Mecanismos de respostas na linhagem celular HEP-2 após tratamentos com terapia fotodinâmica e ciclofosfamida
| dc.contributor.advisor | Silva, Newton Soares da | |
| dc.contributor.author | Moraes, Carlos Dailton Guedes de Oliveira | |
| dc.contributor.coadvisor | Soares, Cristina Pacheco | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Ferreira, Juliana | |
| dc.contributor.referee | Milhan, Noala Vicensoto Moreira | |
| dc.date.accessioned | 2025-01-23T17:12:50Z | |
| dc.date.available | 2025-01-23T17:12:50Z | |
| dc.date.issued | 2020-03-31 | |
| dc.description.abstract | O câncer é a segunda doença mais letal no mundo, dentre eles pode ser destacado o câncer de laringe, visto que apresenta grande perspectiva de aumento para as próximas décadas. Deste modo são necessários estudos para o desenvolvimento de novas terapias, bem como a combinação de tratamentos já estabelecidos para melhor prognóstico dos pacientes. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta da célula tumoral submetidas à Terapia Fotodinâmica (TFD), Ciclofosfamida (CFM) e aos tratamentos associados. A CFM é um quimioterápico já estabelecido na rotina clínica, pelo seu caráter alquilante e ciclo regulador utilizado para remissão do tumor. A TFD é um tratamento promissor, visto que proporciona a formação de espécies reativas de oxigênio capazes de induzir a morte celular, por meio da interação entre um fotossensibilizante, luz visível em um comprimento de onda adequado ao fotossensibilizante e o oxigênio molecular. Neste trabalho foram utilizadas células de carcinoma epidermoide de laringe (HEp-2), que foram divididas em grupos (Controle +, LED, AlPcS4, LED + CFM, CFM, TFD, TFD + CFM, Morte), sendo avaliadas neste estudo pelos ensaios de Cristal Violeta, MTT e, imunomarcação para GRP-78. O fotossensibilizante alumínio ftalocianina tetrassulfonada (AlPcS4 na concentração de 5µM ), foi utilizado para a TFD, e após 1 hora de incubação as células foram irradiadas com LED Biopdi / Irrad-Led5 660 com 660 nm de comprimento de onda, potência por área de 25 mW/cm2, fluência de 5 J/cm2, por 3 minutos e 20 segundos. A CFM foi utilizada na concentração de 200 µg/mL. Após os tratamentos, nos tempos de incubação de 24, 48 e 72 horas, foi possível verificar redução da densidade celular, pelo cristal violeta, dos grupos CFM, TFD e TFD + CFM em comparação ao Grupo Controle +. Ademais, observamos redução na atividade mitocondrial, pelo teste de MTT, nos grupos TFD e TFD + CFM em relação ao Grupo Controle + nos três períodos analisados. O grupo CFM, por outro lado, apresentou aumento na atividade mitocondrial em relação ao Grupo Controle + nos períodos 24 h e 48 h. O grupo CFM, no período de 72 h, não apresentou diferença estatística quando comparado ao Grupo Controle +. Além disso, pode ser verificado por imunomarcação a presença da proteína de choque térmico GRP-78 nos grupos CFM, TFD e TFD + CFM, já o Grupo Controle + foi negativo para esta imunomarcação. Assim, podemos concluir que os tratamentos tanto com a CFM, quanto com a TFD provocaram dano celular. Embora não apresente melhor eficiência na redução da densidade celular, o tratamento TFD + CFM foi mais promissor, visto que inibe a CFM inibe a proliferação celular de possíveis células sobreviventes a TFD. | |
| dc.description.abstract2 | Cancer is the second most lethal disease in the world; among which laryngeal cancer can be highlighted since it has a great prospect of increase for the next decades. Thus, studies for the development of new therapies are required, as well as studies evaluating the association of pre-existing treatments. .The aim of this study was to evaluate the tumor cell response mechanisms under treatments with Photodynamic Therapy (PDT), Cyclophosphamide (CY) and an association of them. CY is a chemotherapy drug already established in the clinical routine, due to its alkylating character and regulatory cycle used for tumor remission. The PDT is a promising treatment, since it provides the formation of reactive oxygen species capable of inducing cell death, through the interaction between a photosensitizer, visible light at an wavelength suitable for the photosensitizer and molecular oxygen. In this work, cells of laryngeal squamous cell carcinoma (HEp-2) were used, which were divided into groups (Control, LED, AlPcS4, LED + CY, CY, PDT, PDT + CY, Death), being evaluated by Violet Cristal test, MTT test and immunostaining to GRP-78. The photosensitizer tetrasulfonated aluminum phthalocyanine (AlPcS4) was used for PDT, and after 1 hour of interaction the cultures were irradiated with Biopdi / Irrad-Led5 660 LEDs with 660 nm wavelengths, light intensity delivered 25 mW/cm², fluency of 5 J/cm², for 3 minutes and 20 seconds. CY was used at a concentration of 200 µg/mL for 24 h, 48 h, 72 h. It was possible to verify a reduction of cell density by the Violet Crystal test in CY, PDT and PDT + CY groups compared to control group, after 24 h, 48 h and 72 h. In addition, a decrease in mitochondrial activity was observed by MTT test in PDT and PDT + CY groups compared to control group in the three analyzed periods. Differently, CY group showed an increase in mitochondrial activity compared to control group 24 h and 48 h after the treatment. After 72 h, CY group showed no statistical difference compared to control group. Furthermore, the presence of the heat shock protein GRP-78 could be verified by immunolabeling in CY, PDT and PDT+CY groups, whereas the control group was negative to this immunolabeling. Thus, we can conclude that both treatments CY and PDT caused cellular damage. Although it does not show better efficiency in reducing cell density, the TFD + CFM treatment was more promising, since it inhibits CFM and inhibits cell proliferation of possible TFD surviving cells. | |
| dc.description.physical | 61 f. | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | MORAES, Carlos Dailton Guedes de Oliveira. Mecanismos de respostas na linhagem celular HEP-2 após tratamentos com terapia fotodinâmica e ciclofosfamida. São José dos Campos, 2020. 61 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2020. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/511 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | UNIVAP | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | Mestrado em Engenharia Biomédica | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Terapia Fotodinâmica | |
| dc.subject.keyword | Ciclofosfamida | |
| dc.subject.keyword | Densidade celular | |
| dc.title | Mecanismos de respostas na linhagem celular HEP-2 após tratamentos com terapia fotodinâmica e ciclofosfamida | |
| dc.title.alternative | Mechanisms of Response to HEp-2 Cell Line After Treatments with Photodynamic Therapy and Cyclophosphamide | |
| dc.type | Dissertação | |
| dc.type.masterDegree | Acadêmico |