isto, quatro placentas humanas a termo foram obtidas no Hospital Santa Casa de São José dos Campos e transportadas ao laboratório, onde, em condições estéreis, as membranas amnióticas foram processadas e divididas em 4 regiões: central (R1), intermediária (R2), periférica (R3) e âmnio refletido (R4), de acordo com sua posição em relação ao cordão umbilical. Os fragmentos foram distribuídos em 3 grupos, conforme o método de preservação: Grupo Controle: os fragmentos foram apenas fixados em formol; Grupo Fresca: os fragmentos foram imersos em meio DMEM a temperatura ambiente (24 ºC) por 18h; Grupo Criopreservada: os fragmentos foram imersos em meio DMEM/glicerol (1:1) a -80 ºC por 30 dias. Após os períodos específicos de cada grupo, os fragmentos foram processados histologicamente e incluídos em parafina para obtenção de cortes histológicos, os quais foram submetidos à análise de imuno-histoquímica e quantitativa de imagem para avaliação das proteínas constitucionais da membrana, incluindo citoqueratinas, laminina e colágeno tipo I. A análise das colorações de Hematoxilina-eosina (HE) evidenciou, no Grupo Controle, a região PA (R1, R2 e R3) com epitélio colunar simples, com células justapostas sobre a lâmina basal e núcleos na porção apical das células, contrastando com os achados da região RA (R4), a qual evidenciou epitélio com células cuboidais baixas, com núcleos centralizados. Em todas as sub-regiões anatômicas analisadas, as MA dos grupos experientais GF e GCrio eram compostas por cinco camadas estruturais (epitélio, membrana basal e as camadas compacta, fibroblástica e esponjosa) com aspectos morfológicos similares aos encontrados nas membranas do GC. As glicosaminoglicanas avaliadas por Alcian Blue, bem como as fibras colágenas, laminina e citoqueratinas avaliadas por IHC, apresentaram-se preservadas e íntegras após os diferentes métodos de armazenamento, com maior similaridade entre os grupos controle e criopreservada. Portanto, a criopreservação foi considerada eficiente para preservar a integridade epitelial e mesenquimal, nas quatro sub-regiões da MA, fundamentando seu uso na medicina regenerativa. | |
| dc.description.abstract2 | The amniotic membrane (AM) has attracted attention as a biomaterial for regenerative medicine due to its biological and mechanical properties, which include anti-inflammatory, immunomodulatory, antifibrotic, epithelialization, stability, resistance and flexibility. These properties are attributed to their morphological characteristics and the soluble and insoluble bioactive factors produced by their cells and present in the membrane stroma. Recently, differences in the anatomical regions of the MA have been detected, but it has not yet been established whether these regions have different potential for tissue regeneration, and the effects of different preservation methods on their integrity and morphology. In this context, the aim of this study was to evaluate the structural and chemical integrity of the MA in its different anatomical regions, placental amnion (PA) and reflected amnion (RA), after different preservation methods, using immunohistochemistry (IHC). For this purpose, four full-term human placentas were obtained from the Santa Casa Hospital in São José dos Campos and transported to the laboratory, where, under sterile conditions, the amniotic membranes were processed and divided into 4 regions: central (R1), intermediate (R2), peripheral (R3) and reflected amnion (R4), according to their position in relation to the umbilical cord. The fragments were divided into 3 groups according to the preservation method: Control Group: the fragments were only fixed in formaldehyde; Fresh Group: the fragments were immersed in DMEM medium at room temperature (24ºC) for 18h; Cryopreserved Group: the fragments were immersed in DMEM/glycerol medium (1:1) at -80ºC for 30 days. After the specific periods for each group, the fragments were processed histologically and embedded in paraffin to obtain histological sections, which were submitted to immunohistochemical and quantitative image analysis to assess the membrane's constitutional proteins, including cytokeratins, laminin and type I collagen. Hematoxylin-eosin (HE) staining analysis showed that in the Control Group, the PA region (R1, R2 and R3) had a simple columnar epithelium, with cells juxtaposed on the basal lamina and nuclei in the apical portion of the cells, contrasting with the findings in the RA region (R4), which showed an epithelium with low cuboidal cells, with centralized nuclei. In all the anatomical sub-regions analyzed, the MAs of the GF and GCrio experimental groups were composed of five structural layers (epithelium, basal membrane and the compact, fibroblastic and spongy layers) with morphological aspects similar to those found in the GC membranes. The glycosaminoglycans assessed by Alcian Blue, as well as the collagen fibers, laminin and cytokeratins assessed by IHC, were preserved and intact after the different storage methods, with greater similarity between the control and cryopreserved groups. Therefore, cryopreservation was found to be efficient in preserving epithelial and mesenchymal integrity in the four subregions of the MA, supporting its use in regenerative medicine. | |
| dc.description.physical | 74 f. | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.affiliation | Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | COSTA, João Vitor Alcantara da. Efeitos dos métodos de preservação na morfologia das sub-regiões da membrana amniótica humana: estudo por imunohistoquímica. São José dos Campos, SP, 2025. 75 f.; 1 PDF. Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2025. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/984.2 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | Univap | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | Mestrado em Engenharia Biomédica | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Imunohistoquímica | |
| dc.subject.keyword | Membrana Amniótica | |
| dc.subject.keyword | Preservação de Tecido | |
| dc.title | Efeitos dos métodos de preservação na morfologia das sub-regiões da membrana amniótica humana: estudo por imunohistoquímica | |
| dc.title.alternative | Impact of preservation methods on structural integrity of human amniotic membrane subregions - histological and immunohistochemical studies | |
| dc.type | Dissertação | |
| dc.type.masterDegree | Mestrado Acadêmico |