Quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em aorta de Chelonoidis Carbonaria (in vitro)
| dc.contributor.advisor | Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes | |
| dc.contributor.author | Pinheiro, David Halen Araújo | |
| dc.contributor.event2 | São José dos Campos | |
| dc.contributor.referee | Lima, Mário Oliveira | |
| dc.contributor.referee | Marcos, Rodrigo Labat | |
| dc.date.accessioned | 2024-12-09T17:49:36Z | |
| dc.date.available | 2024-12-09T17:49:36Z | |
| dc.date.issued | 2021-08-23 | |
| dc.description.abstract | O endotélio vascular é descrito como uma monocamada de células finas, que revestem o luminal de todos os vasos sanguíneos, e que desempenha função determinante no controle da homeostase vascular, agindo na regulação de sinais intracelulares, permeabilidade, tônus vascular, cascata de coagulação, angiogênese, entre outras funções. Recentemente, foi relatado que o endotélio de vasos umbilicais humanos é capaz de liberar dopamina, um mediador na reatividade vascular. A 6- nitrodopamina faz parte da família das 6-nitrocatecolaminas, sendo um produto putativo da nitração dependente do oxido nítrico com dopamina, atraindo, com isso, relevância em estudos nos últimos anos. Este estudo teve como objetivo descrever, pela primeira vez, o desenvolvimento e validação de um método específico e sensível para quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit em aortas de Chelonoidis carbonaria por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem (LC-MS / MS). Os anéis aórticos de Chelonoidis carbonária com endotélio intacto e sem endotélio (15 mm, N = 6) foram incubados por 30 min em 5 mL de banho de órgão contendo solução de Krebs-Henseleit. Alíquotas de 1 mL do sobrenadante foram utilizadas para a extração em fase sólida da 6-nitrodopamina. A separação da 6-nitrodopamina foi obtida em uma coluna Shim-pack GIST-HP C18 de 150 mm x 3,0 mm e a detecção foi realizada por um espectrômetro de massas equipado com uma interface de eletrospray operando em modo de íon positivo. Os resultados obtidos, demonstraram sensibilidade, precisão e exatidão suficientes para sua aplicação na medida da liberação basal de 6-nitrodopamina em aorta de Chelonoidis carbonaria in vitro. O tempo de corrida foi de 3,5 min e a curva de calibração foi linear na faixa de 0,1 - 20,0 ng/mL. As concentrações médias ± erro padrão da média da 6- nitrodopamina liberada da aorta com endotélio intacto e sem endotélio foram 0,44 ± 0,06 ng/mL e 0,18 ± 0,05 ng/mL, respectivamente. Estes resultados indicam que a aorta da Chelonoidis carbonaria exibe uma liberação de 6-nitrodopamina basal derivada do endotélio basal. | |
| dc.description.abstract2 | The vascular endothelium is described as a monolayer of thin cells, which line the luminal of all blood vessels, and which plays a determining role in the control of vascular homeostasis, acting in the regulation of intracellular signals, permeability, vascular tone, coagulation cascade, angiogenesis, and among other functions. Recently, it has been reported that human umbilical vessel endothelium is a basal dopamine releaser, this substance being a mediator in vascular reactivity. 6-nitrodopamine is part of the family of 6-nitrocatecholamines, being a putative product of nitric oxide-dependent nitration with dopamine, with this, it has proved a study in recent years. The objective of this study was to define, for the first time, the development and validation of a specific and sensitive method for quantification of 6-nitrodopamine in Krebs-Henseleit solution in Chelonoidis carbonaria aortas by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC- MS / MS). Chelonoidis carbonaria’s endothelium-intact and endothelium-denuded aortic rings (15 mm, N = 6) were incubated for 30 min in 5 mL organ bath containing Krebs-Henseleit’s solution. Aliquots of 1 mL of the supernatant were used to extract 6-nitrodopamine by solid phase extraction (SPE). The separation of 6-nitrodopamine was obtained on a 150 mm x 3.0 mm Shim-pack GIST-HP C18 column and the detection was performed by a mass spectrometer equipped with an electrospray interface operating in positive ion mode. The run time was 3.5 min and the calibration curve was linear over the range 0.1 - 20.0 ng/mL. The method showed sensitivity, precision and accuracy enough for its application in the measurement of the basal release of 6-nitrodopamine from Chelonoidis carbonaria aortae in vitro. The mean ± standard error of the mean concentrations of 6-nitrodopamine released from endothelium-intact and endothelium-denuded aortae were 0.44 ± 0.06 ng/mL and 0.18 ± 0.05 ng/mL, respectively. These results indicate that tortoise’s aortae display a basal endothelium-derived 6-nitrodopamine release. | |
| dc.description.physical | 66 f. | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.format.mimetype | ||
| dc.identifier.affiliation | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.identifier.bibliographicCitation2 | PINHEIRO, David Halen Araújo. Quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em aorta de Chelonoidis Carbonaria (in vitro). São José dos Campos, 2021. 66 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) - Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2021. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.univap.br/handle/123456789/462 | |
| dc.language.iso | pt_BR | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.initials | UNIVAP | |
| dc.publisher.institution | Universidade do Vale do Paraíba | |
| dc.publisher.program | Mestrado em Engenharia Biomédica | |
| dc.publisher.spatial | São José dos Campos | |
| dc.subject.keyword | Espectrometria de massa | |
| dc.subject.keyword | Endotélio vascular | |
| dc.subject.keyword | Chelonoidis carbonária | |
| dc.title | Quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em aorta de Chelonoidis Carbonaria (in vitro) | |
| dc.title.alternative | Quantification of 6-nitrodopamine in Krebs-Henseleit's solution by liquid chromatography coupled to aorta mass spectrometry of Chelonoidis carbonaria (in vitro) | |
| dc.type | Dissertação | |
| dc.type.masterDegree | Acadêmico |