Navegando por Autor "Castilho, Maiara Lima"
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Item Ação da Terapia Fotodinâmica em linhagem celular de gliossarcoma 9L/lacZ utilizando baixas fluências e concentrações de Fotoenticine e Photodithazine(2022-03-22) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Tada, Dayane Batista; Vitório, Gabrielle dos Santos; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposO Gliossarcoma é um câncer agressivo, com alta propensão metastática. Atualmente seu tratamento consiste em ressecção cirúrgica seguida de radio-quimioterapia, oferecendo baixa expectativa e qualidade de vida. Como proposta alternativa, a Terapia Fotodinâmica (TFD) se apresenta como método seletivo de tratamento, combinando o uso de um fotossensibilizador (FS), oxigênio molecular e luz. Esses três elementos geram as espécies reativas de oxigênio, levando à morte celular. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação da TFD utilizando as clorinas Fotoenticine (FTC) e Photodithazine (PDZ) em baixas concentrações e fluências, verificando a diferença entre seus efeitos. Foram utilizadas células 9L/lacZ e concentrações de 1,55 µg.mL -12,50 µg.mL -1 e 50,00 µg.mL-1de ambas clorinas. As células foram irradiadas com um dispositivo a base de LED em 660 nm nas fluências de 1 J/cm², 5 J/cm² e 10 J/cm², em 25 mW/cm². Observou-se que ambas clorinas apresentam indícios da formação de fotoprodutos após irradiação e são internalizadas em toda extensão citoplasmática, com restrição ao núcleo. Os testes de citotoxicidade demonstraram redução >98% da viabilidade celular e queda na atividade mitocondrial >86% nas concentrações de 50,00 µg.mL-1 e 12,50 µg.mL-1 em todas as fluências de luz testadas, entretanto a concentração de 1,55 µg.mL-1não apresentou um resultado tão eficaz na fluência de 1 J/cm². Houve alteração na adesão celular após TFD conforme diminuição da concentração, no qual as células desprendidas se apresentavam mortas, indicando que o desprendimento celular corresponde à uma característica do processo de morte celular, assim como as alterações morfológicas apresentadas, como a perda da extensão citoplasmática, adquirindo formato arredondado. A imunodetecção de HSP70 diminuiu, enquanto a de HSP27 aumentou após TFD com o FTC. Com isso, conclui-se que ambos FS foram eficazes na TFD em células de gliossarcoma, com destaque para a concentração de 50,00 µg.mL-1 na fluência de 5 J/cm². Além disso, levando em consideração a elevada imunodetecção da HSP27 na TFD com o FTC, o PDZ se apresenta como um promissor FS para ser empregado na TFD com células 9L/lacZ, encorajando estudos in vivo.Item Ação de nanopartículas de prata associada ao Imipenem aplicadas em cepas de Klebsiella pneumoniae com diferentes perfis de susceptibilidade(2023-03-09) Castilho, Maiara Lima; Ferreira-Strixino, Juliana; Silva, Carlos Alberto; Santos, Tiago Gonçalves; Silva, Inglid Fontoura da; Raniero, Leandro José; São José dos CamposKlebsiella pneumoniae (K. pneumoniae) é uma bactéria oportunista que têm chamado atenção devido à resistência aos antibióticos carbapenêmicos. O tratamento em pacientes com infecções graves tem sido desafiador e novas tecnologias vem sendo investigadas entre elas as nanopartículas de prata (AgNPs) por apresentarem efeitos antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo analisar a associação das AgNPs ao antibiótico carbapenêmico Imipenem (IMP) contra cepas de K. pneumoniae. As AgNPs foram sintetizadas pelo método bottom-up e recobertas com ácido-alfa lipóico. Testes de susceptibilidade antimicrobiana foram realizados em formas planctônicas utilizando quatro cepas de K. pneumoniae com diferentes perfis de susceptibilidade ao IMP. A associação foi testada em biofilme e os ensaios de cristal violeta e resazurina foram realizados para a classificação e análise da concentração inibitória mínima, respectivamente. A redução da concentração do IMP com a associação as nanopartículas (NPs) foi encontrada em todas as cepas estudadas na forma planctônica e o sinergismo entre as AgNPs e o IMP foi demonstrado por meio da análise da concentração inibitória fracionada. Em biofilmes reduções significativas foram observadas e a atividade metabólica foi reduzida em índices =80% caracterizando a concentração inibitória mínima do biofilme (MBIC). Assim, a MBIC para a cepa ATCC foi de 2 µg/mL e para as cepas clínicas com perfil sensível e resistente de 1 µg/mL e para o perfil intermediário 8 µg/mL. A associação proposta no estudo obteve efeito inibitório em diferentes perfis de K. pneumoniae, tanto em formas planctônicas quanto biofilme com um comportamento peculiar no perfil resistente ao IMP.Item Antibacterial activity of silver nanoparticles functionalized with amikacin applied against multidrug-resistant acinetobacter baumannii(Elsevier) Camargo, Larissa de Oliveira; Fontoura, Inglid; Veriato, Thaís da Silva; Raniero, Leandro José; Castilho, Maiara LimaBackground: Multidrug-resistant bacteria are one of the world's biggest health problems; therefore, improving the spectrum of action of antibiotics could be necessary to reverse this situation. Amikacin and silver salts have well-known antimicrobial properties. However, both drugs lost their effectiveness against some bacteria, such as Acinetobacter baumannii. This work aims to develop a nanodrug from silver nanoparticles (AgNPs) functionalized with Amikacin against multidrug-resistant Acinetobacter baumannii. Methods: AgNPs were produced using the bottom-up methodology and functionalized with Amikacin modified by the carbodiimide-based chemistry, forming AgNPs@Amikacin. Susceptibility tests were performed using Amikacin-resistant Acinetobacter baumannii strains to assess the bacteriostatic and bactericidal potential of the developed nanodrug. The clinical strains were induced to form a biofilm, and biomass quantification and the metabolic activity were determined. Results: The AgNPs have a hydrodynamic diameter of the particles with a bimodal distribution, with a size of 37.84 nm. The FT-IR spectrum of AgNPs@Amikacin exhibits vibrational modes corresponding to Amikacin, confirming the conjugation to AgNPs. Susceptibility testing demonstrated a minimal inhibitory and bactericidal concentration of < 0.5 µg/mL. The AgNPs@Amikacin reduced the biofilm metabolic activity of Acinetobacter baumannii at rates ≥ 50%, characterized by the minimal biofilm inhibition concentrations. Conclusions: Results demonstrate a promising development of a new nanodrug with lower concentrations, less toxicity, and greater efficacy against multidrug-resistant Acinetobacter baumannii.Item Aplicação das técnicas de PCR, micronúcleo e espectroscopia FT-IR no diagnóstico do HPV na prevenção do câncer cervical(2020-02-28) Canevari, Renata de Azevedo; Soares, Luís Eduardo Silva; Castilho, Maiara Lima; Batista, Nelson Jorge Carvalho; Koga-ito, Cristiane Yumi; Viana, Magda Rogéria Pereira; Raniero, Leandro José; São José dos CamposO câncer de colo de útero é considerado o terceiro tumor mais frequente e a segunda causa de mortalidade de mulheres no Brasil, sendo considerado um problema de saúde pública. A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é um dos principais fatores de risco que contribui para o desenvolvimento desta neoplasia. O principal método para o diagnóstico é a análise citológica pelo exame de Papanicolaou, mas a alta taxa de casos falso-negativos inviabiliza uma avaliação adequada, sendo importante o uso de técnicas auxiliares de detecção do HPV e, consequentemente, no diagnóstico desta doença. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia, aplicabilidade, sensibilidade e especificidade dos métodos alternativos para a detecção do HPV na prevenção do câncer cervical. As técnicas MN e FT-IR são indiretas, mas podem fornecer resultados úteis na detecção do HPV em pacientes submetidas ao exame citopatológico. As amostras de fluido cervical foram obtidas de 50 pacientes com citológica normal, posteriormente analisada pela PCR, teste de MN e análise de FT-IR. A análise molecular consistiu de extração do DNA das amostras endocervicais pelo protocolo QIAamp® Virus Spin kit (Qiagen), seguida da realização da PCR do gene viral L1 utilizandose os iniciadores MY09 e MY11. As amostras foram divididas com base nos resultados da PCR em dois grupos, HPV positivo (sete amostras) e HPV negativo (43 amostras). As análises dos testes de MN das amostras ectocervicais foram realizadas pelas leituras das frequências absoluta (N) e relativa (%), obtidas as médias, desvios padrões e analisadas pelos testes Shapiro-Wilk, Mann-Whitney e Qui-quadrado (X2). As análises de FT-IR das amostras endocervicais foram realizadas no equipamento Spectrum 400. A partir da matriz de covariância foram obtidos os componentes principais (PCs), e por meio das análises discriminantes linear e quadrática, supervisionada pelos resultados da PCR (grupos HPVpositivo e HPV negativo), foram calculados os valores de sensibilidade e especificidade. Os resultados das análises de PCR das 50 amostras permitiram validar 43 exames citológicos, mas sete amostras de resultado citológico negativo estavam infectadas pelo HPV. Os testes de MN mostraram maiores frequências de MN em amostras com HPV positivo, fatores relacionados a idade, ao abortamento e o uso de bebidas alcoólicas. Os espectros de análise FT-IR mostraram variações nas bandas de DNA e proteínas em amostras com alta frequência de MN, provavelmente devido à presença de histonas nucleossômicas e DNA que formam o MN. A análise dos componentes principais dos espectros de FT-IR não foi capaz de separar eficientemente as amostras HPV positivas das HPV negativas, mostrando-se inespecífico para diagnosticar o vírus. Assim, com a realização do estudo observou-se que a técnica de PCR pode ser considerada padrão ouro para a detecção do HPV por sua alta sensibilidade, que o aumento da frequência de MN observado neste estudo em amostras infectadas pelo HPV, pode ser devido à instabilidade genômica, causada pela presença do vírus, e que, apesar da espectroscopia FT-IR apresentar grande potencial, por ser um teste de alta sensibilidade e especificidade no rastreamento do câncer cervical, neste estudo não demonstrou ser eficiente na discriminação de amostras infectadas pelo HPV. Dessa forma, enfatiza-se que, estudos adicionais devem ser conduzidos para a aplicação da espectroscopia FT-IR e o teste de MN no diagnóstico da infecção pelo HPV e consequente aplicação na prevenção de câncer cervical.Item Avaliação in vitro de nanopartículas de ouro em células de GBM irradiadas em aparelhos de tomografia e radioterapia(2020-07-23) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Liu, Andréa Santos; Gialluca, Vanessa Dias; Castilho, Maiara Lima; São José dos Camposs neoplasias malignas representam um grupo de mais de 100 doenças diferentes que apresentam como característica, a diferenciação genética do tecido de origem, levando ao crescimento desordenado de células, que invadem tecidos e órgãos normais. Embora tenham ocorrido avanços significativos dessas modalidades tradicionais terapêuticas, as neoplasias malignas representam ainda um grande desafio, considerando, especialmente os subtipos de maior agressividade e letalidade. Entre os tumores mais agressivos encontramos o Glioblastoma Multiforme, com mortalidade de cerca de 95% e sobrevida mediana de 15 meses. A Temozolomida é o quimioterápico até o momento testado e aprovado com melhor resposta neste subtipo tumoral. O objetivo desta dissertação foi avaliar a potencialização desta modalidade terapêutica associada as nanopartículas de ouro quando irradiadas com radioterapia e tomografia. Para tanto a Temozolomida foi caracterizada quimicamente, realizada a sintetização de nanopartículas de ouro e, posteriormente foi testada a citotoxidade isolada do quimioterápico e dos conjuntos da Temozolomida com as nanopartículas de ouro em diferentes concentrações e, por fim foi avaliado a potencialização dos efeitos citotóxicos em placas irradiadas em aparelho de tomografia e radioterapia. Os resultados demonstram que houve um efeito citotóxico quando as nanopartículas de ouro foram utilizadas isoladamente e em conjunto com a Temozolomida e irradiadas com aparelho de tomografia e as nanopartículas de ouro potencializaram significativamente o efeito citotóxico da radioterapia quando associado a Temozolomida. Conclui-se, portanto que as nanopartículas de ouro potencializam o efeito da Temozolomida no tratamento de células de GBM, tanto quando irradiado com tomografia, quanto com radioterapia, com grande potencial para uso terapêutico em associação com as terapias tradicionais.Item Compósito de nanomateriais para enxerto ósseo(2021-05-06) Raniero, Leandro José; Castilho, Maiara Lima; Vasconcellos, Luana Marotta Reis de; Liu, Andréa Santos; Santos, Andréa Fernanda Lopes dos; Oliveira, Ivone Regina de; São José dos CamposPesquisas tem sido desenvolvida na área de engenharia biomédica com objetivo de sintetizar um biomaterial satisfatório para favorecer o reparo ósseo. O cimento de aluminato de cálcio homogêneo (CACH) é um biomaterial extensamente utilizado devido as suas propriedades mecânicas, físicas e de biocompatibilidade devido às suas características particulares como composição semelhante ao corpo humano, alta biocompatibilidade além de promover osteointegração e osteocondução. Porém, a nanotecnologia aplicada em materiais pode promover avanços científicos, proporcionando aplicações associadas a benefícios que levem ao aumento da qualidade de vida, destacando-se o uso de nanopartículas devido a sua versatilidade na área biomédica. O objetivo desta tese foi produzir e caracterizar nanocompósitos à base de CACH associado a nanopartículas de ouro (CACH+AuNPs) e prata (CACH+AgNPs), visando a aplicação no reparo ósseo. As amostras dos nanocompósitos foram avaliadas quanto as suas propriedades mecânicas, determinando a densidade real, resistência à compressão uniaxial, a resistência mecânica à flexão, microdureza e a distribuição do tamanho de poros, como também morfologia e a bioatividade dos nanocompósitos. Os resultados apontaram um aumento da resistência mecânica à flexão para CACH+AuNPs quando comparado ao CACH, e ambos os nanocompósitos apresentaram bioatividade adequada. As citotoxicidade dos nanocompósitos em relação ao CACH também foram avaliadas, por meio das alterações das atividades mitocondrial testadas em cultura de células da linhagem MG-63. Os resultados promissores dos testes in vitro levou a aplicação in vivo, quando a neoformação óssea foi quantificada por meio de testes em 16 ratos Wistar, os defeitos localizados no fêmur dos animais foram preenchidos com CACH e os nanocompósitos, sendo a referência o defeito com coagulo. O estudo mostrou que não houve benefício na associação do CACH às AgNPs quando comparado ao CACH. Os resultados apontam que o nanocompósito CACH+AuNPs tem potencial de aplicação clínica, melhorando o desempenho do material e aumentando a biocompatibilidade, sendo promissor no tratamento visando o reparo ósseo.Item Desenvolvimento de biomaterial à base de Acmella Oleracea (L.) R. K. Jansen com atividades cicatrizante, antibacteriana e antitumoral(2021-05-25) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Perazzo, Fabio Ferreira; Silva, Carlos Augusto Priante da; Menegon, Renato Farina; São José dos CamposAcmella oleracea popularmente conhecida como jambu, é utilizada na medicina alternativa e culinária popular do Brasil e diversos outros países, tendo diversos metabólitos secundários associados à sua bioatividade, como compostos fenólicos e flavonoides. Estas atividades incluem sua capacidade anestésica, antibacteriana e cicatrizante. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver uma membrana de quitosana a base do extrato foliar de A. oleracea para aplicação médica em feridas superficiais, avaliando sua capacidade antibacteriana, cicatrizante e antitumoral, para indicação no tratamento de câncer epidermóide. O extrato metanolico utilizado foi obtido por maceração assistida por ultrassom e em seguida fracionado com os solventes Acetato de etila e Butanol. A atividade cicatrizante e tóxica das amostras (Extrato bruto, Fração Butanol e Fração Acetato de etila) assim como o biomaterial (Membrana de quitosana, Membrana de quitosana associada ao extrato bruto e Membrana de quitosana associada a fração butanol) foram avaliadas através da capacidade proliferativa em linhagem L929 (fibroblasto de camundongo) e HEp-2 (Carcinoma de laringe humana) por fechamento de ferida in vitro e ensaios de citotoxicidade (Cristal violeta e MTT), além de genotoxicidade por teste de micronúcleo. A ação antibacteriana dos extratos e membrana em cepas Staphylococos aureus e Escherichia coli, foi avaliada pela densidade celular e formação unidades formadoras de colônias a partir do contato com o biomaterial. Estes testes mostraram a capacidade do material de aumentar a proliferação celular e atividade mitocondrial e não levar à formação de micronúcleos em linhagem L929 pela fração butanol, não observado o mesmo na fração acetato de etila e extrato bruto, havendo queda da viabilidade neste último. A atividade antitumoral avaliada pelos mesmos testes em linhagem HEp-2 (Câncer de laringe humano) determinou a capacidade citotóxica da fração butanol ao reduzir a densidade celular e atividade mitocondrial, o que também foi observado na fração acetato de etila e extrato bruto principalmente na maior concentração testada de 1000 µg/mL, não havendo o fechamento da ferida in vitro. Teste de citotoxicidade com microrganismos determinaram a capacidade dos extratos e frações em evitar infecções oportunistas que forem infligidas por S. aureus, sendo todas as amostras eficientes em reduzir o número de bactérias. A fração butanol apresentou um maior rendimento, melhor atividade proliferativa e cicatrizante, não genotóxica e antibacteriana para a cepa S. aureus quando comparado ao extrato bruto e fração Acetato de etila. Ao avaliar a ação das membranas por citotoxicidade indireta observa-se o aumento da densidade celular em células L929 quando incubadas com a membrana associada ao extrato bruto em 48 h de incubação e ação citotóxica do biomaterial associado a fração butanol frente ao teste de cristal violeta, porém havendo aumento da atividade mitocondrial em todos os grupos. Em contrapartida há redução na densidade celular do biomaterial contendo extrato bruto em células HEp-2 e baixa da atividade mitocondrial para a célula em todos os grupos. Apenas a membrana com extrato bruto apresentou atividade antibacteriana com redução no número de células e sem nenhuma unidade de colônia formada. Sendo a única membrana também a permanecer liberando seus compostos após 48h de degradação enquanto outras degradaram em 24h, além de não apresentarem formação de poros visto por microscopia eletrônica de varredura. O biomaterial contendo o extrato bruto foi apontado como a mais viável a compor uma membrana que servirá como biomaterial liberador para atuar em casos de feridas cutâneas, induzindo a cicatrização, matando células tumorais testadas e evitando a infecção local.Item Efeitos de altas concentrações de cortisol em culturas em monocamada e 3D de linhagens HEp-2 e L929(2021-07-02) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Rodrigues, Paulo Roberto Grangeiro; Nicolau, Renata Amadei; Fonseca, Marcelo de Oliveira; São José dos CamposAo longo do século XX, o câncer se tornou uma das doenças mais letais entre as enfrentadas pela humanidade, levando anualmente centenas de milhares de pessoas à morte, mesmo com a franca evolução dos tratamentos e dos métodos diagnósticos. Frente a esse panorama, cada vez mais estudos relacionam a doença à influência de fatores emocionais, seja em sua gênese ou em seu prognóstico. O cortisol é descrito como o principal hormônio do estresse no corpo humano. Os corticoides podem aumentar a proliferação celular e as espécies reativas de oxigênio que contribuem para o dano ao DNA, e a exposição prolongada ao estresse pode contribuir para que os tecidos se tornem insensíveis ao cortisol. Este estudo explora a influência do cortisol no desenvolvimento de células tumorais, particularmente em células humanas de carcinoma da laringe humana (HEp-2). Para tanto, as células HEp-2 foram expostas a concentrações crescentes de cortisol (hidrocortisona) por 24 ou 48 horas, e o ensaio de proliferação de citotoxicidade (ensaio de MTT) (ensaio de cristal violeta) e cultura 3D imunomarcada para fibronectina e FAK foram realizados. O grupo tratado com hidrocortisona apresentou aumento significativo da atividade mitocondrial, enquanto o grupo tratado para avaliação pelo cristal violeta apresentou comportamento semelhante ao grupo de controle. O presente estudo concluiu também que a administração de hidrocortisona em esferóides tumorais de linhagem HEp-2 afetou a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente, sendo esse seu principal achado. Os resultados apresentados demonstram a influência de corticoides em células tumorais. Concluiu-se que a administração de hidrocortisona em esferoides tumorais de linhagem HEp-2 afeta a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente. Embora alguns casos tenham favorecido o uso de corticosteroides em pacientes com câncer, uma análise mais detalhada é necessária antes de prescrevê-los.Item Estudo da terapia fotodinâmica utilizando alumínio ftalocianina tetrasulfonada: uma análise química, física e biológica dos componentes terapêuticos(2020-02-05) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Vasconcellos, Luana Marotta Reis de; Godoi, Bruno Henrique; Ferreira-Strixino, Juliana; São José dos CamposA terapia fotodinâmica (TFD) é uma técnica descoberta no início do século XX, que utiliza a luz como catalisador de uma reação de oxidação no órgão, tecido ou célula alvo. Para que ocorra a reação fotodinâmica é necessário oxigênio ao nível molecular, fotossensibilizante e uma fonte de luz. A técnica é utilizada em inúmeros tratamentos estéticos e dermatológicos sendo atualmente empregue como tratamento antimicrobiano e antifúngico, em infecções virais causadas pelos vírus Herpes e Papilloma, além de patologias como periodontite, tratamento de leishmaniose cutânea e alguns casos de câncer. Contudo, um dos obstáculos no emprego da técnica como tratamento contínuo ou de longa duração para doenças de alta complexidade, é o possível mecanismo de resistência às drogas, que as células podem apresentar quando são expostas ao fármaco fotossensibilizante por sucessivas vezes ou longos períodos, há ainda a divergência dos métodos aplicados em estudos e procedimentos clínicos, resultando assim em respostas variadas e fragilidade nos resultados divulgados, acarretando inúmeros questionamentos sobre a sua aplicabilidade nos procedimentos clínicos. O presente estudo tem por finalidade avaliar a capacidade de sobrevivência de células da linhagem HEp-2 após a TFD e evidenciar critérios para elaboração de um guia de boas práticas para aplicação da TFD utilizando o fotossensibilizante de segunda geração AlPcS4. Assim utilizando análises espectroscópicas e testes colorimétricos foi possível delinear a concentração de trabalho do fotossensibilizante de 5 µM em conjunto da densidade mínima de energia necessária para ativa-lo de 5 J/cm². Após determinar os parâmetros para os testes, utilizou-se os ensaios colorimétricos e imunológicos em conjunto com a quantificação gênica das HSP’s e da enzima SOD2, e para avaliara a resposta biológica pós a TFD. Os resultados dos ensaios colorimétrico, coloração de cristal violeta, coloração de vermelho neutro e conversão do sal de MTT, demonstram uma redução na viabilidade celular após a TFD consolidando a escolha dos parâmetros de concentração do fotossensibilizante e dose de energia. Já a avaliação imunológica das citocinas IL-6 e TNF – a não permitiu uma conclusão clara sobre o ambiente tumoral pós a TFD devido ao baixo poder de correlação entre os resultados obtidos. Por fim a expressão genica demonstrou redução significativa dos genes das HSP’s, glicoproteínas e enzima SOD2, evidenciando um potencial destrutivo da TFD, sugerindo que o tratamento uma vez padronizado não pode gerar clones resistentes a terapia, assegurando assim sua eficácia utilizando a linhagem celular HEp-2 como objeto de estudo. Acredita-se que este estudo fornece critérios para implantação de práticas mais eficientes utilizando a terapia fotodinâmica.Item GMEH - Software de Gerenciamento de Manutenção de Equipamentos Hospitalares(2021-12-17) Ferraz, William de Carvalho; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro José; Ferreira, Hélio Lourenço EsperidiãoItem Gold nanoparticles associated with temozolomide for glioblastoma Multiforme Treatment(CDRR Editors) Gialluca, Vanessa Dias; Lima, Vitor Gabriel Poli de; Caixeta, Aloísio; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro JoséMalignant neoplasms represents a group of diseases that features, as a characteristic, the genetic differentiation of the original tissue, leading to the disordered growth of cells, invading normal tissues and organs. Among the most aggressive tumors, Glioblastoma Multiforme has a mortality rate around 95% and survival’s average of 15 months, even though all treatment available. Temozolomide (TMZ) is the chemotherapeutic drug so far tested and approved with the highest response in this tumor sub-type and must be associated to other treatments to achieve better results. Thus, the purpose of this work was to evaluate the performance of this therapeutic modality with gold nanoparticles (AuNPs) and also combined with radiotherapy. TMZ hydrolysis was characterized at different pH and the chemical changes on molecular structure was determined via Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). The treatment performance was verified in vitro test using TMZ, TMZ plus AuNPs and associated with radiotherapy. The TMZ concentrations were varied from 0 (control group) to 1000µM, combined with AuNPs from 0 (control group) to10¹⁰ nanoparticles per well. The results showed the drug is stable at pH values between 2 to 4, but for pH values close to the physiological or basic medium, degradation is accentuated reaching a rate of 16 %/hour. The changes on molecular structure of TMZ can be observed through the FT-IR spectra, where the release of oxygen in the structure has influence on C=O group. The results of in vitro experiments showed that the highest poor results in the absence of ionizing irradiation. However, for experiments with TMZ and nanoparticles associated to radiotherapy, the performance of the treatment increased. In summary, the AuNPs showed important results under irradiation, revealing the same level of cytotoxicity for the highest TMZ concentration without irradiation. Also, the synergic effect between AuNPs and TMZ was observed under irradiation condition.Item Gold nanoparticles conjugated with epidermal growth factor and gadolinium for precision delivery of contrast agents in magnetic resonance imaging(Springer-Verlag London Ltd.) Queiroz, Marinho de; Veriato, Thaís da Silva; Raniero, Leandro José; Castilho, Maiara LimaThe utilization of contrast agents in magnetic resonance imaging (MRI) has become increasingly important in clinical diagnosis. However, the low diagnostic specificity of this technique is a limiting factor for the early detection of tumors. To develop a new contrast agent with a specific target for early stage tumors, we present the synthesis and characterization of a nanocontrast composed of gold nanoparticles (AuNPs), gadopentetic acid (Gd-DTPA), and epidermal growth factor (EGF). Carbodiimide-based chemistry was utilized to modify Gd-DTPA for functionalization with AuNPs. This resulted in the formation of the Au@Gd-EGF nanocontrast. The relaxation rate (1/T1) of the nanocontrast was analyzed using MRI, and cytotoxicity was determined based on cell viability and mitochondrial activity in a human breast adenocarcinoma cell line. Fourier-transform infrared spectroscopy analysis confirmed the effectiveness of carbodiimide in the formation of the Gd-DTPA-cysteamine complex in the presence of bands at 930, 1042, 1232, 1588, and 1716 cm-1. The complexes exhibited good interactions with the AuNPs. However, the signal intensity of the Au@Gd-EGF nanocontrast was lower than that of the commercial contrast agent because the r1/r2 relaxivities of the Gd-DTPA-based contrast agents were lower than those of the gadoversetamide-based molecules. The Au@Gd-EGF nanocontrast agent exhibited good biocompatibility, low cytotoxicity, and high signal intensity in MRI with active targeted delivery, suggesting significant potential for future applications in the early diagnosis of tumors.Item Nanopartículas de ouro funcionalizadas aos complexos de Gadolínio e EGF para detecção precoce do câncer de mama(2021-04-09) Castilho, Maiara Lima; Ferreira-Strixino, Juliana; Liu, Andréa Santos; Queiroz, Suélio Marinho de; Raniero, Leandro José; São José dos CamposO câncer pode ser definido como doença heterogênea vinculada a fatores ambientais, estilo de vida e mutações, representando a segunda causa de morte no Brasil e no Mundo. Dentre os diferentes tipos, destaca-se o câncer de mama, visto ser a maior causa de morte que acometem mulheres, sendo considerado um problema de saúde pública. O carcinoma mamário exibe diferentes vias de sinalização para a sobrevivência, crescimento e tratamento. O subtipo basalóide representa aproximadamente 20% dos casos de carcinoma mamário, sendo conhecido como triplo negativo por apresentar a ausência da expressão de receptores de estrogênio, progesterona e do fator de crescimento epidérmico 2, e superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico. Essas características podem ser associadas ao difícil diagnóstico e pior prognóstico. Neste contexto, o diagnóstico precoce destes tipos de câncer oferece uma possível solução para essa problemática. Assim, a ressonância magnética (RM) associada ao uso de substâncias paramagnéticas, conhecidas como os agentes de contraste, entre eles o Gadolínio (Gd) podem ser utilizados como um método alternativo para o diagnóstico precoce. Embora a RM possua uma alta sensibilidade, esta técnica apresenta baixa especificidade que podem ser superadas com o uso das nanopartículas de ouro, que se destacam como uma opção promissora para diagnóstico direcionado, visto permitir funcionalização de moléculas biológicas como a proteínas, peptídeos entre outros. Assim, o objetivo desta dissertação é desenvolver nanopartículas de ouro transportadoras do agente de contraste à base de Gd com o direcionamento ativo, por meio da proteína do fator de crescimento epidérmico. Este nanocontraste foi sintetizado utilizando a química via carbodiimida para diagnóstico precoce câncer de mama, sendo caracterizado pelas análises de Espectroscopia no Infravermelho por Transformada de Fourier, Espectroscopia no UV-visível e Espalhamento Dinâmico de Luz. Os resultados indicaram que o nanocontraste apresentou um diâmetro médio de 43 nm com boa estabilidade coloidal, a eficiência do nanocontraste para diagnóstico do câncer de mama foi determinado pela intensidade relativa de sinal produzida em uma região de interesse em comparação ao contraste comercial. Embora, o nanocontraste tenha mostrado uma intensidade de sinal inferior ao comercial, é importante ressaltar que o mesmo possui uma molécula alvo para o direcionamento o que permitirá uma maior sensibilidade e especificidade para diagnóstico precoce do câncer. A viabilidade celular e atividade mitocondrial em linhagem celular MDA-MB-468, exibiu excelente biocompatibilidade e seletividade do nanocontraste, bem como baixa citotoxicidade, o que evidência grande potencial para aplicações em diagnóstico.Item Nanopartículas de prata funcionalizadas ao complexo vancomicina-cisteamina para tratamento de Staphylococcus Aureus e Enterococcus Faecalis(2022-03-08) Veriato, Thaís da Silva; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro José; Tada, Dayane Batista; Ferreira-Strixino, Juliana; São José dos CamposAtualmente, a resistência bacteriana é um dos maiores desafios de saúde pública do século XXI. As bactérias como Staphylococcus aureus (S. aureus) e Enterococcus faecalis (E. faecalis) destacam-se a nível internacional quanto aos isolados, sendo que cerca de 30% são de S. aureus e 19,5% de E. faecalis comumente relacionadas às infecções nosocomiais. Esses microrganismos apresentam outro aspecto em comum, a resistência à vancomicina, um antimicrobiano inibidor da produção de peptidoglicano da parede celular. Nos últimos anos, em virtude desta resistência houve um aumento na demanda de novos fármacos para cessar este problema. Neste âmbito, as nanopartículas de prata (AgNPs) destacam-se pela ação antibacteriana, baixa toxicidade em sistemas biológicos e a possibilidade de associação com antibióticos a fim de aumentar o efeito no combate destes microrganismos. Neste contexto, o presente projeto teve como objetivo a funcionalização da vancomicina na superfície das AgNPs com intuito de aumentar o efeito antibacteriano no tratamento da cepas planctônicas de S. aureus e E. faecalis. Neste estudo foi possível a modificação química da vancomicina por meio da química carbodiimida. As AgNPs sintetizadas apresentaram um diâmetro hidrodinâmico de 43,82 nm e uma banda de ressonância plasmônica centrada em 392 nm, enquanto o nanofármaco Ag@vancomicina demonstrou um diâmetro de 47,28 nm e uma banda centrada em 391 nm. Nos ensaios microbiológicos de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) com a Ag@vancomicina foi possível obter uma CIM de 0,25 µg/mL para S. aureus ATCC (29213), o que representou uma redução 8 vezes da concentração. Entretanto, para as clínicas SA-1 e SA-2, a CIM manteve-se a mesma do fármaco sozinho. Porém, a SA-3 a CIM foi reduzida em 2 vezes quando comparada ao antibiótico. A cepa de E. faecalis ATCC (29212) determinou a CIM em 0,12 µg/mL, correspondendo aproximadamente uma redução de 16 vezes da CIM do fármaco. Enquanto, para as cepas clínicas EF-1, EF-2 e EF-3 a redução observada da CIM correspondeu a 4, 2 e 2 vezes, respectivamente. A CBM foi de 1 µg/mL de Ag@vancomicina para ambas as espécies ATCC. Entretanto nas clínicas o efeito bactericida em concentrações baixas só foi observado para SA-1 e SA-2, para as demais CBM é maior que 4 µg/mL. Os resultados destes ensaios exibiram um excelente desempenho do nanofármaco sintetizado, o que indica que a funcionalização potencializa a ação bacteriostática tanto das AgNPs quanto da vancomicina. Porém, para exercer a ação bactericida a concentração deve ser aumentada para determinadas cepas clínicas. Portanto, sugere-se que a Ag@vancomicina tem grande potencial para as aplicações em cepas resistentes a este antibióticoItem Obtenção de lipídios por rompimento de membrana celular usando plasma não-térmico: uma abordagem alternativa para produção sustentável de lipídios(2024-08-02) Oliveira, Virgínia Klausner de; Castilho, Maiara Lima; Contini, Rita de Cássia Mendonça Sales; Cordeiro, Thainá Barbosa de Lima; Vieira, Lúcia; São José dos CamposLeveduras oleaginosas têm se destacado como produtoras de lipídios de interesse industrial como fonte alternativa de produção de lipídios devido à necessidade de reduzir a dependência de recursos fósseis e promover o desenvolvimento de bioprodutos renováveis. Rhodosporidium toruloides (Rt) é uma levedura oleaginosa promissora porque pode acumular grandes quantidades de lipídios neutros intracelulares. Esses lipídios têm valor comercial em diversos setores, incluindo biocombustíveis, produção de alimentos, produtos químicos e farmacêuticos. Nesta dissertação, foram estudados o rendimento da Rt e o rompimento da parede celular para posterior extração lipídica. A ruptura da parede celular foi realizada de duas formas: via plasma não térmico e extração direta do óleo por meios químicos. A morfologia celular foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV) antes e depois da ruptura da parede celular por aplicação de plasma não-térmico. As análises do óleo foram realizadas após ruptura da parede celular por meio de espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), e cromatografia gasosa com detector de ionização de chama (CG-FID). O resultado de CG-FID de ambas as vias de rompimento da membrana celular apresentam maior porcentagem de ácido palmítico e ácido oleico e seus derivados, a diferença pode ser notada na quantidade desses ácidos graxos presentes em cada amostra, com tratamento a plasma é possível observar valor elevado da concentração de ácido palmítico em detrimento do tratamento com ácido. O tratamento com plasma não-térmico mostrou-se eficiente na quebra com período de exposição de 5 minutos, e o óleo extraído fica sólido à temperatura ambiente, em torno de 24 °C. Com a técnica de MEV foi possível observar a morfologia e os danos causados à parede celular do o Rt, com espectros de FTIR confirmando a presença de ácido palmítico e ácido oleico na composição dos lipídios extraídos. Por fim, as duas amostras de óleo extraídas, com rompimento via plasma e via ácido, por solventes químicos foram testadas como lubrificante entre um par tribológico de esfera e placa de aço 316L em atmosfera ambiente em uma trilha de 1 mm com força normal de 5N e frequência de 1Hz. Neste contexto, os resultados indicaram uma redução mais significativa no coeficiente de atrito para o óleo obtido via plasma não-térmico. A composição química deste óleo foi analisada para melhor elucidar os resultados obtidos.Item Síntese de nanopartículas de prata funcionalizadas com amicacina aplicadas contra cepas resistentes de Acinetobacter baumannii(2021-12-07) Camargo, Larissa de Oliveira; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro José; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; São José dos CamposA humanidade se depara com um dos maiores problemas de saúde após décadas de terapia bem-sucedida de acordo com a Organização Mundial da Saúde: bactérias multidrogas resistentes. Dessa maneira, inúmeras pesquisas têm sido realizadas com a intenção de melhorar o espectro de ação dos agentes antimicrobianos existentes e ainda, desenvolver novos fármacos. Há duas substâncias antibacterianas bastante conhecidas, os sais de prata usados desde a Antiguidade e a amicacina, um aminoglicosídeo desenvolvido nos anos 70 com potente atividade contra microrganismos Gram-negativos. Entretanto, devido aos mecanismos evolutivos bacterianos, ambas as drogas perderam a eficácia contra algumas bactérias como Acinetobacter baumannii, um bacilo Gram-negativo nosocomial que pode ser letal em pacientes imunologicamente comprometidos. Objetivando reverter essa problemática, esta pesquisa prevê o desenvolvimento de um nanofármaco a partir de nanopartículas de prata funcionalizadas ao antibiótico amicacina e a avaliação do seu potencial bactericida/bacteriostático contra cepas resistentes de Acinetobacter baumannii. As nanopartículas de prata (AgNPs) foram sintetizadas por meio da redução química entre nitrato de prata e borohidreto de sódio, sendo caracterizadas por espectroscopia UV-Visível na faixa entre 380-400 nm e pelo espalhamento dinâmico de luz. A reação química da carbodiimida foi utilizada para a modificação da amicacina a fim de introduzir grupos dissulfetos no fármaco favorecendo a ligação com as nanopartículas, formando o nanofármaco. A caracterização do processo de modificação do fármaco foi confirmada pela observação dos grupos funcionais moleculares por espectroscopia no infravermelho. Os testes de suscetibilidade como concentração inibitória mínima determinada pela técnica de microdiluição em caldo e concentração bactericida mínima foram realizados de acordo com a padronização internacional ISO 20776-1 usando quatro cepas clínicas de Acinetobacter baumannii multidroga resistentes e uma cepa ATCC (19606) sensível à amicacina para avaliar o potencial bacteriostático e bactericida do nanofármaco (AgNPs@Amicacina) desenvolvido. As AgNPs sintetizadas apresentaram um diâmetro hidrodinâmico de aproximadamente 37nm com uma distribuição bimodal e boa estabilidade química. A conjugação da amicacina com a nanopartícula de prata foi efetiva apresentando bandas de absorção especificas caracterizando o nanofármaco sintetizado. Os testes de susceptibilidade mostram uma grande eficácia das AgNPs@Amicacina contra cepas resistentes de Acinetobacter baumannii apresentando uma concentração bactericida e bacteriostática de 0,5 µg/mL. Esses estudos demonstram dados promissores para o desenvolvimento de um novo antimicrobiano com dosagens mais baixas de aminoglicosídeos, menores efeitos adversos e maior eficácia aplicados em cepas com perfil multidrogas resistentesItem Specific nanomarkers fluorescence: in vitro analysis for EGFR overexpressed cells in triple-negative breast cancer and malignant glioblastoma(Elsevier) Vieira, Paula Fonseca Antunes; Jesus, Viviane Paula dos Santos; Cândido, Marcela Aparecida; Pacheco-Soares, Cristina; Castilho, Maiara Lima; Raniero, Leandro JoséBackground: Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR receptor) is encoded by the EGFR gene. EGFR receptor signaling pathways are activated by EGF protein, regulating cell actions. Overexpression of EGFR receptor may be linked to malignancies with a poor prognosis. As a result, EGFR receptor is being studied for a variety of tumor diagnostics, spurring the development of innovative approaches to increase quality and efficiency. Nanomaterials can recognize cancer cells by specifically targeting of molecular pathways, underscoring the importance of nanomedicine. In this study, we synthesized EGFR-specific nanomarkers by functionalizing EGF protein and Chlorin e6 in gold nanoparticles. These nanoparticles use active targeting to deliver EGF protein to EGFR receptor, and Chlorin e6 serves as a fluorescent marker molecule Methods: Nanomarkers were examined in vitro in MDA-MB-468 and M059J cell lines. Confocal microscopy and flow cytometry were used to examine the distribution, uptake, internalization, and fluorescence intensity of nanomarkers in vitro Results: The results show that both lines examined accumulate nanomarkers. However, MDA-MB-468 had the highest intensity due to its EGFR receptor overexpression properties Conclusion: The findings point to ideal properties for detecting EGFR receptor overexpressed cells.Item Tratamento de Câncer de Mama em Modelo Animal Via Terapia Fotodinâmica Associada a Nanossondas Bifuncionais(2022-12-13) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Zezell, Denise Maria; Espírito Santo, Ana Maria do; Jesus, Viviane Paula dos Santos; Castilho, Maiara Lima; São José dos CamposA superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) está presente em diferentes tipos de câncer, entre eles, bexiga, colo uterino, colorretal, gástrico, em especial, o câncer de mama triplo-negativo (TNBC). Desta forma, a superexpressão do EGFR está correlacionada com um mau prognóstico do paciente, pois está associada à ativação de genes de desenvolvimento, invasão e diferenciação tumoral. Nesse sentido, há a necessidade de novos tratamentos contra o câncer de mama. Visando um tratamento menos invasivo e de efeitos colaterais reduzidos, a presente tese propõe avaliar a ação antitumoral e toxicológica da terapia fotodinâmica (TFD) em associação às nanossondas bifuncionais (NB), em modelo animal. Estas avaliações objetivam responder questões vinculadas à produção de espécies reativas de oxigênio e ao tipo de morte celular. É importante ressaltar que a presença da proteína fator de crescimento epidérmico na NB pode oferecer afinidade tumoral, revelando um potencial mecanismo para acessar outros tipos de câncer. Dessa forma, a captação das NB pelas linhagens celulares utilizadas, MDA-MB-468 (TNBC - adenocarcinoma mamário humano) e MCF 10A (epitelial de mama) foi constante, entretanto, descontinuada nas células epiteliais de mama após 120 minutos de incubação, que tampouco revelaram citotoxicidade. As células de TNBC não mostram saturação no período estudado. A TFD revelou excelentes resultados para o tratamento, em que o aumento da concentração de NB influenciou o tipo de morte celular, sendo possível estabelecer uma correlação com a atividade mitocondrial. A análise histológica permitiu a comparação entre grupos para avaliar a resposta tecidual ao tratamento. Os resultados se complementam ao confirmar a eficiência das NB in vitro e in vivo. Outro resultado importante obtido pela técnica de citometria de fluxo foi aplicação da NB como nanomarcador de EGFR, permitindo diferenciar as linhagens celulares estudadas. Desta forma, a NB pode ser utilizada como marcador específico diagnóstico e como tratamento na TFD.