Aplicação das técnicas de PCR, micronúcleo e espectroscopia FT-IR no diagnóstico do HPV na prevenção do câncer cervical
| dc.contributor.advisor | Canevari, Renata de Azevedo | |
| dc.contributor.author | Viana, Magda Rogéria Pereira | |
| dc.contributor.coadvisor | Raniero, Leandro José | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Soares, Luís Eduardo Silva | |
| dc.contributor.referee | Castilho, Maiara Lima | |
| dc.contributor.referee | Batista, Nelson Jorge Carvalho | |
| dc.contributor.referee | Koga-ito, Cristiane Yumi | |
| dc.date.accessioned | 2025-01-27T14:42:30Z | |
| dc.date.available | 2025-01-27T14:42:30Z | |
| dc.date.issued | 2020-02-28 | |
| dc.description.abstract | O câncer de colo de útero é considerado o terceiro tumor mais frequente e a segunda causa de mortalidade de mulheres no Brasil, sendo considerado um problema de saúde pública. A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é um dos principais fatores de risco que contribui para o desenvolvimento desta neoplasia. O principal método para o diagnóstico é a análise citológica pelo exame de Papanicolaou, mas a alta taxa de casos falso-negativos inviabiliza uma avaliação adequada, sendo importante o uso de técnicas auxiliares de detecção do HPV e, consequentemente, no diagnóstico desta doença. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia, aplicabilidade, sensibilidade e especificidade dos métodos alternativos para a detecção do HPV na prevenção do câncer cervical. As técnicas MN e FT-IR são indiretas, mas podem fornecer resultados úteis na detecção do HPV em pacientes submetidas ao exame citopatológico. As amostras de fluido cervical foram obtidas de 50 pacientes com citológica normal, posteriormente analisada pela PCR, teste de MN e análise de FT-IR. A análise molecular consistiu de extração do DNA das amostras endocervicais pelo protocolo QIAamp® Virus Spin kit (Qiagen), seguida da realização da PCR do gene viral L1 utilizandose os iniciadores MY09 e MY11. As amostras foram divididas com base nos resultados da PCR em dois grupos, HPV positivo (sete amostras) e HPV negativo (43 amostras). As análises dos testes de MN das amostras ectocervicais foram realizadas pelas leituras das frequências absoluta (N) e relativa (%), obtidas as médias, desvios padrões e analisadas pelos testes Shapiro-Wilk, Mann-Whitney e Qui-quadrado (X2). As análises de FT-IR das amostras endocervicais foram realizadas no equipamento Spectrum 400. A partir da matriz de covariância foram obtidos os componentes principais (PCs), e por meio das análises discriminantes linear e quadrática, supervisionada pelos resultados da PCR (grupos HPVpositivo e HPV negativo), foram calculados os valores de sensibilidade e especificidade. Os resultados das análises de PCR das 50 amostras permitiram validar 43 exames citológicos, mas sete amostras de resultado citológico negativo estavam infectadas pelo HPV. Os testes de MN mostraram maiores frequências de MN em amostras com HPV positivo, fatores relacionados a idade, ao abortamento e o uso de bebidas alcoólicas. Os espectros de análise FT-IR mostraram variações nas bandas de DNA e proteínas em amostras com alta frequência de MN, provavelmente devido à presença de histonas nucleossômicas e DNA que formam o MN. A análise dos componentes principais dos espectros de FT-IR não foi capaz de separar eficientemente as amostras HPV positivas das HPV negativas, mostrando-se inespecífico para diagnosticar o vírus. Assim, com a realização do estudo observou-se que a técnica de PCR pode ser considerada padrão ouro para a detecção do HPV por sua alta sensibilidade, que o aumento da frequência de MN observado neste estudo em amostras infectadas pelo HPV, pode ser devido à instabilidade genômica, causada pela presença do vírus, e que, apesar da espectroscopia FT-IR apresentar grande potencial, por ser um teste de alta sensibilidade e especificidade no rastreamento do câncer cervical, neste estudo não demonstrou ser eficiente na discriminação de amostras infectadas pelo HPV. Dessa forma, enfatiza-se que, estudos adicionais devem ser conduzidos para a aplicação da espectroscopia FT-IR e o teste de MN no diagnóstico da infecção pelo HPV e consequente aplicação na prevenção de câncer cervical. | |
| dc.description.abstract2 | Cervical cancer is considered the third most frequent tumor and the second leading cause of mortality in women in Brazil, being considered a public health problem. Human Papillomavirus (HPV) infection is one of the main risk factors that contribute to the development of this neoplasm. The main method for diagnosis is cytological analysis by Pap smear, but the high rate of false-negative cases makes an adequate evaluation impossible, being important the use of auxiliary techniques for hpv detection and, consequently, disease diagnosis. This study aimed to evaluate the efficacy, applicability, sensitivity and specificity of alternative methods for hpv detection in the prevention of cervical cancer. The MN and FTIR techniques are indirect, but can provide useful results in the detection of HPV in patients undergoing cytopathological examination. The cervical fluid samples were obtained from 50 patients with normal cytology, later analyzed by PCR, MN test and FT-IR analysis. Molecular analysis consisted of DNA extraction from endocervical samples using the QIAamp® Virus Spin kit (Qiagen) protocol, followed by PCR of the viral L1 gene using the MY09 and MY11 primers. The samples were divided based on the PCR results into two groups, HPV positive (seven samples) and HPV negative (43 samples). The analyzes of the MN tests of the ectocervical samples were performed by reading the absolute (N) and relative (%) frequencies, obtaining the means, standard deviations and analyzed by the Shapiro-Wilk, Mann-Whitney and Chi-square tests (X2). FT-IR analyses of endocervical samples were performed in spectrum 400 equipment. From the covariance matrix, the main components (PCs) were obtained, and through linear and quadratic discriminant analyses, supervised by PCR results (positive and negative HPV groups), sensitivity and specificity values were calculated. The results of the PCR analysis of the 50 samples allowed to validate 43 exams, but seven samples of negative result were infected with HPV. MN tests showed higher frequencies of NM in samples with positive HPV, factors related to age, abortion and alcohol use. The FT-IR analysis spectra showed variations in DNA and protein bands in samples with high Frequency of MN, probably due to the presence of nucleosomal histones and DNA that form the MN. The analysis of the main components of the FT-IR spectra was not able to efficiently separate positive HPV samples from negative HPV, showing to be non specific to diagnose the virus. Thus, with the accomplishment of the study, it was observed that the PCR technique can be considered the gold standard for HPV detection due to its high sensitivity, that the increased frequency of NM observed in this study in HPV-infected samples may be due to genomic instability caused by the presence of the virus, and that, although FT-IR spectroscopy has great potential, as it is a test of high sensitivity and specificity in cervical cancer screening, in this study it did not prove to be efficient in discriminating hpv-infected samples. Therefore, it is emphasized that additional studies should be conducted for the application of FT-IR spectroscopy and the MN test in the diagnosis of HPV infection and consequent application in the prevention of cervical cancer. | |
| dc.description.physical | 84 f. | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Centro Universitário UNINOVAFAPI | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | VIANA, Magda Rogéria Pereira. Aplicação das técnicas de PCR, micronúcleo e espectroscopia FT-IR no diagnóstico do HPV na prevenção do câncer cervical. São José dos Campos, 2020. 84 f. Tese (Doutorado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2020. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/521 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | UNIVAP | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | doutorado em Engenharia Biomédica | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Espectroscopia FT-IR | |
| dc.subject.keyword | Teste molecular | |
| dc.subject.keyword | Papilomavírus | |
| dc.subject.keyword | Teste de Micronúcleo | |
| dc.title | Aplicação das técnicas de PCR, micronúcleo e espectroscopia FT-IR no diagnóstico do HPV na prevenção do câncer cervical | |
| dc.title.alternative | Application of PCR, micronucleus and FT-IR spectroscopy techniques in HPV diagnosis in the prevention of cervical cancer | |
| dc.type | Tese |