Navegando por Assunto "Engenharia Biomédica"
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Item Análise do potencial protetor da membrana amniótica em modelo experimental de desmielinização in vitro de fatias organotípicas de cérebro de camundongos(2025-02-28) Sant'Anna, Luciana Barros; Arisawa, Emília Angela Lo Schiavo; Silva, Tania Mara; Oliveira, Melissa Guimarães de; São José dos CamposA membrana amniótica (MA) é amplamente reconhecida por suas propriedades regenerativas, anti-inflamatórias e imunomoduladoras, sendo uma alternativa promissora no tratamento de doenças associadas à desmielinização, como a Esclerose Múltipla (EM). A desmielinização é caracterizada pela perda da mielina, estrutura responsável pela condução de impulsos nervosos, comprometendo a funcionalidade neuronal. Neste contexto, este estudo objetivou avaliar a eficácia da MA em proteger o tecido nervoso contra os efeitos desmielinizantes da lisolecitina, utilizando fatias organotípicas de cérebro de camundongos C57BL/6 como modelo experimental in vitro. Para isso, quatro grupos experimentais foram estabelecidos: Controle Sadio/C-S (fatias sadias); Desmielinização/C-DESM (fatias desmielinizadas pela aplicação de lisolecitina); Controle Membrana/C-MA (fatias sadias que receberam apenas MA); e Membrana Desafio Lisolecitina/MA-LISO (fatias que foram recobertas pela MA e submetidas à ação da lisolecitina). As análises incluíram colorações histológicas (Hematoxilina e Eosina, Luxol Fast Blue) para avaliação da integridade estrutural, teste metabólico com TTC para mensurar viabilidade celular, e MEV para avaliação da topografia de superfície tecidual. Os resultados demonstraram que a MA preservou a integridade da mielina e a arquitetura tecidual nas fatias desafiadas pela lisolecitina, enquanto as fatias do grupo C-DESM apresentaram microcavitações, desorganização da arquitetura histológica e perda da distinção entre substância branca e cinzenta. O ensaio TTC mostrou que as fatias protegidas pela MA mantiveram alta atividade metabólica, em contraste com a baixa atividade observada no grupo C-DESM. A análise por MEV reforçou a eficácia da MA, evidenciando a preservação da estrutura tecidual do parênquima cerebral, além de evidências de interação com o tecido que podem estar associados ao seu potencial bioativo. Essas propriedades incluem a modulação do microambiente neural e a liberação de fatores solúveis, que podem contribuir para a manutenção da viabilidade celular e integridade estrutural, mesmo em condições desafiadoras como a exposição à lisolecitina. Conclui-se que a MA atuou como barreira física eficaz contra a desmielinização induzida por lisolecitina, protegendo o tecido cerebral. Além disso, sugere-se que houve possível regeneração tecidual devido às suas propriedades bioativas, que devem ser mais investigadas para potencial aplicação no tratamento de doenças desmielinizantes, como a EM.Item Avaliação da ação antimicrobiana da água ativada por plasma sobre membrana amniótica(2023-03-07) Almeida, Felipe Santos de; Sant'Anna, Luciana Barros; Ferreira-Strixino, Juliana; Doria, Anelise Cristina Osório César; Pessoa, Rodrigo Sávio; São José dos CamposO potencial de utilização da Membrana Amniótica (MA) em diferentes aplicações tem sido amplamente estudado, e a necessidade de garantir a esterilidade desse material é essencial para o seu uso. Por causa do aumento da resistência bacteriana é importante a pesquisa de novas técnicas de esterilização, sendo o uso de água ativada por plasma (PAW) uma alternativa, que consiste em uma técnica onde se aplica o plasma elétrico na água a fim de funcionalizá-la, eliminando assim os pontos negativos do uso direto do plasma, como a temperatura. O objetivo do trabalho foi analisar a ação antimicrobiana da água de osmose reversa (OR) ativada por plasma, sobre Membrana Amniótica contaminada com cepa padrão ATCC® de Escherichia coli (25922), Klebsiella pneumoniae (13883), e Staphylococcus aureus (6538). A MA foi contaminada por um inóculo a 1x106 UFC/mL em salina, que ficou em contato por 3 min, após esse período a PAW foi colocada em contato com a MA por 90 min. Para a ativação da água foi utilizado o plasma, gliding arc de Argônio e ar comprimido com um tempo de ativação de 30 min, estudando a viabilidade celular após a exposição das amostras da Membrana Amniótica à ação da PAW. Os principais resultados obtidos foi a viabilidade celular de 11% com a PAW refrigerada e 15% com a PAW ambiente para a K. pneumoniae, 9% com a PAW refrigerada e 13% com a PAW ambiente para o S. aureus e 10% com a PAW refrigerada e 14% com a PAW ambiente para a E. coli, observando uma melhor ação antimicrobiana da PAW refrigerada. Foi observado uma maior redução das UFC quando utilizado a PAW refrigerada + MA e uma redução do pH de 7,04 para 3,41 da PAW refrigerada e uma redução de 7,05 para 3,61 com a PAW ambiente. A utilização da MA + PAW apresentou um melhor resultado do que utilizando apenas a PAW e a MA. Assim, conclui-se que as PAWs possuem uma ação antimicrobiana significativa, porém não o suficiente para realizar a esterilização da MA.Item Avaliação dos Efeitos da Fotobiomodulação com LEDs de Diferentes Comprimentos de Onda em Fibroblastos In Vitro(2025-11-26) Pinto, Juliana Guerra; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Soares, Cristina Pacheco; Nicolau, Renata Amadei; Santos, Emília Pio Ferrari dos; Ferreira, Juliana; São José dos CamposA fotobiomodulação (FBM) é uma terapia não invasiva que utiliza luz em diferentes comprimentos de onda para modular processos celulares e estimular a regeneração tecidual. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da irradiação com LED em fibroblastos L929 cultivados in vitro, empregando os comprimentos de onda de 420, 450, 530, 590 e 630 nm, todos aplicados com fluência padronizada de 5 J/cm². As análises incluíram viabilidade celular (azul de Trypan), atividade metabólica (ensaio de MTT), morfologia (Giemsa) e perfil bioquímico (FTIR-ATR), com tratamento estatístico por ANOVA/Tukey (p < 0,05). Os tempos de irradiação variaram conforme o diodo emissor: 420 nm (114 s; 43,7 mW/cm²), 450 nm (149 s; 33,6 mW/cm²), 530 nm (60 s; 83,3 mW/cm²), 590 nm (333 s; 15 mW/cm²) e 630 nm (129 s; 38,6 mW/cm²). Os resultados indicaram respostas distintas conforme o comprimento de onda. O LED de 420 nm reduziu discretamente a atividade metabólica sem comprometer a viabilidade; 450 nm manteve perfil semelhante ao controle, com alterações bioquímicas sutis; 530 nm promoveu aumento significativo da atividade metabólica e padrões compatíveis com estímulo ao reparo celular; 590 nm apresentou efeito inibitório; e 630 nm preservou a viabilidade, com indícios de incremento na síntese proteica. Conclui-se que a resposta dos fibroblastos à FBM é dependente do comprimento de onda e da parametrização utilizada, reforçando a importância da padronização dos parâmetros de irradiação para alcançar efeitos terapêuticos desejáveis sem comprometer a integridade celular. Os achados contribuem para o entendimento dos mecanismos celulares da fotobiomodulação e fornecem suporte para sua aplicação segura e eficaz em protocolos clínicos, especialmente na dermatologia regenerativa.Item Efeito sinérgico da fotobiomodulação com LED 660 E 850 nm em células L929 induzidas ao estresse oxidativo com peróxido de hidrogênio(2025-09-09) Soares, Luís Eduardo Silva; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Oliveira, Luciane Dias de; Segismondi, Larissa Cavallieri; Soares, Cristina Pacheco; São José dos CamposA pele está constantemente exposta a agressões externas, tornando-se um alvo para a geração excessiva de espécies reativas de oxigênio (ROS), que induzem danos oxidativos principalmente na região dérmica. A fotobiomodulação (FBM) mostra-se uma terapia eficiente para biomodulação de sistemas biológicos, capaz de modular processos oxidativos e inflamatórios. No presente estudo, buscou-se elucidar o possível efeito fotoprotetor in vitro da aplicação simultânea da FBM com LED 660 e 850 nm em células fibroblásticas L929 diante do tratamento com peróxido de hidrogênio como modelo de estresse oxidativo. Os fibroblastos foram pré-irradiados com LED e em seguida incubados com 200 µM de H2O2 diluído em meio de cultura pelo período de 3 horas. Após 24 horas dos tratamentos, foram observadas alterações quanto à atividade mitocondrial pelo ensaio colorimétrico Alamar Blue e quanto à morfologia celular por microscopia invertida. Também foi realizada a marcação de mitocôndrias e núcleos em células vivas por fluorescência utilizando Tetrametilrodamina (TMRM) e Tricloridrato de bisbenzimida (HOESCHT), além da detecção de ROS por fluorescência utilizando CellRox Orange. Os resultados obtidos indicam que o pré-tratamento com LED promove aumento da atividade mitocondrial, do potencial da membrana mitocondrial, redução da geração de ROS intracelular e induz alterações morfológicas nas células. Dessa maneira, conclui-se que o sinergismo entre os LEDs 660 e 850 nm exerce efeito protetor contra a ação do H2O2 em células fibroblásticas L929, demonstrando que a FBM pode ser utilizada para auxiliar a prevenir e mitigar danos oxidativos.Item Fotobiomodulação em células musculares e na articulação glenoumeral em simulação da puxada em técnicas de judô(2023-06-15) Lima, Elessandro Váguino de; Silva, Newton Soares da; Ferreira-Strixino, Juliana; Lima, Mário Oliveira; Franchini, Emerson; Ribeiro, Martha Simões; São José dos Campos,Pesquisas com fotobiomodulação tem apresentado resultados positivos no desempenho muscular, além de modular atividades a nível celular. Os objetivos da pesquisa foram: verificar o comportamento em células musculares C2C12, a partir da irradiaçao com LED; analisar o efeito da fotobiomodulação no torque e na fadiga muscular. Tanto as células musculares quanto o músculo deltoide, foram irradiados com LED Sportllux Advanced Pro, intercalados no comprimento de onda vermelho (660±20nm) infravermelho (850±20nm), simultaneamente. O tempo de exposição à irradiação foi de 600s. Para o ensaio de viabilidade as células foram incubadas com 100 ?L de soluomo de Cristal Violeta (CV); a atividade mitocondrial foi avaliada pelo ensaio colorimétrico MTT; o ensaio de fluorescência de núcleo (marcador DAPI) e citoesqueleto (marcador rodamina faloidina) foi realizado para estudar o citoesqueleto com base na alteração nos filamentos de actina. Os resultados da irradiação no estudo in vitro demonstraram: sinergismo da irradiação LED com indução na proliferação de células; efeito significativo (p<0,05) na cultura de células; aumento significativo (p<0,05) na atividade mitocondrial e viabilidade celular. A microscopia de fluorescência apresentou alinhamento dos componentes do citoesqueleto das células após a irradiação. Para analisar o desempenho muscular no estudo clínico, participaram 14 judocas masculinos. O protocolo consistiu em abdução e adução oblíquoa da articulação glenoumeral no dinamômetro isocinético. Os participantes realizaram 8 séries do movimento com a seguinte dinâmica: uma série de 5 repetições na velocidade angular de 90º/s; 4 séries de 10 repetições na velocidade angular de 240º/s; 3 séries de 5 repetições na velocidade angular de 90º/s. O intervalo de recuperação entre as 7 primeiras séries foi de 10s, e entre a 7ª e a 8ª série de 600s. Os participantes foram submetidos a três condições com intervalo de uma semana entre elas: sem aplicação de LED (No-LED), Grupo Controle; com aplicação de LED desligado (LED-Off), Grupo Placebo; com aplicação de LED ligado (LED-On), Grupo Irradiado. Os atletas foram avaliados quanto à percepção subjetiva de esforço após cada série do protocolo e antes do início da última série do protocolo, quanto à percepção subjetiva de recuperação. O atleta teve sua concentração de lactato dosada em 3 momentos: imediatamente, após 300s e após 600s do término da 7ª série do protocolo. Os resultados apontaram que houve instalação gradual de fadiga entre as séries em sequência, porém sem diferença significativa (p>0,05) entre os grupos com ou sem irradiação; houve aumento gradual da percepção de esforço com a dinâmica entre as séries, porém sem diferença significativa (p>0,05) nas condições com ou sem irradiação entre os grupos; a concentração de lactato aumentou após as 7 séries com relação aos valores de repouso, mas sem apresentar diferença significativa (p>0,05) entre os grupos controle, placebo ou irradiado. A conclusão foi de que houve influência no comportamento das células musculares C2C12 para o estudo in vitro; para o estudo clínico a fotobiomodulação pelo dispositivo LED não apresentou diferença significativa em nenhum dos parâmetros analisados.Item Seda de Aranha na Cultura 3D: Aplicação da Seda de Trichonephila clavipes como scaffold(2025-10-08) Soares, Cristina Pacheco; Raniero, Leandro José; Ferreira, Juliana; Ramos, Lucas de Paula; Aranha, Guilherme Dias; São José dos CamposOs fios de seda produzidos pelas aranhas são um material que apresenta propriedades únicas como alta elasticidade e resistência a tensão, super-contração, fluorescência, entre outras, sendo então uma fonte de inspiração para a área de pesquisa e desenvolvimento, servindo tanto como matéria prima para trabalhos com o material, como meta para trabalhos que buscam produzir materiais artificiais com propriedades análogas ou superiores. Uma espécie de aranha amplamente utilizada em estudos envolvendo seda é a Trichonephila clavipes, que tece grandes teias orbiculares que apresentam uma coloração dourada e foi escolhida como foco principal deste trabalho. O presente estudo buscou avaliar a utilidade da seda produzida por essas aranhas para aplicação na cultura 3D de células de fibroblasto de camundongo como scaffold natural. Oito espécimes foram coletados da natureza e mantidos em laboratório para obtenção dos fios de seda, que durante o período de manutenção das aranhas, apresentou mudança de coloração de dourado para branco. Foram realizadas análises dos fios por microscopia eletrônica de varredura, EDS, microscopia de fluorescência, DSC e TG para avaliar essa variação. Após isso, células L929 foram cultivadas em meio contendo a seda esfoliada, objetivando a formação de esferoides, que foram avaliados no período de 5 dias e 10 dias para observar o impacto dessa interação. As culturas foram observadas pelos mesmos métodos de microscopia anteriormente aplicados aos fios. Como resultados, foi observada uma afinidade das células com os fragmentos de seda presentes no meio de cultura, com o material não só tendo as células aderidas a ele, mas sendo englobado e até certo ponto sendo absorvido pelos esferoides. Os esferoides, além de se ancorarem a seda, também incorporaram fluoróforos presentes no material, apresentando fluorescência ao serem observados sob o microscópio de fluorescência. Conclui-se que a seda de T. clavipes apresenta potencial como scaffold para a cultura de células bem como capacidade fluorescente que deve ser aplicada dentro da área de cultura de células e na área de engenharia biomédica.Item Síntese e Caracterização de SPIONs@APTES Conjugados com Clorina E6 via Química Carbodiimida para Terapia Fotodinâmica(2025-09-22) Raniero, Leandro José; Soares, Cristina Pacheco; Liu, Andréa Santos; Gonçalves, Giulia Capizzani; São José dos CamposO câncer é uma das principais causas de morte no mundo e continua sendo um grande desafio para os sistemas de saúde, principalmente em países com poucos recursos. Os tratamentos tradicionais, como cirurgia, quimioterapia, radioterapia e terapia hormonal, ainda são amplamente utilizados, mas apresentam limitações importantes, como baixa seletividade e efeitos colaterais severos. Com os avanços no entendimento dos mecanismos do câncer, novas terapias mais específicas e menos agressivas estão sendo desenvolvidas destacando-se a Terapia Fotodinâmica (TFD). Apesar das vantagens, como menor toxicidade e maior precisão, a TFD ainda enfrenta problemas, principalmente relacionados à baixa solubilidade e instabilidade dos fotossensibilizadores. Para minimizar essas limitações, o uso de nanopartículas superparamagnéticas de óxido de ferro (SPIONs) têm se destacado por sua biocompatibilidade, estabilidade, baixo custo e possibilidade de serem modificadas para se ligarem a moléculas específicas. Uma estratégia promissora é a incorporação da Clorina E6 (Ce6) às SPIONs. A Ce6 tem alta eficácia e baixa toxicidade, mas sua baixa solubilidade compromete seu uso. Neste contexto, essa dissertação propõe a síntese e a caracterização de SPIONs pelo método de coprecipitação, a síntese e caracterização de nanossondas funcionalizadas com o fotossensibilizador Ce6 e sua aplicação na TFD. As dimensões das nanoestruturas foram caracterizadas por diâmetro hidrodinâmico, estabilidade coloidal e composição química. Posteriormente foram realizados estudos in vitro para avaliação da atividade antitumoral e toxicológica da TFD na linhagem celular de glioblastoma humano (M059J).Item Terapia fotodinâmica com curcumina nanoencapsulada como fotossensibilizador associada à tetraciclina na inativação do biofilme de staphylococcus aureus resistente à meticilina : estudo in vitro(2025-07-29) Ferreira, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Junqueira, Juliana Campos; Azevedo, Maria Clara Barbosa Silva de; Pinto, Juliana Guerra; São José dos CamposStaphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) é uma bactéria Gram-positiva que constitui um dos maiores desafios para a saúde pública global, sendo sua sobrevivência potencialmente aumentada pela formação de biofilme. Isso evidencia a urgência no desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas, como a Terapia Fotodinâmica (TFD). O objetivo do trabalho foi analisar o efeito antimicrobiano da TFD usando a curcumina nanoencapsulada em albumina sérica bovina (BSA), podendo estar associada à tetraciclina, em biofilme de MRSA. A NanoBSA nas formas catiônica e aniônica, foi avaliada nas concentrações de 3,0, 2,0 e 1,0 x 10?6 mol.L?¹, assim como sua associação com tetraciclina (30 µg.mL?¹). A irradiação foi realizada com luz LED azul (450 nm, 93,9 mW/cm², 50 J/cm², 532 segundos). A atividade metabólica foi significativamente reduzida tanto na TFD com antibióticos (ATB) quanto sem antibióticos, contudo, no ensaio de contagem de unidades formadoras de colônias, apenas os grupos tratados com TFD associada à tetraciclina apresentaram inibição do crescimento bacteriano. A concentração de 2,0 x 10?6 mol.L?¹ se destacou como a mais eficaz. A combinação de TFD com antibioticoterapia apresenta potencial terapêutico promissor no tratamento de infecções causadas por S. aureus resistente à meticilina.Item Tratamento de feridas experimentais com aplicação de curativos eletrofiados associados à nanopartículas de prata e plasma não térmico(2025-09-05) Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Sant'Anna, Luciana Barros; Lima, Mário Oliveira; Alves, Paulo Jorge Pereira; Contini, Rita de Cássia Mendonça Sales; Alves, Paulo Jorge Pereira; Pereira, Jonalba Mendes; Vieira, Lúcia; São José dos CamposFeridas são definidas como qualquer ruptura na integridade de um tecido que pode atingir a epiderme, a camada superficial, ou estruturas mais profundas, como fáscias, músculos, aponeuroses e órgãos cavitários. Curativos eletrofiados e plasma não térmico se destacam como novas abordagens no tratamento de feridas. Curativos eletrofiados, formados a partir de fibras poliméricas, promovem a regeneração celular, enquanto o plasma não térmico, gerado à temperatura ambiente, apresenta propriedades antimicrobianas e de modulação celular. Este estudo teve como objetivo avaliar o tratamento de feridas experimentais com curativos eletrofiados, isolados ou associados à nanopartículas de prata (Ag) e plasma não térmico (PNT). Trinta e seis ratos foram divididos em seis grupos: Controle (C), Álcool Polivinílico-Ácido Cítrico (PVA-CA), PVA-AC combinado com nanopartículas de prata (PVA-AC+AG), Plasma Não Térmico (PNT) e suas associações: PVA-CA + PNT e PVA-CA + Ag + PNT. Foram realizadas no dorso de cada animal três lesões de 1,9 cm de diâmetro, aos quais foram aplicados os protocolos de tratamento propostos. Análises macroscópicas e microscópicas aos 3, 7 e 14 dias avaliaram o processo de cicatrização. Todos os protocolos de tratamento foram mais eficazes que o grupo C (não tratado). Os melhores resultados das análises macroscópica e histológica foram observados com PNT associado ao curativo PVA-AC, mostrando redução significativa (p<0,05) no tamanho da ferida, aumento da deposição de colágeno e angiogênese e epitelização mais rápidas. O grupo tratado com PVA-AC associado a nanopartículas de prata obteve resultados menos evidentes, com redução da hidratação no processo de cicatrização comparado ao grupo PVA-AC+PNT. A redução da ferida no grupo C (89,7%) foi superada por todos os outros protocolos de tratamento: PVA-AC+PNT (96,6%); PVA-AC (95,9%), PVA-AC+Ag (95,1%) e PNT (91,3%). O estudo demonstrou que a associação de PNT com o curativo eletrofiado com PVA-AC favoreceu a cicatrização da ferida, destacando-se como alternativa promissora para o tratamento de feridas. Os resultados demonstram a eficácia da combinação PNT mais PVA-AC no processo de cicatrização.