Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica

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Análise termográfica do fibro-edema gelóide (FEG) após a irradiação com laser
(2021) Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; Marques, Ricardo Henrique; Lima, Mário Oliveira; Barbosa, Elaine da Silva; Lima, Fernanda Pupio Silva; São José dos Campos
Na busca pela beleza e estética o cuidar da pele é muito importante, visto ser o maior órgão do corpo. Nos últimos anos a estética desenvolveu novos métodos, que associam técnicas manuais, cosmetologia e tecnologia para a busca do“corpo perfeito”,da pele lisa, sem irregularidades e discromias. Entre as alterações consideradas inestéticas, a celulite é a que mais incomoda as mulheres. Na tentativa de esclarecer o termo “celulite”, ou Fibro-edema Gelóide (FEG) alguns autores iniciaram estudos sobre a pele humana e o tecido subcutâneo. Por meio da biópsia (até a fáscia lata) das coxas e nádegas, observaram o tecido subcutâneo da região é composto por três camadas de gordura com dois planos de tecido conjuntivo entre eles. Além das alterações histológicas, a FEG apresenta também disfunções multifatoriais, com presença de alterações vasculares, inflamatórias, hormonais e estruturais. No dia a dia clínico, o diagnóstico é baseado na história do paciente, exame clínico, mas avaliações mais detalhadas podem ser realizadas como biopsias, exames de imagens termográficas e vasculares, entre outros. A Termografia Infravermelha Computadorizada (TIC), técnica não invasiva e não radioativa, avalia funções fisiológicas envolvidas no controle da temperatura da pele. A tecnologia registra apenas a radiação natural emitida pelo corpo, sem apresentar nenhum efeito ionizante ou prejudicial, sendo perfeitamente seguro para uso clínico. A Terapia de fotobiomodulação utilizando lasers e LEDs tem sido utilizada para o tratamento do FEG. Laser e LEDs de baixa intensidade são utilizados, e demonstram razoável efetividade. No entanto, a questão da penetração da luz em tecidos mais profundos sempre é uma pergunta a ser respondida. Desta forma, os Lasers Classe IV surgem como uma nova opção de tratamento para disfunções estéticas como o FEG. Diversos autores questionam o uso desta tecnologia, tendo em vista a ausência de estudos de segurança térmica para o paciente. Para responder a essa questão, este estudo propõe avaliar os efeitos térmicos do laser Classe IV na região de latero-posterior de coxa, além de diferenciar áreas com e sem FEG, comparando perfil térmico entre homens e mulheres. O resultado deste estudo permite concluir que a TIC é uma ferramenta útil para diagnosticar o FEG. Além disso, evidencia as diferenças clássicas já descritas entre homens e mulheres quanto ao padrão termográfico. Especialmente, respondendo a questão inicialmente formulada, demonstramos que o laser Classe IV, quando aplicado em modo varredura é uma tecnologia totalmente segura e não causa qualquer aquecimento significativo em homens e mulheres, na região do quadril.
Síntese de nanopartícula de ácido poliláctico (PLA) por dupla emulsificação para aplicação em fotoprocessos
(2021-04-05) Simioni, Andreza Ribeiro; Costa, Maricília Silva; Vieira, Lúcia; Liu, Andréa Santos; Oliveira Junior, Benedito Marcio de; Ferreira, Juliana; São José dos Campos
A Terapia Fotodinâmica (TFD) é proposta como um procedimento terapêutico promissor minimamente invasivo que emprega três elementos essenciais para induzir a morte celular: um fotossensibilizador, luz de um comprimento de onda específico e oxigênio molecular. Os fotossensibilizadores clássicos usados no protocolo de TFD apresentam algumas desvantagens que limitam sua aplicação clínica, como a baixa solubilidade em meio aquoso. O uso da nanotecnologia tem sido considerado, uma vez que fornece muitas ferramentas que podem ser aplicadas à TFD para contornar essas limitações e trazer novas perspectivas para a aplicação desta terapia para diferentes tipos de doenças. Neste trabalho, nanopartículas de poli (ácido lático) (PLA) foram desenvolvidas para encapsular a zinco ftalocianina (ZnPc), um fotossensibilizador hidrofóbico, utilizado em TFD. O método de emulsificação dupla foi aplicado para produzir nanopartículas de NPLA-ZnPc que foram caracterizadas por medidas de estado estacionário, tamanho de partícula, potencial zeta, espalhamento dinâmico de luz, morfologia, eficiência de carregamento e liberação de fármaco. Na sequência, estudos in vitro foram realizados com e sem luz, conforme descrito pelos protocolos de TFD, utilizando células de gliossarcoma (9 L/LacZ) como modelo biológico, para avaliar o fotodano do fotossensibilizador quando incorporado na formulação polimérica. O tamanho médio das nanopartículas apresentadas foi de 384,7 ± 84,2 nm, com índice de polidispersidade (PDI) de 0,150 ± 0,015 nm, e a eficiência de encapsulação foi de 83%. As formulações de nanopartículas apresentaram valores de potencial zeta negativos (- 27,5 ± 1,0 mV), explicando sua estabilidade coloidal. Os parâmetros fotofísicos característicos foram analisados: o perfil do espectro de absorção mostra que o fotossensibilizador carregado nas nanopartículas não sofre alteração em suas propriedades fotofísicas após o processo de encapsulamento. Um perfil de liberação sustentada ao longo de 168 h foi obtido, com um perfil de liberação de ZnPc bifásico. Um efeito fototóxico in vitro na faixa de 80% foi observado em células de gliossarcoma 9 L/LacZ em doses de luz laser (10 J.cm-2) com 3,0 µg.mL-1 de ZnPc. A ZnPc carregada nas nanopartículas poliméricas apresentou estabilidade física adequada, boas propriedades fotofísicas, perfil de liberação sustentada e atividade in vitro adequada para ser considerada uma formulação promissora para TFD. Com base nos resultados obtidos, é esperado que a utilização de nanopartículas de PLA encapsuladas com ZnPc possa ser um adjuvante promissor no tratamento de neoplasias baseadas na aplicação de protocolos utilizando TFD, sendo que este modelo de sistema de liberação para aplicações em TFD visa contribuir para o aprimoramento tecnológico e científico do país em área inovadora e com potencial elevado de impacto social.
Efeitos da plataforma vibratória no equilíbrio, atividade eletromiográfica e propriocepção de idosos
(2021-04-07) Lima, Fernanda Pupio Silva; Mendes, Alessandro Corrêa; Silva, Janaína de Moraes; Souza, Juliana de Oliveira; São José dos Campos
O envelhecimento pode ser acompanhado por alterações no sistema muscular, somatossensorial e de controle postural, podendo ocasionar o aumento do risco de quedas entre os idosos. As quedas podem causar limitações funcionais, perda da independência e óbito nesta faixa etária. Um dos recursos utilizados na reabilitação desta população é o treinamento sensório-motor. Novas modalidades deste treinamento mostram-se promissoras, como a Vibração de Corpo Inteiro (VCI). Este estudo teve como objetivo avaliar e comparar os efeitos de um treinamento sensório-motor em idosos, sobre uma plataforma vibratória e em superfície estável. Trata-se do estudo de 3 casos de idosos, de ambos os gêneros, na faixa etária entre 61 e 66 anos. Após distribuição aleatória por sorteio, a participante 1 realizou o treinamento sensório-motor sobre a plataforma vibratória e os participantes 2 e 3 no solo. As avaliações foram realizadas antes, após um dia de tratamento e após cinco sessões diárias de 4 séries de 60 segundos em apoio unipodal sobre a plataforma vibratória ou no solo. O equilíbrio foi avaliado pela Escala de Equilíbrio de Berg (EEB) e a atividade eletromiográfica e propriocepção do membro inferior não dominante através da Eletromiografia de Superfície e Dinamometria Isocinética, respectivamente. Os participantes 1 e 2 atingiram o mesmo score na EEB após um dia de tratamento. Após os cinco dias de intervenção, somente a participante 1 apresentou melhora no desempenho. Com relação à participante 3, observa-se que houve aumento do score após um dia de tratamento e que este se manteve após os cinco dias. A participante 1 apresentou aumento da atividade elétrica de todos os músculos avaliados. Em relação à participante 2, verificou-se aumento da atividade elétrica dos músculos fibular longo, vasto medial e glúteo médio. O músculo gastrocnêmio medial apresentou redução da atividade elétrica após um dia de tratamento e aumento após os cinco dias. Quanto à participante 3, observou-se redução da atividade elétrica dos músculos fibular longo e gastrocnêmio medial. O músculo vasto medial se destacou ao apresentar aumento da atividade elétrica em todas as avaliações. Quanto ao glúteo médio, verificou-se redução da atividade elétrica após um dia de tratamento e aumento após os cinco dias. Em relação à propriocepção, para o ângulo de 60° de extensão do joelho, os participantes 1 e 2 apresentaram aumento dos erros nas tentativas de percepção do senso de posição articular após um dia de tratamento e diminuição após os cinco dias. Para o ângulo de 30°, a participante 1 teve redução dos erros após um dia de tratamento e após os cinco dias, enquanto o participante 2 apresentou redução dos erros somente após o fim do tratamento. A participante 3 apresentou redução dos erros em todas as avaliações para 60° e 30° de extensão do joelho. À medida que se conhece mais sobre os efeitos da VCI, é possível utilizá-la na área biomédica para beneficiar pacientes com diferentes necessidades. Verificou-se neste estudo que ambos os tratamentos foram benéficos para os idosos.
Avaliação de parâmetros fisiológicos em crianças com transtorno do espectro autista pré e após musicoterapia
(2021-04-09) Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Lima, Fernanda Pupio Silva; Sant'Anna, Luciana Barros; Gouveia, Márcia Teles de; Fernandes, Márcia Astrês; Magalhães, Juliana Macêdo; São José dos Campos
Transtorno do Espectro Autista(TEA)é uma alteração do desenvolvimento neurológico, caracterizado por dificuldades de comunicação, interação social e pela presença de comportamentos e/ou interesses repetitivos ou restritos. Dada a complexidade deste transtorno, foram desenvolvidas diversas abordagens, visando melhorar a vida das pessoas com TEA, incluindo intervenções de musicoterapia. A produção científica destaca a eficácia da musicoterapia em diferentes práticas clínicas, no entanto a análise dessa modalidade terapêutica é pouco explorada nessas crianças. Nesse sentido, o objetivo principal deste estudo foi avaliar a influência da musicoterapia improvisacional sobre os parâmetros fisiológicos de crianças diagnosticadas com Transtorno do Espectro Autista. Trata-se de estudo experimental clínico randomizado, desenvolvido no nordeste do Brasil. Foram incluídas no estudo crianças autistas que apresentavam escore 30-36 pontos da escala de avaliação do autismo infantil. A partir dos critérios de inclusão, as crianças foram alocadas em dois grupos por meio do programa Random Allocation Software, estando pré-determinado que os quatro primeiros nomes fictícios integrariam o grupo controle e os demais comporiam o grupo de musicoterapia. Sete crianças com transtorno do espectro autista foram avaliadas, distribuídas em três grupos com intervenção de musicoterapia e quatro no grupo controle. Os dados foram coletados nos meses de fevereiro a março de 2020 e analisados utilizando testes de Mann-Whitneye Wilcoxon. As crianças que participaram da musicoterapia apresentaram redução de 3,7% na saturação de O2. É comum a dificuldade de respirar profundamente em portadores de TEA. Além disso, crianças que realizaram musicoterapia apresentaram aumento médio de 5,0 bpm na frequência cardíaca comparado a ausência de variação nas crianças do grupo controle. Em geral, indivíduos com TEA possuem frequência cardíaca reduzida comparadas aos neurotípicos, possivelmente devido a um déficit no sistema límbico. Portanto, os resultados do presente estudo são importantes, considerando que os sinais vitais sofrem variação ao longo do dia e a musicoterapia pode ter influenciado esse índice pelo aspecto emocional. Em relação à pressão arterial, observou-se redução da sistólica e manutenção da diastólica no grupo musicoterapia, enquanto as crianças sem intervenção mantiveram a pressão sistólica e aumentaram a diastólica. Denota-se, aqui, o potencial que a musicoterapia improvisacional apresenta em influenciar e produzir alterações no corpo humano. Conclui-se que os efeitos da musicoterapia nos parâmetros fisiológicos foram indicativos de respostas satisfatórias para as crianças com TEA.
Efeito da fotobiomodulação com laser de baixa intensidade na fadiga muscular de bíceps braquial: análise por termografia infravermelha e dinamometria
(2021-05-03) Lima, Mário Oliveira; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Mendes, Alessandro Corrêa; Marcos, Rodrigo Labat; Cogo, José Carlos; Stamborowski, Sadi Fernando; Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; São José dos Campos
A fadiga muscular(FM)é ocasionada por meio de alterações bioquímicas que modificam a mecânica da contração muscular, as quais resultam em alterações negativas na performance da contração. Diversos recursos são estudados com o intuito de atenuar este quadro, dentre eles pode-se citar a fotobiomodulação. Neste contexto, a termografia infravermelha é aplicada em esportes sob a justificativa de que as mudanças na temperatura da pele podem se correlacionar com processos inflamatórios ou com a FM.Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da fotobiomodulação na fadiga e na temperatura do músculo bíceps braquial.Para tal,foi realizado um estudo cruzado, na qual 14 voluntários do gênero masculino com idade entre 20 e 30 anos passaram pelos seguintes grupos: Controle, Placebo e Laser (PBMT). Para a indução da FMforam realizadas três Contrações Isométricas Voluntárias Máximas(CIVM) com duração de 50 segundos e intervalo de 50 segundos, utilizando um dinamômetro computadorizado. Durante a contração isométrica voluntária máxima foram avaliadosa força muscular e a temperatura por infravermelho aos 0, 5, 10 e 15 minutos após os testes. Foi possível observar, através de uma câmera termográfica as variações de temperaturas cutâneas, sendo queo grupo Laser apresentou queda menos acentuada da força muscular, evidenciando menor índice de fadiga muscular (p>0,05) em relação aos demais grupos. Na análise da temperatura o grupo Controle apresentou a maior média de temperatura, apresentando diferença significativa apenas para o Placebo. Os resultados sugerem que o grupo Controle apresentou o maior degaste físico, uma vez que houve uma elevação estatisticamente relevante em relação à temperatura basal. Já o grupo Laser apresentou efeito positivo na atenuação da FM e na termorregulação corporal, pois ocorreu um platô de valores térmicos nos períodos seguintes à FM.Salienta-se ainda que a variação de força nos instantes iniciais e finais, quando avaliados intergrupos, apresentaram resultados estatisticamente relevantes entre o grupo controle e laser.No presente estudo, podemos concluir o seguinte: A PBMT aplicada no músculo bíceps braquial de indivíduos hígidos, durante a realização de protocolos de fadiga, promoveu a atenuação da FM; A análise da força muscular demonstrou que os voluntários irradiados apesentaram menor variação durante os protocolos testados, sugerindo otimização do desempenho muscular; A PBMT contribuiu para a melhora da termorregulação corporal, avaliado pela termografia infravermelha, durante os protocolos de FM.
Efeito da fotobiomodulação na fadiga muscular de bíceps braquial em indivíduos espásticos
(2021-05-06) Lima, Mário Oliveira; Simioni, Andreza Ribeiro; Lucareli, Paulo Roberto Garcia; Spinelli, Bruna Moreira de Oliveira; Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; São José dos Campos
A espasticidade pode ser desencadeada pelo Acidente Vascular Encefálico (AVE), doença que acomete o sistema nervoso central (SNC). As alterações neuromusculares e bioquímicas geradas pela espasticidade tornam o músculo mais propenso à fadiga. Isso influencia negativamente nas atividades de vida diária e na qualidade de vida do paciente. Pesquisas tem utilizado a fotobiomodulação como recurso para melhorar a performance muscular, no entanto, pouco se sabe sobre seu efeito na fadiga muscular espástica. Desse modo, o objetivo desse trabalho é avaliar a atividade mioelétrica e a força isométrica máxima do músculo bíceps braquial espástico após a aplicação da fotobiomodulação, além de avaliar a intensidade dolorosa e a intensidade de esforço antes, logo após o protocolo de força, e depois de 24 horas e 48 horas. Trata-se de um estudo clínico, cego, cruzado, randomizado, no qual foram selecionados 7 indivíduos que apresentavam espasticidade em membro superior, com idade média de 51±14,16 anos. Os voluntários foram divididos em 3 grupos: controle, fotobiomodulação (PBMT) e placebo; de forma que todos compuseram em algum momento todos os grupos. Foi aplicado a PBMT (diodo laser, 808nm, 100mW, 3J/ponto, 9 pontos) no músculo bíceps braquial antes do protocolo de força. O protocolo consistiu em 3 contrações voluntárias máxima isométrica (CVMI) de bíceps braquial por 50 segundos seguido de 50 segundos de repouso a cada contração. Durante a CVMI, foi mensurada a força e sinal eletromiográfico. Foi observado aumento da força (p = 0,0025) e da atividade elétrica muscular (p = 1,91-6) no PBMT, porém o valor da frequência média da eletromiografia se mostrou superior no grupo placebo (p = 1,91-5). A avaliação da dor mostrou que apenas o grupo PBMT apresentou dor imediata em repouso e em movimento (p ? 0,05), não houve realce da dor após 24 e 48 horas para ambos os grupos. Segundo a avaliação de esforço, ambos os grupos não apresentaram exaustão (p ? 0,05). Com esses achados pode-se concluir que a fotobiomodulação contribuiu para o aumento da força e da ativação elétrica muscular, também desencadeou maior sensação dolorosa no grupo PBMT.
Compósito de nanomateriais para enxerto ósseo
(2021-05-06) Raniero, Leandro José; Castilho, Maiara Lima; Vasconcellos, Luana Marotta Reis de; Liu, Andréa Santos; Santos, Andréa Fernanda Lopes dos; Oliveira, Ivone Regina de; São José dos Campos
Pesquisas tem sido desenvolvida na área de engenharia biomédica com objetivo de sintetizar um biomaterial satisfatório para favorecer o reparo ósseo. O cimento de aluminato de cálcio homogêneo (CACH) é um biomaterial extensamente utilizado devido as suas propriedades mecânicas, físicas e de biocompatibilidade devido às suas características particulares como composição semelhante ao corpo humano, alta biocompatibilidade além de promover osteointegração e osteocondução. Porém, a nanotecnologia aplicada em materiais pode promover avanços científicos, proporcionando aplicações associadas a benefícios que levem ao aumento da qualidade de vida, destacando-se o uso de nanopartículas devido a sua versatilidade na área biomédica. O objetivo desta tese foi produzir e caracterizar nanocompósitos à base de CACH associado a nanopartículas de ouro (CACH+AuNPs) e prata (CACH+AgNPs), visando a aplicação no reparo ósseo. As amostras dos nanocompósitos foram avaliadas quanto as suas propriedades mecânicas, determinando a densidade real, resistência à compressão uniaxial, a resistência mecânica à flexão, microdureza e a distribuição do tamanho de poros, como também morfologia e a bioatividade dos nanocompósitos. Os resultados apontaram um aumento da resistência mecânica à flexão para CACH+AuNPs quando comparado ao CACH, e ambos os nanocompósitos apresentaram bioatividade adequada. As citotoxicidade dos nanocompósitos em relação ao CACH também foram avaliadas, por meio das alterações das atividades mitocondrial testadas em cultura de células da linhagem MG-63. Os resultados promissores dos testes in vitro levou a aplicação in vivo, quando a neoformação óssea foi quantificada por meio de testes em 16 ratos Wistar, os defeitos localizados no fêmur dos animais foram preenchidos com CACH e os nanocompósitos, sendo a referência o defeito com coagulo. O estudo mostrou que não houve benefício na associação do CACH às AgNPs quando comparado ao CACH. Os resultados apontam que o nanocompósito CACH+AuNPs tem potencial de aplicação clínica, melhorando o desempenho do material e aumentando a biocompatibilidade, sendo promissor no tratamento visando o reparo ósseo.
Desenvolvimento de biomaterial à base de Acmella Oleracea (L.) R. K. Jansen com atividades cicatrizante, antibacteriana e antitumoral
(2021-05-25) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Perazzo, Fabio Ferreira; Silva, Carlos Augusto Priante da; Menegon, Renato Farina; São José dos Campos
Acmella oleracea popularmente conhecida como jambu, é utilizada na medicina alternativa e culinária popular do Brasil e diversos outros países, tendo diversos metabólitos secundários associados à sua bioatividade, como compostos fenólicos e flavonoides. Estas atividades incluem sua capacidade anestésica, antibacteriana e cicatrizante. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver uma membrana de quitosana a base do extrato foliar de A. oleracea para aplicação médica em feridas superficiais, avaliando sua capacidade antibacteriana, cicatrizante e antitumoral, para indicação no tratamento de câncer epidermóide. O extrato metanolico utilizado foi obtido por maceração assistida por ultrassom e em seguida fracionado com os solventes Acetato de etila e Butanol. A atividade cicatrizante e tóxica das amostras (Extrato bruto, Fração Butanol e Fração Acetato de etila) assim como o biomaterial (Membrana de quitosana, Membrana de quitosana associada ao extrato bruto e Membrana de quitosana associada a fração butanol) foram avaliadas através da capacidade proliferativa em linhagem L929 (fibroblasto de camundongo) e HEp-2 (Carcinoma de laringe humana) por fechamento de ferida in vitro e ensaios de citotoxicidade (Cristal violeta e MTT), além de genotoxicidade por teste de micronúcleo. A ação antibacteriana dos extratos e membrana em cepas Staphylococos aureus e Escherichia coli, foi avaliada pela densidade celular e formação unidades formadoras de colônias a partir do contato com o biomaterial. Estes testes mostraram a capacidade do material de aumentar a proliferação celular e atividade mitocondrial e não levar à formação de micronúcleos em linhagem L929 pela fração butanol, não observado o mesmo na fração acetato de etila e extrato bruto, havendo queda da viabilidade neste último. A atividade antitumoral avaliada pelos mesmos testes em linhagem HEp-2 (Câncer de laringe humano) determinou a capacidade citotóxica da fração butanol ao reduzir a densidade celular e atividade mitocondrial, o que também foi observado na fração acetato de etila e extrato bruto principalmente na maior concentração testada de 1000 µg/mL, não havendo o fechamento da ferida in vitro. Teste de citotoxicidade com microrganismos determinaram a capacidade dos extratos e frações em evitar infecções oportunistas que forem infligidas por S. aureus, sendo todas as amostras eficientes em reduzir o número de bactérias. A fração butanol apresentou um maior rendimento, melhor atividade proliferativa e cicatrizante, não genotóxica e antibacteriana para a cepa S. aureus quando comparado ao extrato bruto e fração Acetato de etila. Ao avaliar a ação das membranas por citotoxicidade indireta observa-se o aumento da densidade celular em células L929 quando incubadas com a membrana associada ao extrato bruto em 48 h de incubação e ação citotóxica do biomaterial associado a fração butanol frente ao teste de cristal violeta, porém havendo aumento da atividade mitocondrial em todos os grupos. Em contrapartida há redução na densidade celular do biomaterial contendo extrato bruto em células HEp-2 e baixa da atividade mitocondrial para a célula em todos os grupos. Apenas a membrana com extrato bruto apresentou atividade antibacteriana com redução no número de células e sem nenhuma unidade de colônia formada. Sendo a única membrana também a permanecer liberando seus compostos após 48h de degradação enquanto outras degradaram em 24h, além de não apresentarem formação de poros visto por microscopia eletrônica de varredura. O biomaterial contendo o extrato bruto foi apontado como a mais viável a compor uma membrana que servirá como biomaterial liberador para atuar em casos de feridas cutâneas, induzindo a cicatrização, matando células tumorais testadas e evitando a infecção local.
Terapia a laser de baixa intensidade e membrana amniótica humana aplicadas em modelo experimental de queimadura
(2021-06-09) Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Sant'Anna, Luciana Barros; Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; Gouveia, Márcia Teles de; Alves, Paulo Jorge Pereira; Amorim, Fernanda Cláudia Miranda; São José dos Campos
Lesões decorrentes de queimaduras demandam tratamentos complexos, exigem assistência especializada e são responsáveis por altas taxas de morbimortalidade, configurando-se como problema de saúde pública no Brasil e no mundo. As queimaduras de espessura parcial por agentes térmicos são as que ocorrem em maior frequência na população e seu tratamento acarreta custos elevados. Nesse sentido, terapias reconstrutivas, de fácil aplicabilidade, seguras e que considerem custo/efetividade têm sido testadas, tais como a Terapia a Laser de Baixa Intensidade (TBLI) e a aplicação de Membrana Amniótica Humana (MAh), que têm se destacado no contexto da medicina regenerativa. O estudo objetivou avaliar o processo de reparo tecidual em queimaduras experimentais de espessura parcial superficial após aplicação da TLBI e MAh, isoladamente e em associação. A amostra foi composta por quarenta e oito ratos machos Wistar submetidos à queimadura de espessura parcial superficial, randomizados em quatro grupos: Controle (C)- não recebeu tratamento; Membrana Amniótica Humana (MAh)- aplicação de fragmento de MAh; Laser de Baixa Intensidade (TLBI)- irradiados com TLBI; Laser de Baixa Intensidade + Membrana Amniótica Humana (TLBI+MAh) – associação das terapias. Foram avaliadas as características histológicas e morfométricas das amostras de pele aos 7º e 14º dias e os resultados foram analisados pelos testes Kolmogorov-Smirnov, Mann Whitney e Kruskal-Wallis test com pós de Dunn's Multiple Comparison Test (p<0,05). A análise histológica mostrou redução no processo inflamatório (p <0,0001) e aumento na proliferação de fibroblastos (p <0,0001), principalmente aos 7 dias, nos grupos que sofreram intervenção comparados ao grupo C. Aos 14 dias, no grupo TLBI+MAh foram observadas espessas e alinhadas fibras de colágeno, demonstrando aceleração do processo cicatricial (p<0,0001). A fotobiomodulação com TLBI agiu sinergicamente com a aplicação tópica da MAh constituindo o protocolo terapêutico mais eficaz para tratamento de queimaduras de espessura parcial superficial utilizado na presente pesquisa. A combinação entre as terapias potencializou os efeitos anti-inflamatórios e de estímulo à proliferação celular, acelerando o processo de reparo tecidual.
Estudo do efeito do composto p,p'-Methoxi-disseleneto de difenila (MeOPhSe)2 sobre Candida Krusei
(2021-06-21) Costa, Maricília Silva; Simioni, Andreza Ribeiro; Ferreira, Juliana; Silva Júnior, José Antônio; Siqueira, Victor Mendes de; Silva, Carlos Alberto; São José dos Campos
A Candida krusei é uma espécie do gênero Candida que possui resistência intrínseca a antifúngicos comumente utilizados para a profilaxia e tratamento de infecções fúngicas, principalmente da classe dos azóis, como o fluconazol. Embora a C. krusei apresente uma baixa incidência, de aproximadamente 4 % dos casos em pacientes com doenças hematológicas, por conta de sua resistência aos tratamentos convencionais, o quadro clínico do paciente costuma rapidamente se agravar. O presente estudo teve como objetivo estudar o efeito do composto organocalcogênio p,p’-Methoxi-disseleneto de difenila (MeOPhSe)2 sobre C. krusei. Foram realizados ensaios para a determinação do efeito do composto sobre o crescimento celular, a cinética de crescimento, a formação de biofilme e a adesão de C. krusei em células HeLa. Ainda, foi avaliada a toxicidade do composto (MeOPhSe)2, tanto em células HeLa, como em células Vero. Foi observada uma inibição de mais de 95% do crescimento de C. krusei na presença do composto (MeOPhSe)2. O composto foi capaz de reduzir a formação de biofilmes em torno de 76% e alterar a curva de crescimento de C. krusei, prolongando a fase de latência (LAG) e reduzindo o número de células viáveis. Ainda, foi observada uma diminuição da capacidade de adesão de C. krusei em células HeLa, sendo que em concentrações de até 10 µmol.L-1 o composto não apresentou efeito citotóxico, tanto em células Hela, como em células Vero. Estes resultados demonstram o potencial do composto (MeOPhSe)2 como uma promissora terapia antifúngica.
Efeitos de altas concentrações de cortisol em culturas em monocamada e 3D de linhagens HEp-2 e L929
(2021-07-02) Soares, Cristina Pacheco; Castilho, Maiara Lima; Silva, Newton Soares da; Rodrigues, Paulo Roberto Grangeiro; Nicolau, Renata Amadei; Fonseca, Marcelo de Oliveira; São José dos Campos
Ao longo do século XX, o câncer se tornou uma das doenças mais letais entre as enfrentadas pela humanidade, levando anualmente centenas de milhares de pessoas à morte, mesmo com a franca evolução dos tratamentos e dos métodos diagnósticos. Frente a esse panorama, cada vez mais estudos relacionam a doença à influência de fatores emocionais, seja em sua gênese ou em seu prognóstico. O cortisol é descrito como o principal hormônio do estresse no corpo humano. Os corticoides podem aumentar a proliferação celular e as espécies reativas de oxigênio que contribuem para o dano ao DNA, e a exposição prolongada ao estresse pode contribuir para que os tecidos se tornem insensíveis ao cortisol. Este estudo explora a influência do cortisol no desenvolvimento de células tumorais, particularmente em células humanas de carcinoma da laringe humana (HEp-2). Para tanto, as células HEp-2 foram expostas a concentrações crescentes de cortisol (hidrocortisona) por 24 ou 48 horas, e o ensaio de proliferação de citotoxicidade (ensaio de MTT) (ensaio de cristal violeta) e cultura 3D imunomarcada para fibronectina e FAK foram realizados. O grupo tratado com hidrocortisona apresentou aumento significativo da atividade mitocondrial, enquanto o grupo tratado para avaliação pelo cristal violeta apresentou comportamento semelhante ao grupo de controle. O presente estudo concluiu também que a administração de hidrocortisona em esferóides tumorais de linhagem HEp-2 afetou a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente, sendo esse seu principal achado. Os resultados apresentados demonstram a influência de corticoides em células tumorais. Concluiu-se que a administração de hidrocortisona em esferoides tumorais de linhagem HEp-2 afeta a estabilidade da matriz extracelular, o que sugere uma possível relação entre a substância e uma maior chance de metastização, caso o ambiente tumoral adequado esteja presente. Embora alguns casos tenham favorecido o uso de corticosteroides em pacientes com câncer, uma análise mais detalhada é necessária antes de prescrevê-los.
Produção e caracterização de revestimentos à base de carbono em cerâmica e aço visando aplicações biomédicas
(2021-08-06) Vieira, Lúcia; Silva, Newton Soares da; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Radi, Polyana Alves; Martins, Gislene Valdete; Vieira, Angela Aparecida; São José dos Campos
A expectativa de vida vem aumentando ao longo dos anos devido ao avanço da medicina, assim o número de idosos vem crescendo, e consequentemente vem aumentando as preocupações com as doenças relacionadas com a idade, como osteoporose, artrose, bradicardia, problemas bucais e entre outros. Dessa forma, a procura por implantes ósseos e dentários vem aumentando bem como o desenvolvimento de novos materiais para serem usados como matéria prima para novos implantes tais como: cerâmica, metais e polímeros. Porém alguns desses materiais tem um custo elevado e outros podem causar problemas a longo prazo como por exemplo, a metalose. A metalose consiste em uma degradação do material quando exposto ao fluído corpóreo e é uma das causas responsáveis por quase todas as cirurgias de substituição de prótese. Esta degradação consiste no desprendimento de íons metálicos da prótese e no acúmulo desses íons sobre os tecidos moles do corpo, levando a uma necrose do tecido ou a um crescimento tumoral. Portanto, são apresentados neste trabalho algumas considerações importantes para obtenção e caracterização de filmes e revestimentos de alótropos de carbono. Estes materiais podem ser utilizados como filme ou revestimento para a proteção de materiais implantáveis, bem como para aumentar a vida útil dos implantes. Para este estudo foram produzidos e caracterizados alótropos de carbono na forma de filmes e revestimentos de carbono. Foram produzidos filmes de DLC depositados à plasma utilizando reator “Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition” (PECVD) e magnetron sputtering em cerâmica MgAl2O4. Foram depositados também, revestimentos de carbono contendo fases de grafite microcristalino via laser cladding em SS316L. Foram realizadas teste biológicos, caracterização mecânica e microestrutural dos filmes obtidos. Os resultados demonstraram a formação de filme de DLC via PECVD em cerâmica com e sem prata sendo melhor probabilidade estatística do filme de DLC+Ag para aplicação biomédica. No revestimento obtido por laser cladding em amostra SS316L foi observada a formação fases de grafite microcristalino e aumento da resistência mecânica do material com o revestimento e melhor probabilidade estatística de osseointegração com a incorporação de TiO2. Com as caracterizações e teste biológico foi possível selecionar o filme e revestimento com melhor probabilidade estatística para aplicação biomédica.
Quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em aorta de Chelonoidis Carbonaria (in vitro)
(2021-08-23) Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; Lima, Mário Oliveira; Marcos, Rodrigo Labat; Pinheiro, David Halen Araújo; São José dos Campos
O endotélio vascular é descrito como uma monocamada de células finas, que revestem o luminal de todos os vasos sanguíneos, e que desempenha função determinante no controle da homeostase vascular, agindo na regulação de sinais intracelulares, permeabilidade, tônus vascular, cascata de coagulação, angiogênese, entre outras funções. Recentemente, foi relatado que o endotélio de vasos umbilicais humanos é capaz de liberar dopamina, um mediador na reatividade vascular. A 6- nitrodopamina faz parte da família das 6-nitrocatecolaminas, sendo um produto putativo da nitração dependente do oxido nítrico com dopamina, atraindo, com isso, relevância em estudos nos últimos anos. Este estudo teve como objetivo descrever, pela primeira vez, o desenvolvimento e validação de um método específico e sensível para quantificação da 6-nitrodopamina em solução de Krebs-Henseleit em aortas de Chelonoidis carbonaria por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem (LC-MS / MS). Os anéis aórticos de Chelonoidis carbonária com endotélio intacto e sem endotélio (15 mm, N = 6) foram incubados por 30 min em 5 mL de banho de órgão contendo solução de Krebs-Henseleit. Alíquotas de 1 mL do sobrenadante foram utilizadas para a extração em fase sólida da 6-nitrodopamina. A separação da 6-nitrodopamina foi obtida em uma coluna Shim-pack GIST-HP C18 de 150 mm x 3,0 mm e a detecção foi realizada por um espectrômetro de massas equipado com uma interface de eletrospray operando em modo de íon positivo. Os resultados obtidos, demonstraram sensibilidade, precisão e exatidão suficientes para sua aplicação na medida da liberação basal de 6-nitrodopamina em aorta de Chelonoidis carbonaria in vitro. O tempo de corrida foi de 3,5 min e a curva de calibração foi linear na faixa de 0,1 - 20,0 ng/mL. As concentrações médias ± erro padrão da média da 6- nitrodopamina liberada da aorta com endotélio intacto e sem endotélio foram 0,44 ± 0,06 ng/mL e 0,18 ± 0,05 ng/mL, respectivamente. Estes resultados indicam que a aorta da Chelonoidis carbonaria exibe uma liberação de 6-nitrodopamina basal derivada do endotélio basal.
Efeito da terapia fotodinâmica seriada com curcumina em promastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania amazonenses
(2021-08-30) Ferreira, Juliana; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Silva, Newton Soares da; Oliveira, Luciane Dias de; Maciel, Lucas Tobias Rodrigues; São José dos Campos
A Terapia Fotodinâmica (TFD) consiste na utilização de uma fonte de luz e um fármaco fotossensível em comprimento de onda adequado e oxigênio molecular desencadeando a morte celular por meio da formação de espécies reativas de oxigênio. Por se tratar de uma terapia utilizada de forma localizada, a TFD mostra-se ideal para doenças cutâneas. A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma protozoose de elevada prevalência mundial que apresenta diferentes evoluções clínicas podendo resultar em ulcerações e lesões desfigurativas em pele e cartilagens. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito in vitro da TFD de forma seriada com duas aplicações utilizando curcumina como fotossensibilizador. Para isto, utilizou-se a concentração de 125 µg.mL-1 de curcumina em cepas de Leishmania braziliensis e Leishmania amazonensis, com fluência de luz de 10J.cm -2e irradiância de 110 mW.cm-2. Os testes realizados foram a análise da viabilidade, pelo teste de exclusão com Azul de Tripan, análise da internalização do FS por Microscopia confocal e as alterações morfológicas, por coloração de Giemsa/MayGrunwald. Observou-se que houve internalização do FS antes da primeira e segunda aplicação de TFD, com mortalidade de 92% e 82% das cepas de L.braziliensis e L. amazonensis, respectivamente, após a segunda aplicação, e indução de alterações na conformação estrutural, como tamanho da célula e não evidenciação de núcleo e flagelo, demonstrando-se que a TFD foi efetiva. Conclui-se que a TFD seriada apresentou-se efetiva na indução de mortalidade in vitro de formas promastigotas de L. braziliensis e L. amazonensis destacando-se assim o seu potencial para tratamento da leishmaniose.
Produção de filmes finos via ALD, PECVD e Sputtering visando aplicações biomédicas
(2021-08-30) Vieira, Lúcia; Ramirez Ramos, Marco Antonio; Soares, Cristina Pacheco; Machado, João Paulo Barros; Contini, Rita de Cássia Mendonça Sales; Fukumasu, Newton Kiyoshi; Silva, Michely Glenda Pereira da; São José dos Campos
À medida que a Doença do Vírus Corona 2019 (COVID-19) se dissemina pelos pulmões, os pacientes evoluem para uma síndrome respiratória aguda grave (SRAG), com isso tornando se imprescindível a realização de uma intubação orotraqueal (IOT) associada a Ventilação Mecânica (VM). Para a utilização da VM é necessário um dispositivo introduzido no paciente para acoplar ao ventilador, podendo ser um tubo endotraqueal (artefatos de poli cloreto de vinila (PVC) ou poliuretano (PU)). Estes artefatos ao mesmo tempo que dão suporte a vida no processo de ventilação pulmonar, podem carregar microrganismos para os pulmões. Assim posto, objetivou-se neste trabalho de tese, produzir e analisar comparativamente três tipos de filmes finos objetivando produzir uma superfície mais propicia ao controle de microrganismos. Os substratos utilizados foram os tubos endotraqueais utilizados nos processos de intubação (PU e PVC) e os filmes estudados foram: filme de carbono tipo-diamante (Diamond-like carbon, DLC) com e sem prata (Ag) obtido Deposição Química na Fase Vapor Assistida por Plasma (PECVD); filmes finos de carbono micro cristalino (µC) com e sem Ag obtidos via Magnetron Sputtering e também filmes finos de dióxido de titânio (TiO2) na fase anatase obtidos via Deposição por Camada Atômica (ALD). Os resultados de espectroscopia Raman mostraram que foram obtidos os filmes de DLC sobre PVC com as bandas características em posições próximas ao valor teórico, sendo banda D 1346,3 e banda G 1516.7 cm-1. A análise derelevância estatística da ação bacteriana dos filmes de DLC sobre PVC com prata, apresentou uma discreta redução das Unidades Formadoras de colônias (UFC) para cepa de S. aureus, em relação ao controle e ao grupo PVC DLC. Os espectros FTIR-ATR mostraram a manutenção da estrutura química do substrato de PU e PVC com as ligações químicas características para este material. As análises de espectroscopia Raman, dos filmes de carbono produzidos indicam que os filmes de µC apresentam formação de um filme semelhante ao de a-C:H com anéis micro grafíticos e fases amorfas, indicados pela razão entre as áreas das bandas ID/IG. Já a açãobacteriana dos filmes de µC em PU com Ag apresentou uma redução das UFC em relação ao controle, e apresentou redução estatística significante com *p<0.0001 entre o grupo µC com e sem prata e o PU puro. Ao final foi possível concluir o êxito na produção de filmes de DLC; µC e TiO2, aderentes em PU e PVC pelas técnicas estudadas. As análises microbiológicas foram realizadas em função das UFC nos substratos com e sem filme e pode ser concluído que os filmes produzidos e os resultados estatísticos apresentados com *p<0.0001 podem ser utilizados como alternativas antifúngicas para aplicações biomédicas, assim como para o desenvolvimento de superfícies melhoradas de PU e PVC.
Efeito do laser de baixa potência associado a um programa de fortalecimento dos músculos do assoalho pélvico em voluntárias com incontinência urinária por esforço
(2021-08-31) Lima, Fernanda Pupio Silva; Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Carvalho, Regiane Albertini de; Silva, Aline Lanziloti da; Martins, Rodrigo Álvaro Brandão Lopes; São José dos Campos
As disfunções do assoalho pélvico feminino têm grande impacto na qualidade de vida da mulher em todas as áreas, social, psicológica e sexual. Entre tantas disfunções que são classificadas, a incontinência urinária por esforço é a condição clínica em que a mulher perde urina involuntariamente aos esforços, como tossir e espirrar, entre outros, causando grande constrangimento e afetando a qualidade de vida da mesma. Os tratamentos fisioterapêuticos encontrados na literatura se mostram eficazes, e como o assoalho pélvico é um conjunto de músculos, a fadiga muscular se faz presente na realização dos exercícios, no entanto, não existe na literatura o uso da fotobiomodulação de baixa intensidade na incontinência urinária. Esse estudo teve como objetivo avaliar o efeito da fotobiomodulação de baixa intensidade associado a protocolo de exercícios de fortalecimento dos músculos do assoalho pélvico de mulheres com incontinência urinária por esforço, para evitar a fadiga muscular. Foi utilizado o aparelho laser de baixa intensidade infravermelho (808 nm, DMC Equipamentos –Brasil), potência de 100 mW com os parâmetros: 3 Joules de densidade de energia e fluência de 124 J cm². A aplicação foi realizada em 3 pontos no introito vaginal (lateral esquerda e direita; parede posterior) e em outros 3 pontos dentro da cavidade do canal vaginal (lateral esquerda e direita; parede posterior). Participaram do estudo 22 voluntárias divididas em dois grupos: Grupo 1 (laserterapia + fortalecimento) e Grupo 2 (laser placebo + fortalecimento). Considerando p <0,05, foram obtidos os seguintes resultados: no escore da qualidade de vida do Grupo 1, na avaliação (11,63±4,33) e na reavaliação (7,81±5,14), e no Grupo 2 (12,54±4,71 antes X 7,18±3,35 depois). Houve um aumento significativo da força muscular no Grupo 1 (8,36±6,65 antes X 13,81±8,92 depois) representado no Biofeedback em comparação ao Grupo 2 (16,90±15,64 antes X 15,54±9,09 depois). Com relação ao power do Grupo 1 dos músculos do assoalho pélvico (3,45±1,07 antes X 4,27±0,61 depois), e Grupo 2 (3,72±1,65 antes X 4,45±0,98 depois). No endurance, do Grupo 1 (3,90±2,35 antes X 5±1,90 depois) foi observado aumento significativo comparado ao Grupo 2 (3,90±3,08 antes X 6,36±3,52 depois), demonstrando o ganho da resistência nos músculos perineais. O tratamento de fotobiomodulação de baixa intensidade mostrou significativa eficácia em relação à fadiga dos músculos do AP após aplicação de um programa de fortalecimento em mulheres com incontinência urinária por esforço.
Detector ionizográfico para diagnóstico de câncer de mama
(2021-09-03) Ramirez Ramos, Marco Antonio; Vieira, Lúcia; Mendes, Alessandro Corrêa; Bernal, Julian Andres Salamanca; Araújo, Harilton da Silva; Matos, Helton Gírio; São José dos Campos
A cada dia aumenta a quantidade de vítimas do câncer. Só no ano de 2020 acometeu 626.030 pessoas no Brasil, segundo estimativas do Instituto Nacional do Câncer (INCA). A única forma para a diminuição desses números é o diagnóstico precoce. No presente estudo é caracterizado um invento chamado Detector Ionizográfico, que realiza Tomografia por Emissão de Pósitrons (PET) produzindo informações metabólicas. Possibilita diagnóstico preciso do câncer de mama quanto a sua malignidade. Para comprovar sua efetividade, foi feita uma avaliação comparativa entre o Detector Ionizográfico e o Tomografia por Emissão de Pósitrons/Tomografia Computadorizada (PET/CT) para análise de dados metabólicos. A pesquisa foi realizada com 3 pacientes que apresentaram câncer de mama documentado por histopatológico. A partir dos resultados foi possível comprovar a eficiência do aparelho. Possibilitando assim, uma opção de diagnóstico de malignidade preciso e de baixo custo. Seguindo a tendência, o Detector Ionizográfico pode ser hibridizado com alguma tecnologia de imagens anatômicas, como o Ultrassom (US). Com isso é possível promover maior acesso a diagnósticos precisos, aumentando sensivelmente a possibilidade de diagnósticos precoces, viabilizando a cura ou melhor estadia do paciente.
Plasma não térmico aplicado no tratamento de feridas em pé diabético
(2021-09-09) Arisawa, Emília Angela Loschiavo; Sant'Anna, Luciana Barros; Alves Junior, Clodomiro; Cardoso, Juliana Cunha; Vieira, Lúcia; São José dos Campos
Diabetes mellitus (DM) está entre as doenças não transmissíveis mais comuns em adultos de todo o mundo. Apresenta alto risco para complicações na saúde, com elevados custos ao Sistema Único de Saúde pública (SUS), do Brasil. As afecções denominadas de “pé diabético” são as mais comuns e, frequentemente, geram limitações e prejuízos na qualidade de vida de seu portador. Partindo deste pressuposto, faz-se necessária a busca de alternativas para controle e mitigação desse tipo de complicação. Neste sentido, o tratamento com Plasma Não Térmico (PNT) constitui uma nova abordagem terapêutica para tratamento não invasivo de lesões de pé diabético. Estudos iniciais indicam que esse método terapêutico apresenta ação antibacteriana, acelerando o processo de reparo do tecido cutâneo, com menor risco de efeitos nocivos. Considerando o exposto, o presente estudo tem por objetivo avaliar a evolução do processo de reparo tecidual após aplicação do PNT no tratamento de lesões em pé diabético considerando as características macroscópicas da lesão e a intensidade da dor antes e após o tratamento, correlacionando essas variáveis à qualidade de vida expressa pelos participantes.São relatados casos clínicos de dois pacientes com DM não controlado portadores de lesões em membros inferiores com localização anatômica e dimensões semelhantes. O PNT foi aplicado em 3 sessões por semana, utilizando-se, inicialmente, o eletrodo esférico menor, com aplicação direta em todo o leito da lesão pelo período de 10 minutos. Na sequência foi utilizado o eletrodo de plasma de microcorrente, com ação cauterizadora, por 10 minutos, aplicado sobre as bordas da lesão somente em pontos de sangramentos. A avaliação do processo de reparo incluiu análise comparativa das imagens da área das lesões e os resultados obtidos com a aplicação dos instrumentos Escala Visual Analógica da dor – EVA,Formulário SF-36, que afere a qualidade de vida e o protocolo de acompanhamento de lesão em todas as consultas de acompanhamento. Os resultados obtidos nos dois casos clínicos permitiram comprovar que a aplicação de PNT no tratamento de lesões em pé diabético decorrentes do DM constitui importante ferramenta terapêutica favorecendo a evolução do processo de cicatrização, com expressiva redução da área da lesão, em curto intervalo de tempo. Paciente A recebeu 20 sessões em um total de 48 dias, enquanto no Paciente B foram realizadas 22 sessões, em 52 dias. Além da cura das lesões em ambos os pacientes, os resultados mostraram redução da dor emelhora na qualidade de vida. A definição de protocolos efetivos de tratamento ainda estão em fase de comprovação, sendo necessária a expansão do número de estudos e aumento da população estudada para sua inserção na prática clínica.
Ação da terapia fotodinâmica com curcumina na interação de macrófagos e amastigotas de L. braziliensis e L. major
(2021-09-21) Ferreira, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Silva, Newton Soares da; Ribeiro, Martha Simões; Lindoso, José Angelo Lauletta; Pereira, André Henrique Correia; São José dos Campos
A leishmaniose tegumentar (LT) é uma doença negligenciada que está entre as 10 doenças infecciosas mais importantes do mundo. O tratamento convencional é feito com antimoniais pentavalentes e anfotericina, medicamentos que apresentam diversos efeitos colaterais e contraindicações. A terapia fotodinâmica (TFD) com curcumina surge como alternativa no tratamento da LT, visto que se baseia em aplicação local, não invasiva e seletiva, enquanto utiliza um composto natural de baixo custo como fotossensibilizador. Esse trabalho teve por objetivo a avaliação, in vitro, da TFD aplicada sobre amastigotas de L. braziliensis e L. major em interação com macrófagos por meio de análise de viabilidade, morfologia, internalização do FS, atividade e potencial de membrana mitocondrial e recuperação de parasitos pósTFD. Foram utilizadas concentrações de curcumina em diluições seriadas, de 500 a 7,8 µg.mL-1, e irradiação com luz azul (450 nm), irradiância de 36 mW/cm² e fluência de 10 J/cm². Os resultados demonstram ampla inativação e baixa citotoxicidade da TFD com curcumina em macrófagos infectados e não infectados nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1. A internalização do FS demonstrou localização do composto em todo o citoplasma da célula, além de concentração no núcleo, e nos amastigotas intracelulares. A morfologia pós-tratamento se mostrou alterada, exibindo destruição celular nos grupos submetidos à TFD, enquanto os grupos não tratados permaneceram com a morfologia dos macrófagos preservada. Foi observada elevação do potencial de membrana mitocondrial e diminuição da atividade mitocondrial nos grupos que receberam a terapia. Além disso, a contagem de parasitos recuperados pós-TFD demonstrou que houve diminuição do número de parasitos viáveis, indicando que a terapia pôde inativar não só os macrófagos, mas também os amastigotas intracelulares para as duas espécies de Leishmania estudadas. Os testes realizados demonstraram potencial da TFD com curcumina nas concentrações de 15,6 e 7,8 µg.mL-1, promovendo a inativação de macrófagos infectados com Leishmania, bem como alterações celulares morfológicas e nopotencial de membrana e atividade mitocondrial.
Efeito da terapia fotodinâmica com curcumina em promastigotas e curcumina nanoencapsulada em amastigotas de Leishmania braziliensis e Leishmania major
(2021-09-24) Ferreira, Juliana; Soares, Cristina Pacheco; Sant'Anna, Luciana Barros; Ribeiro, Martha Simões; Tada, Dayane Batista; Marcolino, Luciana Maria Cortez; São José dos Campos
A leishmaniose tegumentar é uma doença zoonótica, transmitida por fêmeas de flebotomíneos e causada por protozoários do gênero Leishmania. É considerada pela OMS um problema de saúde pública que nos últimos anos apresentou aumento significativo, tanto no número de casos quanto na distribuição geográfica. O tratamento convencional é tóxico e contraindicado para pacientes que apresentam algumas comorbidades e pode causar diversos efeitos colaterais graves. Tendo em vista uma alternativa de tratamento não agressivo vem se estudando a Terapia Fotodinâmica, que consiste em um tratamento não invasivo, não apresenta efeitos colaterais, de fácil acesso que utiliza substâncias de baixo custo, como a curcumina. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da curcumina livre em promastigotas e curcumina nanoencapsuladas em amastigotas de espécies de Leishmanias. Para isso os promastigotas foram incubados com curcumina livre divididos em grupo escuro e irradiado, além do grupo controle escuro e apenas irradiado. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste de exclusão com azul de tripan, a atividade mitocondrial por MTT, as alterações morfológicas por MEV. Para analisar o tipo de morte celular utulizou-se os marcadores Anexina V e iodeto de propídio e para avaliar o potencial de membrana mitocondrial o JC-1, para isso foram obtidas as imagens por microscopia confocal e a fluorescência emitida pelos marcadores foram quantificadas utilizando o software ImageJ. Para analisar a produção de espécies reativas de oxigênio utilizou-se o reagente H2DCF-DA e a fragmentação de DNA foi verificada pelo teste do cometa. Verificou-se a diminuição da viabilidade dos parasitas bem como alterações na atividade mitocondrial. A TFD provocou alterações no potencial de membrana mitocondrial das duas espécies, independentemente do tempo de análise (imediatamente ou 18 horas após tratamento). A produção de ERO foi concentraçãodependente e foi observada apenas nos grupos submetidos à TFD e a espécie L. braziliensis apresentou maior produção de ERO que L. major, no entanto L. braziliensis foi mais resistente que L. major quando analisada a viabilidade após TFD. Os danos no DNA também foram observados nas duas espécies, é sugestivo que a apoptose prevaleceu na espécie L. braziliensis. A morfologia das células foi afetada, principalmente na concentração mais elevada de curcumina, deixando as células arredondadas e flagelo encurtado. Os resultados apoiam o uso da curcumina como fotossensibilizador na TFD contra células de Leishmania. Foram testadas também nanopartículas de BSA associada a curcumina em amastigotas de L. braziliensis e L. major. Para isso macrófagos e macrófagos infectados com Leishmanias foram incubados com a curcumina encapsulada em BSA catiônica e aniônica. Foram realizados testes de viabilidade pelo método de exclusão com azul de tripan, onde foi verificado que apenas a concentração 0,7 µmol. L1 da BSA-Cur catiônica demonstrou redução na viabilidade das células e as concentrações de 0,1 e 0,08 µmol. L-1 da BSA-Cur aniônica reduziu a viabilidade das células, já a concentração de 0,7 µmol. L-1 foi citotóxica. A análise através da microscopia confocal foi realizada para verificar se as nanopartículas eram internalizadas pelos macrófagos e pode-se verificar que as nanopartículas catiônicas e aniônicas se encontravam dentro dos macrófagos e protozoários. Por fim foi realizado teste de viabilidade com os fibroblastos e verificou-se que as nanopartículas não afetaram a viabilidade dessa linhagem celular, no entanto a curcumina livre promoveu diminuição da viabilidade dos fibroblastos após tratamento. Os resultados obtidos foram satisfatórios, demonstrando a capacidade das nanopartículas reduzirem a viabilidade das células em menores concentrações do que a curcumina livre.

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