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Navegando por Autor "Soares, Cristina Pacheco"

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2D and 3D Models of Alzheimer’s Disease: Investigating Neuron-like Cells in Oxidative Environments
(ACS Publications) Salles, Geisa Rodrigues; Giraldi, Luiza de Andrade; Silva, Newton Soares da; Porcionatto, Marimelia Aparecida; Soares, Cristina Pacheco
Alzheimer’s disease (AD) is a complex and enigmatic neurodegenerative disorder in which amyloid-β (Aβ) aggregates and oxidative stress play crucial roles in neuronal damage. Aβ forms senile plaques, while reactive oxygen species (ROS)-induced oxidative stress causes cellular dysfunction. Elucidating neuronal injury led by mild and severe oxidative stress may provide insight into how neurons respond to toxic environments. In parallel, modeling AD three-dimensionally is in the spotlight, sustainably contributing to reducing animals in research and replicating spatially neuronal mechanisms, such as neurite network and oxidative stress responses. This study evaluates the effects of oxidative stress on neuron-like cells cultured in two-dimensional (2D) and 3D spheroids, strengthening their potential as platforms for AD investigation. For the 2D models, SH-SY5Y (cells from human neuroblastoma) cells were differentiated into the neuronal phenotype and exposed to mild or severe concentrations of oxygen peroxide (H2O2, 100 or 200 μM, respectively). Cytoviability, ROS, Aβ particle analyses, and morphological aspects were assessed. Neuronal cells under severe stress produced elevated levels of intra- and extracellular Aβ aggregates. A range of Aβ particle analyses were performed comparing their properties, and morphologically, neurites were compromised under severe stress. For the 3D models, SH-SY5Y spheroids were self-assembled by 10 days of cultivation on developed nonadhesive hydrogel microwells and differentiated into the neuronal phenotype; their area, circularity, and solidity were measured. Spheroids were exposed or not to 200 μM H2O2, stained for cytoskeleton/nuclei, and imaged by scanning electron microscopy (SEM), and their viability was evaluated. Throughout the cultivation period, spheroids grew and differentiated morphologically. Neurite distribution was observed along the 3D composition; however, under oxidative stress, cytoviability decreased, abnormal nuclear staining was observed surrounding the spheroids, and morphological disorganization was evident by SEM, representing structural disarrangement and nuclear disruption. Briefly, this study provides a basis for exploring oxidative stress and producing robust 3D approaches to unraveling AD mechanisms.
3D-bioprinted model of adult neural stem cell microenvironment in Alzheimer’s disease
(ACCSCIENCE Publishing) Ferreira, Natalia Dall’Agnol; Ferreira, Paula Scanavez; Soares, Cristina Pacheco; Porcionatto, Marimelia Aparecida; Salles, Geisa Rodrigues
Neurogenesis plays a major role in neuroplasticity and memory. In adult human and mouse brains, neural stem cells (NSCs) are mainly distributed in two extensively characterized neurogenic niches: the subgranular zone (SGZ) of the hippocampus and the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricles. Impaired neurogenesis is one of the consequences of Alzheimer’s disease (AD), contributing to cognitive decline and progressive memory loss. Developing new in vitro models that resemble this three-dimensional (3D) structure is fundamental for enhancing our understanding of the SVZ neurogenic niche dynamics in AD. Herein, we produced and characterized a 3D-bioprinted model of the adult SVZ neurogenic niche containing amyloid β (Aβ) oligomers, mimicking the NSC microenvironment in AD. In this model, Aβ oligomers induce oxidative stress and reduce the proliferative potential of NSCs, while stimulating neuronal differentiation. We hypothesize that these events are an early attempt of adult NSCs to compensate for neuronal death in AD pathogenesis. Our 3D model simulates the NSC niche physiology, reproducing an early response of NSCs in AD, strengthening the importance of studying the potential of neurogenesis in neurodegeneration.
Ação da terapia fotodinâmica com curcumina na interação de macrófagos e amastigotas de L. braziliensis e L. major
(2021-09-21) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Silva, Newton Soares da; Ribeiro, Martha Simões; Lindoso, José Angelo Lauletta; Pereira, André Henrique Correia; São José dos Campos
A leishmaniose tegumentar (LT) é uma doença negligenciada que está entre as 10 doenças infecciosas mais importantes do mundo. O tratamento convencional é feito com antimoniais pentavalentes e anfotericina, medicamentos que apresentam diversos efeitos colaterais e contraindicações. A terapia fotodinâmica (TFD) com curcumina surge como alternativa no tratamento da LT, visto que se baseia em aplicação local, não invasiva e seletiva, enquanto utiliza um composto natural de baixo custo como fotossensibilizador. Esse trabalho teve por objetivo a avaliação, in vitro, da TFD aplicada sobre amastigotas de L. braziliensis e L. major em interação com macrófagos por meio de análise de viabilidade, morfologia, internalização do FS, atividade e potencial de membrana mitocondrial e recuperação de parasitos pósTFD. Foram utilizadas concentrações de curcumina em diluições seriadas, de 500 a 7,8 µg.mL-1, e irradiação com luz azul (450 nm), irradiância de 36 mW/cm² e fluência de 10 J/cm². Os resultados demonstram ampla inativação e baixa citotoxicidade da TFD com curcumina em macrófagos infectados e não infectados nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1. A internalização do FS demonstrou localização do composto em todo o citoplasma da célula, além de concentração no núcleo, e nos amastigotas intracelulares. A morfologia pós-tratamento se mostrou alterada, exibindo destruição celular nos grupos submetidos à TFD, enquanto os grupos não tratados permaneceram com a morfologia dos macrófagos preservada. Foi observada elevação do potencial de membrana mitocondrial e diminuição da atividade mitocondrial nos grupos que receberam a terapia. Além disso, a contagem de parasitos recuperados pós-TFD demonstrou que houve diminuição do número de parasitos viáveis, indicando que a terapia pôde inativar não só os macrófagos, mas também os amastigotas intracelulares para as duas espécies de Leishmania estudadas. Os testes realizados demonstraram potencial da TFD com curcumina nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1, promovendo a inativação de macrófagos infectados com Leishmania, bem como alterações celulares morfológicas e nopotencial de membrana e atividade mitocondrial.
Ação da Terapia Fotodinâmica em linhagem celular de gliossarcoma 9L/lacZ utilizando baixas fluências e concentrações de Fotoenticine e Photodithazine
(2022-03-22) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Tada, Dayane Batista; Vitório, Gabrielle dos Santos; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
O Gliossarcoma é um câncer agressivo, com alta propensão metastática. Atualmente seu tratamento consiste em ressecção cirúrgica seguida de radio-quimioterapia, oferecendo baixa expectativa e qualidade de vida. Como proposta alternativa, a Terapia Fotodinâmica (TFD) se apresenta como método seletivo de tratamento, combinando o uso de um fotossensibilizador (FS), oxigênio molecular e luz. Esses três elementos geram as espécies reativas de oxigênio, levando à morte celular. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação da TFD utilizando as clorinas Fotoenticine (FTC) e Photodithazine (PDZ) em baixas concentrações e fluências, verificando a diferença entre seus efeitos. Foram utilizadas células 9L/lacZ e concentrações de 1,55 µg.mL -12,50 µg.mL -1 e 50,00 µg.mL-1de ambas clorinas. As células foram irradiadas com um dispositivo a base de LED em 660 nm nas fluências de 1 J/cm², 5 J/cm² e 10 J/cm², em 25 mW/cm². Observou-se que ambas clorinas apresentam indícios da formação de fotoprodutos após irradiação e são internalizadas em toda extensão citoplasmática, com restrição ao núcleo. Os testes de citotoxicidade demonstraram redução >98% da viabilidade celular e queda na atividade mitocondrial >86% nas concentrações de 50,00 µg.mL-1 e 12,50 µg.mL-1 em todas as fluências de luz testadas, entretanto a concentração de 1,55 µg.mL-1não apresentou um resultado tão eficaz na fluência de 1 J/cm². Houve alteração na adesão celular após TFD conforme diminuição da concentração, no qual as células desprendidas se apresentavam mortas, indicando que o desprendimento celular corresponde à uma característica do processo de morte celular, assim como as alterações morfológicas apresentadas, como a perda da extensão citoplasmática, adquirindo formato arredondado. A imunodetecção de HSP70 diminuiu, enquanto a de HSP27 aumentou após TFD com o FTC. Com isso, conclui-se que ambos FS foram eficazes na TFD em células de gliossarcoma, com destaque para a concentração de 50,00 µg.mL-1 na fluência de 5 J/cm². Além disso, levando em consideração a elevada imunodetecção da HSP27 na TFD com o FTC, o PDZ se apresenta como um promissor FS para ser empregado na TFD com células 9L/lacZ, encorajando estudos in vivo.
Antitumor activity of membranes associated with Acmella oleracea extract
(Associação Brasileira de Divulgação Científica) Silva, Carlos Augusto Priante da; Godoi, Bruno Henrique; Menegon, Renato Farina; Silva, Newton Soares da; Soares, Cristina Pacheco
Epithelial cancers, such as epidermoid cancer and some adenocarcinomas, affect surface areas that are generally more accessible to various treatments. However, this group of tumor cells has an aggressive behavior, leading to a high annual mortality rate. The development of a biomaterial that is non-invasive, can kill tumor cells, and prevent opportunistic infections is the basis for the treatment for this type of cancer. Therefore, the objective of this study was to develop a biomaterial from chitosan and A. oleracea extracts that exhibits cytotoxic action against the HEp-2 tumor cell line. Dried crude 90% ethanol extracts were obtained through ultrasound-assisted maceration, followed by liquid-liquid extraction to yield the butanol fraction. From these extracts, chitosan membranes were developed and evaluated for their antitumor activity against HEp-2 using viability tests with crystal violet and MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, in addition to a wound healing test. The cytotoxic assays indicated a significant reduction in cell density and mitochondrial activity, especially at the concentration of 1000 mg/mL of crude extract. The butanol fraction had minimal effects on mitochondrial activity. The wound healing test demonstrated that the biomaterial and extract prevented closure of the wound created in the cell monolayer within 48 h of incubation and caused changes in cell morphology. In view of this, we concluded that a chitosan membrane associated with a 90% ethanol extract of Acmella oleracea exhibited cytotoxic activity is a potential alternative treatment for superficial cancers.
Aplicação de bionanossensor para diagnóstico da superexpressão do EGFR in vitro
(2023-03-07) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Campos, Andrea Porto Carreiro; Vieira, Paula Fonseca Antunes; São José dos Campos
O Receptor do Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR) é codificado pelo gene EGFR. A superexpressão do receptor EGFR pode estar ligada a malignidades com pior prognóstico e suas vias de sinalização EGFR são ativadas pela proteína EGF, regulando as ações celulares. Como resultado, o receptor EGFR está sendo estudado para uma variedade de diagnósticos de tumores, estimulando o desenvolvimento de abordagens inovadoras para aumentar a qualidade e a eficiência dos exames diagnósticos. Os nanomateriais podem reconhecer células cancerígenas por direcionamento específico de vias moleculares, ressaltando a importância da nanomedicina. Neste estudo, bionanossensores foram sintetizados para detecção da EGFR, pelo processo de funcionalização da proteína EGF e Clorina e6 (Ce6) em nanopartículas de ouro. Essas nanopartículas utilizam o direcionamento ativo para entrega da proteína EGF ao receptor EGFR, e a Ce6 serve como uma molécula marcadora fluorescente. Bionanossensores foram examinados in vitro em linhagens celulares MDA-MB-468 e M059J. A distribuição, absorção, internalização e intensidade de fluorescência dos bionanossensores in vitro foi determinada por Microscopia Confocal e Citometria de Fluxo. Os resultados mostram que ambas as linhagens celulares analisadas acumulam bionanossensores, no entanto, a MDA-MB- 468 possui maior intensidade devido às suas propriedades de superexpressão do receptor EGFR. Os achados apontam para propriedades ideais para a concepção de um diagnóstico inovador, cuja acurácia se dará pela detecção de células superexpressas do receptor de EGFR em estágios precoces do câncer.
Avaliação da Curcumina na terapia fotodinâmica sobre biofilme de Staphylococcus Aureus resistente à Meticilina: estudo in vitro
(2021-10-05) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Simioni, Andreza Ribeiro; Junqueira, Juliana Campos; Ribeiro, Isabelle de Paula; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
O aumento do número de bactérias multirresistentes aos antibióticos em ambientes de prestação de serviços à saúde vem se tornando um problema global de saúde pública. Os biofilmes são estruturas que conferem às bactérias uma maior resistência antimicrobiana. Por isso, os estudos com biofilmes bacterianos tornaram-se objeto de extrema relevância, uma vez que essas estruturas reduzem a penetração dos antibióticos, comprometendo a resposta imunológica do hospedeiro. A terapia fotodinâmica (TFD) é um tratamento que que combina a luz, uma substância fotossensível (FS) e o oxigênio molecular, gerando espécies reativas de oxigênio, levando à morte celular, surge como uma alternativa na inativação desses microrganismos. O objetivo deste trabalho foi avaliar, em estudo in vitro, a ação antimicrobiana da TFD, mediada pela curcumina (Curcuma Longa), em biofilme de cepa Staphylococcus aureus, resistentes à Meticilina (MRSA). Os grupos experimentais foram divididos em Controle, Controle Escuro, Fotossensibilizador (FS), Irradiado (claro), TFD. Os grupos FS e TFD foram incubados com curcumina durante 20 minutos. Em seguida, o grupo TFD foi irradiado utilizando dispositivo de LED em 450 nm, com irradiância de 110 mW/cm2 e fluência de 50 J/cm2. Foram avaliadas a internalização do FS por microscopia confocal, as unidades formadoras de colônia (UFC), a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), o metabolismo bacteriano por meio do Resazurin, a estrutura do biofilme por microscopia eletrônica de varredura (MEV), antes e após a PDT. Os resultados demonstraram que a TFD mediada pela curcumina foi capaz de reduzir o crescimento de biofilme de cepa MRSA, alterar a atividade metabólica e aumentar a produção de ERO. Pela microscopia confocal foi observada a presença da curcumina no biofilme e o MEV demonstrou que a estrutura do biofilme foi alterada após TFD. O estudo mostrou que a TFD é capaz de reduzir o crescimento do biofilme de cepa MRSA, evidenciando a eficácia da curcumina como FS a ser utilizado na TFD
Avaliação dos Efeitos da Fotobiomodulação com LEDs de Diferentes Comprimentos de Onda em Fibroblastos In Vitro
(2025-11-26) Pinto, Juliana Guerra; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Soares, Cristina Pacheco; Nicolau, Renata Amadei; Santos, Emília Pio Ferrari dos; Ferreira, Juliana; São José dos Campos
A fotobiomodulação (FBM) é uma terapia não invasiva que utiliza luz em diferentes comprimentos de onda para modular processos celulares e estimular a regeneração tecidual. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da irradiação com LED em fibroblastos L929 cultivados in vitro, empregando os comprimentos de onda de 420, 450, 530, 590 e 630 nm, todos aplicados com fluência padronizada de 5 J/cm². As análises incluíram viabilidade celular (azul de Trypan), atividade metabólica (ensaio de MTT), morfologia (Giemsa) e perfil bioquímico (FTIR-ATR), com tratamento estatístico por ANOVA/Tukey (p < 0,05). Os tempos de irradiação variaram conforme o diodo emissor: 420 nm (114 s; 43,7 mW/cm²), 450 nm (149 s; 33,6 mW/cm²), 530 nm (60 s; 83,3 mW/cm²), 590 nm (333 s; 15 mW/cm²) e 630 nm (129 s; 38,6 mW/cm²). Os resultados indicaram respostas distintas conforme o comprimento de onda. O LED de 420 nm reduziu discretamente a atividade metabólica sem comprometer a viabilidade; 450 nm manteve perfil semelhante ao controle, com alterações bioquímicas sutis; 530 nm promoveu aumento significativo da atividade metabólica e padrões compatíveis com estímulo ao reparo celular; 590 nm apresentou efeito inibitório; e 630 nm preservou a viabilidade, com indícios de incremento na síntese proteica. Conclui-se que a resposta dos fibroblastos à FBM é dependente do comprimento de onda e da parametrização utilizada, reforçando a importância da padronização dos parâmetros de irradiação para alcançar efeitos terapêuticos desejáveis sem comprometer a integridade celular. Os achados contribuem para o entendimento dos mecanismos celulares da fotobiomodulação e fornecem suporte para sua aplicação segura e eficaz em protocolos clínicos, especialmente na dermatologia regenerativa.
Avaliação dos efeitos, em fibroblastos, da irradiação com LED em diferentes comprimentos de onda isolados e combinados
(2020-12-10) Ferreira-Strixino, Juliana; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Soares, Cristina Pacheco; Souza, Carla; Barbosa, Lívea Fujita; Ribeiro, Maria Emilia de Oliveira Brenha; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
Diversos trabalhos no campo da fotobiologia têm focado nos efeitos, na pele, da luz visível, compreendida entre 400 –700 nm. Dentre os comprimentos de onda mais estudados, estão o azul (em torno de 455 nm) e vermelho (em torno de 630 nm), para os quais já foram descritos benefícios tanto no tratamento de patologias, como acne, quanto para efeitos anti-envelhecimento, estimulando a expressão de proteínas relacionadas à manutenção da estrutura da pele. O uso combinado dos diferentes comprimentos de onda, no entanto, ainda não foi explorado, apesar de já existirem equipamentos com esta característica em uso tanto por médicos quanto consumidores. O objetivo deste trabalho foi aprofundar o conhecimento na combinação de três diferentes comprimentos de onda: região de 525 nm (luz verde), 630 nm(luz vermelha) e 455 nm (luz azul). A primeira etapa consistiu na idealização, montagem e testagem da operação de um aparato para irradiação, pois não há disponível comercialmente para estudos in vitro. O aparato foi construído e apresentou-se preciso na irradiação dentro dos comprimentos de onda de interesse. Para ele, foi solicitado um Registro de Software, já concedido, e também depositada uma Patente de Invenção. Os efeitos da irradiação foram caracterizados sob três aspectos: 1) citotoxicidade, por meio de ensaios de exclusão por azul de Trypan e micronúcleo; 2) formação de radicais livres, pelo marcador H2DCF-DA e, 3) análise do conteúdo proteico, pelo SDS-PAGE. Três fluências foram testadas: 80 J/cm2, 40 J/cm2e 4 J/cm2. A fluência80 J/cm2apresentou mortalidade celular em torno de 11%e foi excluída. A fluência de 40 J/cm2apresentou resultados similares ao controle negativo nos ensaios de Micronúcleo e Formação de Espécies Reativas de Oxigênio, sendo a escolhida para análise do conteúdo proteico. Neste, foram encontradas bandas referentes à colágeno, laminina e elastina, além de metaloproteinases de matriz e fatores de crescimento de fibroblasto (FGF). O colágeno I foi positivamente regulado pelo LED vermelho, mas negativamente pelo LED verde. Para Laminina, não foram encontradas diferenças qualitativas entre os grupos. Demonstrou-se diminuição de MMP-1 nas condições onde havia incidência de luz vermelha corroborando os achados de literatura, além de diminuição na expressão de MMP-7 e MMP-14, resultados ainda não descritos. Para FGF demonstrou-se, pela primeira vez, possível efeito inibitório do LED verde. Já o LED vermelho, por sua vez, apresentou-se similar ao controle, diferentemente do descrito em literatura, muito provavelmente devido à compensação do efeito dos LEDs verde e azul. Conclui-se que a interação entre os diferentes comprimentos de onda pode levar a interferências nos resultados, como é o caso da expressão de FGF sendo afetada pela irradiação conjunta com outros LEDs. Sugere-se uso de marcadores específicos e técnicas quantitativas para confirmação destes achados.
Avaliação in vitro de nanopartículas de ouro em células de GBM irradiadas em aparelhos de tomografia e radioterapia
(2020-07-23) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Liu, Andréa Santos; Gialluca, Vanessa Dias; Castilho, Maiara Lima; São José dos Campos
s neoplasias malignas representam um grupo de mais de 100 doenças diferentes que apresentam como característica, a diferenciação genética do tecido de origem, levando ao crescimento desordenado de células, que invadem tecidos e órgãos normais. Embora tenham ocorrido avanços significativos dessas modalidades tradicionais terapêuticas, as neoplasias malignas representam ainda um grande desafio, considerando, especialmente os subtipos de maior agressividade e letalidade. Entre os tumores mais agressivos encontramos o Glioblastoma Multiforme, com mortalidade de cerca de 95% e sobrevida mediana de 15 meses. A Temozolomida é o quimioterápico até o momento testado e aprovado com melhor resposta neste subtipo tumoral. O objetivo desta dissertação foi avaliar a potencialização desta modalidade terapêutica associada as nanopartículas de ouro quando irradiadas com radioterapia e tomografia. Para tanto a Temozolomida foi caracterizada quimicamente, realizada a sintetização de nanopartículas de ouro e, posteriormente foi testada a citotoxidade isolada do quimioterápico e dos conjuntos da Temozolomida com as nanopartículas de ouro em diferentes concentrações e, por fim foi avaliado a potencialização dos efeitos citotóxicos em placas irradiadas em aparelho de tomografia e radioterapia. Os resultados demonstram que houve um efeito citotóxico quando as nanopartículas de ouro foram utilizadas isoladamente e em conjunto com a Temozolomida e irradiadas com aparelho de tomografia e as nanopartículas de ouro potencializaram significativamente o efeito citotóxico da radioterapia quando associado a Temozolomida. Conclui-se, portanto que as nanopartículas de ouro potencializam o efeito da Temozolomida no tratamento de células de GBM, tanto quando irradiado com tomografia, quanto com radioterapia, com grande potencial para uso terapêutico em associação com as terapias tradicionais.
Biomodulatory effect of low intensity laser (830 nm.) in neural model 9L/lacZ
(CDRR Editor) Zabeu, Antonieta Marques Caldeira; Carvalho, Isabel Chaves Silva; Soares, Cristina Pacheco; Silva, Newton Soares da
Currently, research is advancing with low-intensity laser (LIL) in cells of the central nervous system, with the aim of evaluating the benefits of this therapy in neurological disorders such as Alzheimer's, stroke, ischemia, epilepsy, among others. The aim of this study was to verify the biomodulatory and biostimulatory effects of LIL in neural cell culture. Diode laser at wavelength λ = 830 nm, power 40 mW, in continuous mode, was applied on the 9L/lacZ cell line with energy densities of 0.5 to 3 J/cm . The analysis was performed 24 hours after irradiation, the results of cell viability showed a difference between the control and irradiated groups. As for the occurrence of apoptosis, no significant manifestation was observed between the control group compared to the irradiated group (P = 0.9956); there was a significant difference between apoptosis and death by necrosis between the control and treated groups (P<0.001). In the comet assay no statistically significant differences were observed. Regarding the objective of evaluating whether LIL promotes early activation of apoptosis or proliferation of 9L/lacZ cells at different energy densities of the infrared diode laser, we observed an increase in the number of neural cells, highlighting the action of biomodulation. Furthermore, LIL did not promote the activation of programmed cell death - apoptosis and did not show any indication of DNA damage by the comet assay. The results of this study are indicative that the laser in the near infrared has a positive interaction with neuronal cells.
Comparação dos efeitos do photodithazine, fotoenticine e protoporfirina IX aplicado à terapia fotodinâmica em gliossarcoma
(2020-03-02) Ferreira-Strixino, Juliana; Nicolau, Renata Amadei; Tada, Dayane Batista; Inada, Natalia Mayumi; Fontana, Letícia Corrêa; Soares, Cristina Pacheco; São José dos Campos
A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma terapia promissora, que emprega um agente fotossensível (FS), luz e oxigênio molecular, produzindo espécies reativas de oxigênio(ERO’s)com o objetivo de induzir a célula cancerígena à morte, sendo um tratamento de interesse à Tumores Cerebrais. O objetivo desse trabalho foi avaliar a ação da TFD em células de gliossarcoma, utilizando como FS as clorinas russa (Photodithazine -PDZ) e espanhola (Fotoenticine -FTC)e o precursor da protoporfirina IX, ácido aminolevulínico (ALA). Foram realizados testes in vitro, a fonte de luz foi um dispositivo LED (Biopdi/Irrad-Led 660) para as clorinas e um dispositivo LED (Biopdi/Irrad-Led 630) para o ALA. Foram realizados testes de viabilidade celular com células 9L (gliossarcoma) e L929 (fibroblastos), e foi demonstrado que o sucesso da terapia é dependente da concentração do FS utilizado. Para o ALA, o período de incubação mínimo para que haja resposta eficaz, foi o período de 4h. Por meio do teste de internalização das clorinas, foi constatado a presença dos FSs no interior das células após 1h de incubação. Ao se observar os tipos de morte celular induzidos pela TFD com os três FSs, foi demonstrada a prevalência de morte celular por necrose ou apoptose tardia, com ausência de apoptose inicial. Por fim, houve um aumento na produção de ERO’s após a TFD para todos os FSs, porém quando visto o ALA, o tempo de incubação é fator chave para a produção dessas espécies. Entre as clorinas, o PDZ apresentou maior rendimento quântico de oxigênio singleto, sendo considerado o melhor fármaco entre os 3 testados. O PDZ foi utilizado para análise in vivo de acúmulo da clorina em tumores xenográficos induzidos em ratos Fischer, com células 9L.Com 1h observou-se acúmulo do FS no tumor, sendo crescente no tempo de 3h. Além disso, se apresentou um fármaco de fácil transporte via sistêmica ou local. Por fim, foi constatado presença do FS na região do crânio, porém novos estudos devem ser realizados para comprovar sua passagem pela barreira hematoencefálica.
Desenvolvimento de biomaterial à base de Acmella Oleracea (L.) R. K. Jansen com atividades cicatrizante, antibacteriana e antitumoral
(2021-05-25) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Perazzo, Fabio Ferreira; Silva, Carlos Augusto Priante da; Menegon, Renato Farina; São José dos Campos
Acmella oleracea popularmente conhecida como jambu, é utilizada na medicina alternativa e culinária popular do Brasil e diversos outros países, tendo diversos metabólitos secundários associados à sua bioatividade, como compostos fenólicos e flavonoides. Estas atividades incluem sua capacidade anestésica, antibacteriana e cicatrizante. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver uma membrana de quitosana a base do extrato foliar de A. oleracea para aplicação médica em feridas superficiais, avaliando sua capacidade antibacteriana, cicatrizante e antitumoral, para indicação no tratamento de câncer epidermóide. O extrato metanolico utilizado foi obtido por maceração assistida por ultrassom e em seguida fracionado com os solventes Acetato de etila e Butanol. A atividade cicatrizante e tóxica das amostras (Extrato bruto, Fração Butanol e Fração Acetato de etila) assim como o biomaterial (Membrana de quitosana, Membrana de quitosana associada ao extrato bruto e Membrana de quitosana associada a fração butanol) foram avaliadas através da capacidade proliferativa em linhagem L929 (fibroblasto de camundongo) e HEp-2 (Carcinoma de laringe humana) por fechamento de ferida in vitro e ensaios de citotoxicidade (Cristal violeta e MTT), além de genotoxicidade por teste de micronúcleo. A ação antibacteriana dos extratos e membrana em cepas Staphylococos aureus e Escherichia coli, foi avaliada pela densidade celular e formação unidades formadoras de colônias a partir do contato com o biomaterial. Estes testes mostraram a capacidade do material de aumentar a proliferação celular e atividade mitocondrial e não levar à formação de micronúcleos em linhagem L929 pela fração butanol, não observado o mesmo na fração acetato de etila e extrato bruto, havendo queda da viabilidade neste último. A atividade antitumoral avaliada pelos mesmos testes em linhagem HEp-2 (Câncer de laringe humano) determinou a capacidade citotóxica da fração butanol ao reduzir a densidade celular e atividade mitocondrial, o que também foi observado na fração acetato de etila e extrato bruto principalmente na maior concentração testada de 1000 µg/mL, não havendo o fechamento da ferida in vitro. Teste de citotoxicidade com microrganismos determinaram a capacidade dos extratos e frações em evitar infecções oportunistas que forem infligidas por S. aureus, sendo todas as amostras eficientes em reduzir o número de bactérias. A fração butanol apresentou um maior rendimento, melhor atividade proliferativa e cicatrizante, não genotóxica e antibacteriana para a cepa S. aureus quando comparado ao extrato bruto e fração Acetato de etila. Ao avaliar a ação das membranas por citotoxicidade indireta observa-se o aumento da densidade celular em células L929 quando incubadas com a membrana associada ao extrato bruto em 48 h de incubação e ação citotóxica do biomaterial associado a fração butanol frente ao teste de cristal violeta, porém havendo aumento da atividade mitocondrial em todos os grupos. Em contrapartida há redução na densidade celular do biomaterial contendo extrato bruto em células HEp-2 e baixa da atividade mitocondrial para a célula em todos os grupos. Apenas a membrana com extrato bruto apresentou atividade antibacteriana com redução no número de células e sem nenhuma unidade de colônia formada. Sendo a única membrana também a permanecer liberando seus compostos após 48h de degradação enquanto outras degradaram em 24h, além de não apresentarem formação de poros visto por microscopia eletrônica de varredura. O biomaterial contendo o extrato bruto foi apontado como a mais viável a compor uma membrana que servirá como biomaterial liberador para atuar em casos de feridas cutâneas, induzindo a cicatrização, matando células tumorais testadas e evitando a infecção local.
Desenvolvimento de método de detecção múltipla e simultânea de anticorpos da classe IGM contra Toxoplasma Gondii, rubéola e citomegalovírus
(2022-12-14) Soares, Cristina Pacheco; Ferreira-Strixino, Juliana; Raniero, Leandro José; Ogawa, Guilherme Maerschner; Almeida, Rainara Moreno Sanches de; Silva, Newton Soares da; São José dos Campos
O diagnóstico sorológico durante a triagem pré e neonatal é de extrema importância na prevenção de doenças. Dentre as doenças infecciosas, as mais comuns são a toxoplasmose, rubéola e citomegalovírus. Os métodos tradicionais de diagnóstico utilizados na triagem neonatal detectam por ensaio um único agente infeccioso. A utilização de métodos de detecção múltipla e simultânea aumenta a produtividade e diminui a quantidade de material utilizado, resultando em um ensaio mais eficiente do ponto de vista técnico, ambiental e econômico. O objetivo do nosso estudo é desenvolver um método de detecção simultânea de anticorpos da classe IgM contra Toxoplasma gondii, rubéola e citomegalovírus. Para isso foram realizados acoplamentos de diferentes antígenos em microesferas magnéticas, seguido de ensaios de desempenho para identificar os melhores parâmetros a serem utilizados, como melhor concentração e tampão. Após definido os acoplamentos, foram realizados ensaios para obtenção dos valores de corte, sensibilidade e especificidade de cada antígeno acoplado. Em seguida, foram realizados ensaios de desempenho para validação analítica dos produtos diagnósticos seguindo as normas na Agência Nacional de Vigilancia sanitaria (ANVISA). Os parâmetros avaliados foram repetibilidade, reprodutibilidade, linearidade, robustez, alta dose, limite mínimo de detecção, especificidade analítica e estabilidade acelerada. Todos os dados obtidos atenderam aos critérios de aceitação da RDC 166/17 para utilização do produto diagnóstico em território nacional. Os ensaios de repetibilidade e reprodutibilidade apresentaram Constante de Variação (CV) menor que 15% entre as replicatas do mesmo operador e operadores distintos. O kit apresentou linearidade em toda a faixa de trabalho com R2 acima de 0.990 e não foi observado efeito de alta dose de anticorpos na diluição de trabalho escolhida. Além disso, o kit não apresentou interferência da matriz com os resultados e foi observado que pequenas e deliberadas alterações no tempo de incubação de cada reagente não afetam de forma significativa nos dados obtidos.
Desenvolvimento de pirulito com fotossensibilizador para aplicação oral da terapia fotodinâmica
(2024-05-03) Ferreira-Strixino, Juliana; Canevari, Renata de Azevedo; Soares, Cristina Pacheco; Carvalho, Danielle Lima Corrêa de; Saud, Larissa Fogaça; São José dos Campos
A saliva desempenha funções cruciais na cavidade bucal, como a formação do bolo alimentar, lubrificação da região de faringe/laringe e prevenção de cáries e doenças oportunistas. A hipossalivação, redução na produção salivar, é um efeito colateral frequente em pacientes submetidos a quimioterapia (QT) e radioterapia (RT), especialmente quando afeta a região de cabeça e pescoço. Esse quadro resulta em toxicidade, interações medicamentosas e dificuldades no manejo dos sintomas, impactando negativamente a qualidade de vida dos pacientes. As alternativas terapêuticas, como a saliva artificial, têm mostrado limitações, como a piora de náuseas e o "gosto metálico" persistente após a QT, dificultando a adesão ao tratamento. Este estudo teve como objetivo o desenvolvimento de um pirulito contendo azul de metileno (AM) para tratar infecções oportunistas e melhorar a xerostomia, com maior adesão, praticidade e melhoria na qualidade de vida do paciente. O AM atua como fotossensibilizador na terapia fotodinâmica, proporcionando uma solução prática e eficaz. Lollipops compostos por corantes, como o AM, tornam a forma de apresentação do produto mais atraente, atendendo de maneira lúdica e eficaz a demanda de pacientes pediátricos, acamados ou em regime homecare. Foram produzidos 67 pirulitos, nos quais foram realizados testes para avaliar sua qualidade. A espectrofotometria foi utilizada para analisar as diferentes concentrações de AM, obtendo-se a curva de calibração necessária. A análise de pH foi realizada com um potenciômetro digital, e os resultados das amostras variaram entre 4,7 e 4,8, indicando consistência na quantidade de ácido cítrico. Para avaliar a umidade residual, que é essencial para a estabilidade do produto, utilizou-se estufa a vácuo. Os valores de umidade residual obtidos foram de 1,1% para a amostra 1, 1,5% para a amostra 2 e 1,2% para a amostra 3, o que é considerado adequado para garantir a durabilidade do pirulito. Além disso, o estudo de estabilidade foi realizado em três temperaturas diferentes (5°C, 30°C e 40°C) ao longo de 12 semanas. Os pirulitos mantiveram-se estáveis a 25°C por até 90 dias. No entanto, quando armazenados a 30°C e 40°C, o produto sofreu deformações nas semanas seguintes, indicando que a temperatura ideal de armazenamento é 25°C. Esses resultados demonstram que o produto desenvolvido é eficiente, com boa estabilidade e praticidade, tornando-se uma solução inovadora para melhorar a adesão ao tratamento de xerostomia e infecções oportunistas em pacientes oncológicos.
Desenvolvimento e avaliação de uma estufa microbiológica para geração de conjuntos de dados utilizados em aprendizado de máquina
(2024-03-08) Ferreira-Strixino, Juliana; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Raniero, Leandro José; Miñán, Alejandro Guillermo; Mendes, Alessandro Corrêa; Godoi, Bruno Henrique; Soares, Cristina Pacheco; São José dos Campos
A identificação microbiológica desempenha um papel fundamental em diversas áreas, desde a segurança alimentar até a pesquisa médica, entendendo a sua importância este estudo visa otimizar a identificação microbiológica, superando limitações dos métodos tradicionais que apresentam demoras e custos operacionais elevados. O trabalho propõe o desenvolvimento e avaliação de uma estufa microbiológica inteligente voltada para a geração de conjuntos de dados utilizados em aprendizado de máquina. A inovação central do projeto reside na integração de um sistema de câmeras avançadas dentro da estufa, capaz de capturar imagens de culturas microbiológicas. Estas imagens são processadas e analisadas por um modelo de Rede Neural Convolucional (CNN), projetado para classificar as imagens com precisão em diferentes intervalos de tempo. O objetivo principal é fornecer um dispositivo avançado, porém acessível, que facilite e aprimore os processos de identificação microbiológica. Resultados experimentais indicam precisão do modelo CNN na classificação de imagens de Staphylococcus aureus com até 80% de acerto no processo no período de 24 horas de cultivo, porém com menor eficácia para Escherichia coli, sugerindo a necessidade de aprimoramento contínuo do modelo. Este trabalho apresenta um método viável e pronto para ser utilizado para criação de bancos de dados aplicados a microbiologia, mesmo com as limitações apresentadas no trabalho, o equipamento foi validado e encontra-se operacional. A tecnologia desenvolvida possui margem para ajustes no modelo de aprendizado de máquina, contudo espera-se que o sistema proposto ofereça uma ferramenta para a identificação rápida e precisa de uma ampla gama de microrganismos, potencializando seu uso em diversas aplicações científicas e industriais.
Efeito da terapia fotodinâmica com curcumina em promastigotas e curcumina nanoencapsulada em amastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania major
(2021-09-24) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Sant'Anna, Luciana Barros; Ribeiro, Martha Simões; Tada, Dayane Batista; Marcolino, Luciana Maria Cortez; São José dos Campos
A leishmaniose tegumentar é uma doença zoonótica, transmitida por fêmeas de flebotomíneos e causada por protozoários do gênero Leishmania. É considerada pela OMS um problema de saúde pública que nos últimos anos apresentou aumento significativo, tanto no número de casos quanto na distribuição geográfica. O tratamento convencional é tóxico e contraindicado para pacientes que apresentam algumas comorbidades e pode causar diversos efeitos colaterais graves. Tendo em vista uma alternativa de tratamento não agressivo vem se estudando a Terapia Fotodinâmica, que consiste em um tratamento não invasivo, não apresenta efeitos colaterais, de fácil acesso que utiliza substâncias de baixo custo, como a curcumina. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da curcumina livre em promastigotas e curcumina nanoencapsuladas em amastigotas de espécies de Leishmanias. Para isso os promastigotas foram incubados com curcumina livre divididos em grupo escuro e irradiado, além do grupo controle escuro e apenas irradiado. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste de exclusão com azul de tripan, a atividade mitocondrial por MTT, as alterações morfológicas por MEV. Para analisar o tipo de morte celular utulizou-se os marcadores Anexina V e iodeto de propídio e para avaliar o potencial de membrana mitocondrial o JC-1, para isso foram obtidas as imagens por microscopia confocal e a fluorescência emitida pelos marcadores foram quantificadas utilizando o software ImageJ. Para analisar a produção de espécies reativas de oxigênio utilizou-se o reagente H2DCF-DA e a fragmentação de DNA foi verificada pelo teste do cometa. Verificou-se a diminuição da viabilidade dos parasitas bem como alterações na atividade mitocondrial. A TFD provocou alterações no potencial de membrana mitocondrial das duas espécies, independentemente do tempo de análise (imediatamente ou 18 horas após tratamento). A produção de ERO foi concentraçãodependente e foi observada apenas nos grupos submetidos à TFD e a espécie L. braziliensis apresentou maior produção de ERO que L. major, no entanto L. braziliensis foi mais resistente que L. major quando analisada a viabilidade após TFD. Os danos no DNA também foram observados nas duas espécies, é sugestivo que a apoptose prevaleceu na espécie L. braziliensis. A morfologia das células foi afetada, principalmente na concentração mais elevada de curcumina, deixando as células arredondadas e flagelo encurtado. Os resultados apoiam o uso da curcumina como fotossensibilizador na TFD contra células de Leishmania. Foram testadas também nanopartículas de BSA associada a curcumina em amastigotas de L. braziliensis e L. major. Para isso macrófagos e macrófagos infectados com Leishmanias foram incubados com a curcumina encapsulada em BSA catiônica e aniônica. Foram realizados testes de viabilidade pelo método de exclusão com azul de tripan, onde foi verificado que apenas a concentração 0,7 µmol. L1 da BSA-Cur catiônica demonstrou redução na viabilidade das células e as concentrações de 0,1 e 0,08 µmol. L-1 da BSA-Cur aniônica reduziu a viabilidade das células, já a concentração de 0,7 µmol. L-1 foi citotóxica. A análise através da microscopia confocal foi realizada para verificar se as nanopartículas eram internalizadas pelos macrófagos e pode-se verificar que as nanopartículas catiônicas e aniônicas se encontravam dentro dos macrófagos e protozoários. Por fim foi realizado teste de viabilidade com os fibroblastos e verificou-se que as nanopartículas não afetaram a viabilidade dessa linhagem celular, no entanto a curcumina livre promoveu diminuição da viabilidade dos fibroblastos após tratamento. Os resultados obtidos foram satisfatórios, demonstrando a capacidade das nanopartículas reduzirem a viabilidade das células em menores concentrações do que a curcumina livre.
Efeito sinérgico da fotobiomodulação com LED 660 E 850 nm em células L929 induzidas ao estresse oxidativo com peróxido de hidrogênio
(2025-09-09) Soares, Luís Eduardo Silva; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Oliveira, Luciane Dias de; Segismondi, Larissa Cavallieri; Soares, Cristina Pacheco; São José dos Campos
A pele está constantemente exposta a agressões externas, tornando-se um alvo para a geração excessiva de espécies reativas de oxigênio (ROS), que induzem danos oxidativos principalmente na região dérmica. A fotobiomodulação (FBM) mostra-se uma terapia eficiente para biomodulação de sistemas biológicos, capaz de modular processos oxidativos e inflamatórios. No presente estudo, buscou-se elucidar o possível efeito fotoprotetor in vitro da aplicação simultânea da FBM com LED 660 e 850 nm em células fibroblásticas L929 diante do tratamento com peróxido de hidrogênio como modelo de estresse oxidativo. Os fibroblastos foram pré-irradiados com LED e em seguida incubados com 200 µM de H2O2 diluído em meio de cultura pelo período de 3 horas. Após 24 horas dos tratamentos, foram observadas alterações quanto à atividade mitocondrial pelo ensaio colorimétrico Alamar Blue e quanto à morfologia celular por microscopia invertida. Também foi realizada a marcação de mitocôndrias e núcleos em células vivas por fluorescência utilizando Tetrametilrodamina (TMRM) e Tricloridrato de bisbenzimida (HOESCHT), além da detecção de ROS por fluorescência utilizando CellRox Orange. Os resultados obtidos indicam que o pré-tratamento com LED promove aumento da atividade mitocondrial, do potencial da membrana mitocondrial, redução da geração de ROS intracelular e induz alterações morfológicas nas células. Dessa maneira, conclui-se que o sinergismo entre os LEDs 660 e 850 nm exerce efeito protetor contra a ação do H2O2 em células fibroblásticas L929, demonstrando que a FBM pode ser utilizada para auxiliar a prevenir e mitigar danos oxidativos.
Efeitos de altas concentrações de cortisol em culturas em monocamada e 3D de linhagens HEp-2 e L929
(2021-07-02) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Rodrigues, Paulo Roberto Grangeiro; Nicolau, Renata Amadei; Fonseca, Marcelo de Oliveira; São José dos Campos
Ao longo do século XX, o câncer se tornou uma das doenças mais letais entre as enfrentadas pela humanidade, levando anualmente centenas de milhares de pessoas à morte, mesmo com a franca evolução dos tratamentos e dos métodos diagnósticos. Frente a esse panorama, cada vez mais estudos relacionam a doença à influência de fatores emocionais, seja em sua gênese ou em seu prognóstico. O cortisol é descrito como o principal hormônio do estresse no corpo humano. Os corticoides podem aumentar a proliferação celular e as espécies reativas de oxigênio que contribuem para o dano ao DNA, e a exposição prolongada ao estresse pode contribuir para que os tecidos se tornem insensíveis ao cortisol. Este estudo explora a influência do cortisol no desenvolvimento de células tumorais, particularmente em células humanas de carcinoma da laringe humana (HEp-2). Para tanto, as células HEp-2 foram expostas a concentrações crescentes de cortisol (hidrocortisona) por 24 ou 48 horas, e o ensaio de proliferação de citotoxicidade (ensaio de MTT) (ensaio de cristal violeta) e cultura 3D imunomarcada para fibronectina e FAK foram realizados. O grupo tratado com hidrocortisona apresentou aumento significativo da atividade mitocondrial, enquanto o grupo tratado para avaliação pelo cristal violeta apresentou comportamento semelhante ao grupo de controle. O presente estudo concluiu também que a administração de hidrocortisona em esferóides tumorais de linhagem HEp-2 afetou a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente, sendo esse seu principal achado. Os resultados apresentados demonstram a influência de corticoides em células tumorais. Concluiu-se que a administração de hidrocortisona em esferoides tumorais de linhagem HEp-2 afeta a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente. Embora alguns casos tenham favorecido o uso de corticosteroides em pacientes com câncer, uma análise mais detalhada é necessária antes de prescrevê-los.
Eficácia da terapia fotodinâmica com ácido 5-aminolevulínico e metil 5-aminolevulinato no rejuvenescimento da pele utilizando Led âmbar e infravermelho
(2024-05-08) Ferreira-Strixino, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Canevari, Renata de Azevedo; Menezes, Priscila Fernanda Campos de; Pedroso, Juliana Teixeira; Pinto, Juliana Guerra; São José dos Campos
A pele é a principal barreira de defesa do organismo humano, atua na homeostase corporal, proteção contra microrganismos, substâncias e radiações, prevenção de perda excessiva de água, produção de vitamina D e influencia fatores psicossociais. O envelhecimento intrínseco da pele, pode acarretar a perda ou redução de muitas dessas funções, podendo ser ainda mais acentuado na pele fotoenvelhecida. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica não invasiva usada no tratamento de câncer, infecções microbianas, lesões pré-cancerosas e para fins estéticos da pele. Pesquisas sobre a atividade da TFD tópica sugerem efeitos antibacterianos, anti-inflamatórios e imunomoduladores em queranócitos, fibroblastos, glândulas sebáceas e folículos pilosos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi comparar a eficiência da TFD na redução dos sinais de fotoenvelhecimento, com ácido 5-aminolevulínico (ALA) e metil 5-aminolevulinato (MAL) a 2% e luz de LED âmbar (590 +/- 10 nm) e laser infravermelho (808 nm +/- 10 nm) associados em mulheres entre 40 e 55 anos. Além disso, objetiva-se identificar o tempo ótimo de incubação dos fármacos e quantificar a produção de protoporfirina IX (PpIX) e avaliar alterações nos sinais de fotoenvelhecimento após a TFD. As participantes recrutadas foram submetidas ao protocolo clínico por quatro sessões com intervalo de aproximadamente um mês. A análise de produção de PpIX foi realizada pela conversão de imagens do evidenciador Lince em histogramas de cor e a documentação fotográfica foi analisada qualitativamente quanto aos sinais de fotoenvelhecimento. A TFD se mostrou eficiente no rejuvenescimento facial, demonstrando redução de linhas finas, suavização de rugas, maciez e firmeza da pele e melhora da flacidez. Dentre os fármacos, o efeito maior de rejuvenescimento foi atribuído ao ALA, a concentração de 2% e a interação com os comprimentos de onda âmbar e infravermelho associados permitiram que tais resultados fossem atingidos com efeitos colaterais mínimos.

Navegando por Autor "Soares, Cristina Pacheco"

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