Quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em aorta de Chelonoidis Carbonaria (in vitro)

O endotélio vascular é descrito como uma monocamada de células finas, que revestem o luminal de todos os vasos sanguíneos, e que desempenha função determinante no controle da homeostase vascular, agindo na regulação de sinais intracelulares, permeabilidade, tônus vascular, cascata de coagulação, angiogênese, entre outras funções. Recentemente, foi relatado que o endotélio de vasos umbilicais humanos é capaz de liberar dopamina, um mediador na reatividade vascular. A 6- nitrodopamina faz parte da família das 6-nitrocatecolaminas, sendo um produto putativo da nitração dependente do oxido nítrico com dopamina, atraindo, com isso, relevância em estudos nos últimos anos. Este estudo teve como objetivo descrever, pela primeira vez, o desenvolvimento e validação de um método específico e sensível para quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit em aortas de Chelonoidis carbonaria por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem (LC-MS / MS). Os anéis aórticos de Chelonoidis carbonária com endotélio intacto e sem endotélio (15 mm, N = 6) foram incubados por 30 min em 5 mL de banho de órgão contendo solução de Krebs-Henseleit. Alíquotas de 1 mL do sobrenadante foram utilizadas para a extração em fase sólida da 6-nitrodopamina. A separação da 6-nitrodopamina foi obtida em uma coluna Shim-pack GIST-HP C18 de 150 mm x 3,0 mm e a detecção foi realizada por um espectrômetro de massas equipado com uma interface de eletrospray operando em modo de íon positivo. Os resultados obtidos, demonstraram sensibilidade, precisão e exatidão suficientes para sua aplicação na medida da liberação basal de 6-nitrodopamina em aorta de Chelonoidis carbonaria in vitro. O tempo de corrida foi de 3,5 min e a curva de calibração foi linear na faixa de 0,1 - 20,0 ng/mL. As concentrações médias ± erro padrão da média da 6- nitrodopamina liberada da aorta com endotélio intacto e sem endotélio foram 0,44 ± 0,06 ng/mL e 0,18 ± 0,05 ng/mL, respectivamente. Estes resultados indicam que a aorta da Chelonoidis carbonaria exibe uma liberação de 6-nitrodopamina basal derivada do endotélio basal.