Diferenciação bioquímica e colorimétrica entre as espécies Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides Lutzii
| dc.contributor.advisor | Raniero, Leandro José | |
| dc.contributor.author | Comparato Filho, Olavo de Osti | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Ramirez Ramos, Marco Antonio | |
| dc.contributor.referee | Krabbe, Angela Cristina | |
| dc.contributor.referee | Oliveira, Luciane Dias de | |
| dc.contributor.referee | Liu, Andréa Santos | |
| dc.date.accessioned | 2025-02-03T23:07:33Z | |
| dc.date.available | 2025-02-03T23:07:33Z | |
| dc.date.issued | 2020-11-23 | |
| dc.description.abstract | As espécies de fungos: Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) e Paracoccidioides lutzii (P. lutzii), são causadoras da paracoccidioidomicose (PCM), infecção com diferentes manifestações clínicas localizadas ou disseminadas, com possibilidade de evoluir para a letalidade. No diagnóstico da PCM, o principal antígeno é a glicoproteína exocelular de 43 KDa (Gp43), reagindo com 100% dos soros de pacientes inoculados P. brasiliensis. Entretanto o Gp43não pode ser utilizado como um marcador para o P. lutzii, pois este antígeno não é reconhecido em pacientes infectados por ele. Neste contexto, o nosso trabalho buscou identificar e registrar diferenças na composição bioquímica entre essas duas espécies (P. brasiliensis:Pb03, Pb18 e P. lutzii: Pb01) por espectroscopia no infravermelho, uma vez que manifestações clínicas e o tratamento dos infectados diferem baseados no agente causador, tornando importante a sua identificação correta. De forma complementar, foi possível identificar molecularmente o P. lutzii, por meio de testes colorimétricos utilizando a metodologia label-free, combinando uma solução coloidal de nanopartículas de ouro(AuNPs), genes específicos e amostras testes. Para esse estudo, AuNPs foram sintetizadas por redução do cloreto de ouro por citrato de sódio, obtendo-se uma solução com um máximo de absorção na banda de 523 nm, obtendo-se como resultado, partículas com formato esférico e diâmetro médio de 22 nm. A diferenciação bioquímica entre as espécies foi realizada por meio da Transformada de Fourier no Infravermelho (FT-IR), uma técnica de obtenção rápida de resultados e de menor tempo necessário de preparação das amostras. Foram produzidos, na média, trinta espectros de cada amostra das culturas dos fungos. Nos resultados desta análise apareceram diferenças nos modos vibracionais de proteínas nas bandas em 1032, 1150, 1204, 1234, 1256, 1310, 1450, 1536, 1628 e 1656 cm-1; de lipídios nas bandas em 1744, 2852, 2922, 2956 cm-1; de material nuclear nas bandas em 1076 e 1116 cm-1, de estiramentos OH nas bandas em 3290 e 3432 cm-1. Com intuito de confirmação dos resultados obtidos com o FT-IR, o estudo estatístico Principal Component Linear Discriminant Analysis (PC-LDA) também foi utilizado para as conclusões. Com relação aos testes colorimétricos, foram realizados 50 testes, em triplicatas. Os resultados, após 3 metodologias estatísticas aplicadas, mostraram mudança de coloração da solução coloidal de nanopartículas de ouro na presença de DNA do fungo, para os testes positivos em 98% dos casos, confirmando que os microrganismos foram identificados molecularmente de forma correta. | |
| dc.description.abstract2 | The fungal species Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) and Paracoccidioides lutzii (P. lutzii) cause paracoccidioidomycosis(PCM), a chronic granulomatous disease with a wide variety of localized or disseminated clinical manifestations that may progress to lethality. In the diagnosis of PCM, the main antigen is the 43 kDa exocellular glycoprotein (Gp43), reactingwith 100% of sera from patients inoculated with P. brasiliensis. However, Gp43 cannot be used as a marker for P. lutzii because this antigen is not recognized in patients infected with it. In this context, our work sought to identify biochemicaldifferencesbetween these two species (P. brasiliensis: Pb03, Pb18and P. lutzii: Pb01) by infrared spectroscopy. Clinical manifestations and the treatment of the infected ones differ based on the causative agent, making important their correct identification.In a complementaryway, we also sought to identify P. lutzii molecularly by means of colorimetric tests using the label-free methodology combining a colloidal solution of gold nanoparticles(AuNPs), specific genes and test samples.For this study, gold nanoparticles were synthesized by reduction of the gold chloride by sodium citrate, obtaining a solution with a maximum absorption in the 523 nmband, resulting in particles with spherical shape and average diameter of 22 nm.Biochemical differentiation between species was performed using a Fourier Transform in Infrared (FT-IR), a fast techniqueand short time needed to prepare the samples; thirty spectra of each sample of fungi cultures were produced. The results of this analysis showed differences in the vibrational modes of proteinsin the 1032, 1150, 1204, 1234, 1256, 1310, 1450, 1536, 1628 and 1656 cm-1bands; lipids in the 1744, 2853, 2922, 2956 cm-1bands; nuclear material in the 1076 and 1116 cm-1bands; of OH stretchesin the 3290 and 3432 cm-1bands. In order to confirm the results obtained with the FT-IR, the Principal Component Linear Discriminant Analysis (PC-LDA) statistical study was also used for the conclusions. Regarding colorimetric tests, 50 tests were performed, in triplicates. The results, after 3 applied statistical methodologies, showed a change in the color of the colloidal solution of gold nanoparticles in the presence of fungus DNA, for positive tests in 98% of the cases, confirming the correct molecular identification of the microorganisms. | |
| dc.description.physical | 137 f. | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | |
| dc.description.sponsorship | Financiadora de Estudos e Projetos (Finep) | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | COMPARATO FILHO, Olavo de Osti. Diferenciação bioquímica e colorimétrica entre as espécies Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides Lutzii. São José dos Campos, 2020. 137 f. Tese (Doutorado e Física e Astronomia) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São Jose dos Campos, 2020. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/541 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | UNIVAP | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | Doutorado em Física e Astronomia | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Espectroscopia de infravermelho | |
| dc.subject.keyword | Paracoccidioides brasiliensis | |
| dc.subject.keyword | Paracoccidioides brasiliensis | |
| dc.subject.keyword | Paracoccidioides brasiliensis | |
| dc.title | Diferenciação bioquímica e colorimétrica entre as espécies Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides Lutzii | |
| dc.title.alternative | Biochemical and colorimetric differentiation between species Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides Lutzii | |
| dc.type | Tese |